载脂蛋白AI和高密度脂蛋白对内皮细胞保护作用的实验观察

目的观察高密度脂蛋白（ＨＤＬ）和载脂蛋白ＡＩ（ａｐｏＡＩ）在保护血管内皮细胞拮抗低密度脂蛋白（ＬＤＬ）损伤方面的作用。方法细胞形态观察、计数细胞成活率、测定乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放百分比和６－酮－前列环素Ｆ_（１α）（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ_（１α））。结果预加入ＨＤＬ或ａｐｏＡＩ（１００μｇ／ｍｌ），细胞再受到较大剂量（１５００μｇ／ｍｌ）的ＬＤＬ损伤时，不发生显著形态变化，细胞成活率由２５．０％（ＬＤＬ组）提高到９１．８％（ＨＤＬ＋ＬＤＬ组）和８９．７％（ａｐｏＡＩ＋ＬＤＬ组）；细胞膜的完整性增强，ＬＤＨ释放百分比由７２．０％±５．５％（ＬＤＬ组）降至２６．８％±３．４％（ＨＤＬ＋ＬＤＬ组）和２９．４％±４．５％（ａｐｏＡＩ＋ＬＤＬ组）；促进细胞自身分泌前列环素，使６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ_（１α）的含量由７．８±１．４μｇ／ｍｌ（ＬＤＬ组）增至１６．５±４．３μｇ／ｍｌ（ＨＤＬ＋ＬＤＬ组）和１４．２＋１．９μｇ／ｍｌ（ａｐｏＡＩ＋ＬＤＬ组）。结论在拮抗ＬＤＬ损伤时，ａｐｏＡＩ和ＨＤＬ在维持细胞形态、保持细胞膜完整性以及增加细胞自身分泌等方面作用近似。     

槲皮素对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 :研究槲皮素对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。　　方法 :实验分对照组、模型组和槲皮素组 ,用过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤 ,四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量 ,放射免疫法测定细胞培养液中的内皮素及前列环素含量 ,用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛以评价脂质过氧化程度。　　结果 :槲皮素 5、2 0、40、80和 10 0 μmol/ L 促进培养的正常血管内皮细胞增殖 ,增加前列环素生成 ,减少内皮素基础释放量 ;75 μmol/ L过氧化氢可损伤培养的血管内皮细胞 ;槲皮素 5、2 0和 80 μmol/ L 可抑制过氧化氢损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶、内皮素及促进损伤的内皮细胞释放前列环素。　　结论 :槲皮素具有保护血管内皮细胞损伤的作用 ,其机制可能与其抗脂质过氧化作用有关。     

高密度脂蛋白对肾小球系膜细胞损伤的保护作用

利用体外培养的人肾小球系膜细胞，观察了高密度脂蛋白对其生长、释放血小板活化因子和乳酸脱氢酶的影响，同时还研究了高密度脂蛋白对低密度脂蛋白所致系膜细胞增殖的影响。结果发现，高密度脂蛋白有轻度抑制系膜细胞增殖的作用，几乎不增加细胞血小板活化因子和乳酸脱氢酶的释放。低密度脂蛋白浓度为球系膜细胞的损伤有一定保护作用，至少不增加低这旨蛋白的肾毒性。     

异鼠李素对氧化型低密度脂蛋白所致内皮细胞凋亡的影响

目的 观察异鼠李素对氧化型低密度脂蛋白所致内皮细胞凋亡的保护作用,并对其作用机制进行探讨.方法 采用MTT法测定细胞活力,试剂盒测定乳酸脱氢酶含量,Griess法测定一氧化氮含量,JC-1、吖啶橙和溴化乙啶荧光染色法对其线粒体膜电位及细胞存活情况进行分析,流式细胞术评价细胞凋亡率,半定量RT-PCR法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1和Caspase-3 mRNA的表达.结果 异鼠李素(10-7 μmoL/L、10-6μmol/L和10-5μmoL/L)预培养能显著抑制氧化型低密度脂蛋白所致内皮细胞活力降低、线粒体乳酸脱氢酶释放增加及一氧化氮释放降低(P<0.05),明显抑制氧化型低密度脂蛋白所致线粒体膜电位降低和细胞凋亡,并呈剂量依赖性:异鼠李素(10-7μmoL/L、10-6μmoL/L和10-5μmoL/L)能显著抑制氧化型低密度脂蛋白所致凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1和Caspase-3 mRNA表达升高(P<0.01),并呈一定的量效关系.结论 异鼠李素对氧化型低密度脂蛋白所致内皮细胞凋亡呈现显著的保护作用,其机制可能与抑制氧化型低密度脂蛋白损伤引起的凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1和Caspase-3 mRNA表达上调以及一氧化氮释放降低有关.     

金粉蕨素对溶血性磷脂酰胆碱损伤血管内皮依赖性舒张功能的保护作用及机制

为了观察金粉蕨素对溶血性磷脂酰胆碱损伤血管内皮依赖性舒张功能的保护作用及机制 ,采用离体血管环张力实验法 ,用金粉蕨素和溶血性磷脂酰胆碱共同孵育血管环 ,发现乙酰胆碱诱导的血管舒张百分比由损伤时的 16 .1%± 3.5 %上升到 42 .1%± 8.0 %。一氧化氮合酶抑制剂N -硝基 -L -精氨酸和环氧酶抑制剂吲哚美辛可阻断金粉蕨素的保护作用。此外 ,在培养的人脐静脉内皮细胞上 ,采用DGKC法测定乳酸脱氢酶 ,观察到金粉蕨素使内皮细胞乳酸脱氢酶含量由溶血性磷脂酰胆碱损伤时的 115 .3± 48.3IU/L下降到 30 .8± 5 .4IU/L。同样 ,N -硝基 -L -精氨酸和吲哚美辛可阻断金粉蕨素的保护作用 ,使乳酸脱氢酶释放分别恢复到 91.3± 2 7.6IU/L和 10 4.5± 15 .7IU/L。结果提示 :金粉蕨素保护血管内皮依赖性舒张功能可能与促进内皮细胞释放一氧化氮和前列环素有关。     

维生素E对氧化型低密度脂蛋白致大鼠主动脉平滑肌细胞毒性及增殖的影响

为探讨抗氧化剂维生素E对氧化型低密度脂蛋白致大鼠主动脉平滑肌细胞毒性作用及增殖的影响,以乳酸脱氢酶及^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷、^3H-亮氨酸掺入分别测定平滑肌细胞损伤和增殖。结果显示,维生素E可明显抑制高浓度氧化型低密度脂蛋白（＞300μg/L）引起的平滑肌细胞释放乳酸脱氢酶,并能有效抑制低浓度氧化型低密度脂蛋白（＜300μg/L）引起的平滑肌细胞^3H- 胸腺嘧啶脱氧核苷、^3H-亮氨酸的掺入,二者均具有剂量依赖性。提示抗氧化剂维生素E对氧化型低密度脂蛋白引起的平滑肌细胞损伤有保护作用,对其引起的增殖有抑制作用。     

5脂氧合酶激活蛋白介导入脐静脉内皮细胞氧化损伤

目的探讨5脂氧合酶激活蛋白在人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的机制。方法体外分离、培养人脐静脉内皮细胞，分别用10、50、100和200mg／L氧化型低密度脂蛋白处理细胞24h，采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液白三烯C4水平，MTT法检测细胞活力，以及实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞5脂氧合酶激活蛋白mRNA及蛋白表达的变化。结果100mg／L和200mg／L氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞24h细胞活力显著下降（P〈0．01），白三烯C4分泌显著增加（P〈0．01），回归分析显示白三烯C4释放量与氧化型低密度脂蛋白浓度显著相关（r=0．953，P〈0．01）。PCR和Western blot分析发现，5脂氧合酶激活蛋白mRNA表达和蛋白表达均显著增强（P〈0．01和P〈0．05）。结论氧化型低密度脂蛋白促进人脐静脉内皮细胞分泌白三烯C4，导致人脐静脉内皮细胞氧化损伤可能与5脂氧合酶激活蛋白异常表达有关。     

载脂蛋白AⅠ和高密度脂蛋白对内皮细胞保护作用的对比实验观察

载脂蛋白ＡⅠ和高密度脂蛋白对内皮细胞保护作用的对比实验观察刘清华，蒋雷，金军华，李健斋（卫生部北京老年医学研究所，北京医院１００７３０）对比观察高密度脂蛋白和载脂蛋白Ａ－Ⅰ在保护血管内皮细胞拮抗低密度脂蛋白损伤方面的作用。实验表明：预加入高密度脂蛋白...     

氧化型低密度脂蛋白和抗氧化剂对人血管内皮细胞钙转运的影响

为探讨氧化型低密度脂蛋白和抗氧化剂对内皮细胞钙转运功能的影响 ,揭示氧化型低密度脂蛋白毒性作用的分子机制和预防措施 ,采用体外培养的人脐静脉内皮细胞 ,单独给予氧化型低密度脂蛋白及同时给予氧化型低密度脂蛋白和抗氧化剂维生素E ,分别测定细胞钙摄取和释放功能 ,并测定细胞及上清液乳酸脱氢酶活性 ,计算细胞死亡率。结果发现 ,氧化型低密度脂蛋白呈剂量依赖性增加细胞死亡率 ,同时刺激内皮细胞钙摄取增加 ,对钙释放无影响 ,维生素E可抑制氧化型低密度脂蛋白的上述作用。结果提示 ,氧化型低密度脂蛋白刺激内皮细胞钙摄取可能是其致内皮细胞损伤的机制 ,维生素E通过抑制此作用而达到细胞保护的效应。     

依那普利抑制同型半胱氨酸致血管内皮损伤的保护作用

目的 探讨依那普利对同型半胱氨酸（Hcy）引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法 取大鼠主动脉内皮细胞，培养并传代备用，进行血管内皮细胞药物保护实验。分为正常对照组（正常组）:不加Hcy及依那普利；损伤组:给予Hcy 2000 μmol/L；干预组:在给予Hcy 2000 μmol/L的同时再给予依那普利，依那普利的浓度不同又分为干预A、B、C、D和E组，其依那普利的浓度依次为10，20,40,80和160 nmol/L。内皮细胞的鉴定利用因子VIII间接免疫荧光；利用光学仪器进行血管内皮细胞形态学观察；测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）的活性；利用CCK8试剂检测各组血管内皮细胞活力；利用细胞计数板测定活细胞百分率。 结果 :① Hcy损伤组血管内皮细胞呈现出细胞损伤形态学改变；② 各组细胞LDH活性与正常对照组(100%)比较分别为:损伤组细胞LDH活性为（157 ± 17）%，干预C组（依那普利浓度40 nmol/L）细胞活性为（126 ± 7）%。干预C组较损伤组LDH活性显组降低（P<0.01）;③血管内皮细胞活力:正常组细胞活力定为 100%，损伤组为（52 ± 6）%，干预C组为（75 ± 6）%。干预C组细胞活力较损伤组相比细胞活力显著升高（P<0.01）；④ 活细胞百分率测定，与正常对照组[（98 ± 1）%]比较，损伤组活细胞比例[（72 ± 4）%]显著降低（P<0.01）；干预C组活细胞比例为(87 ± 3)% 较损伤组显著增加（P<0.01）。 结论 依那普利可改善Hcy对血管内皮细胞的损伤，具有保护作用。     

褪黑素对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的研究褪黑素对脂多糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,以及对其机制探讨。方法在体外建立脂多糖血管内皮细胞损伤模型,添加不同浓度的褪黑素（低剂量组100μmol／L,高剂量组500μmol／L）,采用MTT法观察褪黑素对血管内皮细胞存活率的影响;用流式细胞仪检测细胞凋亡率,细胞免疫荧光技术检测细胞色素C的释放;用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞裂解液中超氧化物歧化酶的浓度;用划痕修复实验检测血管内皮细胞的迁移功能。结果脂多糖损伤后,血管内皮细胞存活率减少约50％,凋亡细胞百分比增加35．7％,细胞色素c大量释放到细胞质中,细胞裂解液中超氧化物歧化酶浓度下降约50％,且血管内皮细胞的迁移能力受损。加入褪黑素后,可明显减轻脂多糖对细胞的损伤作用,恢复细胞存活率至70％-80％,减少细胞凋亡率至15．1％-20．6％,保护细胞的迁移能力,且呈剂量依赖性,高剂量组的效果明显好于低剂量组,各指标差异有统计学意义（P〈0．05）。结论褪黑素可保护和修复脂多糖引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与抑制细胞凋亡．减轻氧化损伤以及保护迁移功能有关。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对25例内源性高甘油三酯血症患者与25例年龄性别相匹配的正常人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白的电泳迁移率、234nm光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变进行了测定。结果表明，内源性高甘油三酯血症患者血浆甘油三酯、脂过氧化物和载脂蛋白B100、CⅢ、CⅢ及E显著升高（P＜0．01），高密度脂蛋白和载脂蛋白AⅠ显著降低（P＜0．01），低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白电泳迁移率均较正常人相应脂蛋白的迁移率增加，234nm光吸收及硫代巴比妥酸反应物质含量均显著增加（P＜0．01）。说明内源性高甘油三酯血症患者不仅血浆低密度脂蛋白、而且极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均发生了氧化修饰。     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白抑制的血管平滑肌细胞一氧化氮释放的影响

为观察高密度脂蛋白是否能拮抗氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞释放一氧化氮的抑制作用，培养了人脐动脉平滑肌细胞并用脂多糖和γ-干扰素诱导一氧化氮的释放。应用GRIESS试剂测定细胞培养基中亚硝酸盐的含量．以免疫组织化学染色和逆转录--聚合酶链反应分析诱导型一氧化氮合酶基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白可使脂多糖和γ-干扰素诱导的平滑肌细胞一氧化氮合酶及其mRNA水平下降、抑制一氧化氮释放。而高密度脂蛋白能拮抗氧化型低密度脂蛋白对平滑队细胞释放一氧化氮的抑制作用。0．25g／L高密度脂蛋白即能显著增加一氧化氮的释放（P＜0．05），高密度脂蛋白浓度达到1．5g／L可使得一氧化氮的释放增加4．5倍。结果表明，高密度脂蛋白能提高一氧化氮合酶基因表达水平，促进一氧化氮的释放。高密度脂蛋白的作用具有浓度效应。     

小干扰RNA对人内皮细胞株类表皮生长因子域7基因表达抑制作用的实验研究

目的 研究小干扰RNA（siRNA）对类表皮生长因子域7（egfl7）基因表达的抑制作用。方法 利用Ambion公司设计合成的以egfl7为靶标的siRNA,通过脂质体将siRNA转入人脐静脉内皮细胞株,以未转染siRNA细胞和转染无关siRNA细胞为对照,利用MTS[3-（4,5-dimethyhhiaz-2-y1）-5（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfopheny）-2H-tetrazolium,innersalt]法检测siRNA对细胞存活率的影响,同时检测乳酸脱氢酶和三磷酸腺苷,观察siRNA对细胞生长的影响,RT-PCR法检测egfl7mRNA水平的改变,Westernblot检测egfl7蛋白表达的变化。结果 siRNA各组与对照组细胞存活率差异均有统计学意义（P〈0．05）,乳酸脱氢酶及三磷酸腺苷释放量差异也存在统计学意义（P〈0．01）。转染24h后,siRNA组egfl7mRNA与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）,同时egfl7蛋白表达也被明显抑制（P〈0．01）,其中siRNA1的抑制效率最高。结论 体外转录合成的siRNA可抑制人脐静脉内皮细胞egfl7基因的表达。     

冠状动脉粥样硬化斑块组成成分与斑块破裂的关系

为观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞一氧化氮生成的影响,采用体外细胞培养方法将含不同浓度氧化型低密度脂蛋白的ＤＭＥＭ 培养液（ 氧化型低密度脂蛋白终浓度分别为０ ｍｇＬ、５０ ｍｇＬ 、１００ ｍｇＬ 、２００ ｍｇＬ）,与内皮细胞共同孵育（３７ ℃、５％ ＣＯ２）２４ ｈ 后,分别测上清液中乳酸脱氢酶活性和一氧化氮含量及细胞中一氧化氮合酶活性,并用细胞化学染色法记数各组细胞一氧化氮合酶阳性染色细胞数。结果发现,随着培养液中氧化型低密度脂蛋白浓度升高,上清液中乳酸脱氢酶活性增加和一氧化氮含量下降,细胞中一氧化氮合酶活性和一氧化氮合酶阳性染色细胞数下降,可见,氧化型低密度脂蛋白可损伤血管内皮细胞,降低细胞中一氧化氮合酶活性,抑制一氧化氮产生,这可能是氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的原因之一。     

低密度脂蛋白和高密度脂蛋白对动脉内皮细胞一氧化氮生成的影响

为研究高密度脂蛋白和低密度脂蛋白对动脉内皮细胞一氧化氮合成的影响,以豚鼠动脉内皮细胞为实验对象,用低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及两者以不同剂量混合加入培养基中,每组设置三种剂量,分别于２ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ测定一氧化氮含量。结果发现,高密度脂蛋白促进内皮细胞一氧化氮的合成（Ｐ〉０．０５）,与剂量大小无关;低密度脂蛋白显著抑制一氧化氮的合成（Ｐ〈０．００１）,与剂量相关;混合组同样明显抑制其合成,     

氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤

探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用 ,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的途径探讨损伤作用的机制。用1 2 5I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,2 ,4 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性 ,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率。结果发现 ,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点 ,Scatchard分析Kd为 38.4± 18.8mg L、Bmax为 181.5± 5 5 .5ng 10 6 cells。氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用 2 4h ,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加 ,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量 ,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用。结果提示 ,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的受体途径。     

瓜蒌皮提取物对人脐带静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究瓜蒌皮提取物（EPT）对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法在培养的人脐带静脉内皮细胞中加入OX-LDL（100mg／L）诱导内皮细胞损伤。检测细胞培养液中非对称性二甲基精氨酸（ADMA）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果体外给予OX-LDL（100mg／L）显著诱导内皮细胞损伤,提高培养液中ADMA、MDA、LDH、和TNF-α水平,降低NO和DDAH水平。两种洗脱（水和70％乙醇洗脱）瓜蒌皮提取物均能显著抑制OX—LDL所致的ADMA、MDA、LDH和TNF-α浓度升高和NO、DDAH降低。结论瓜蒌皮提取物对OX—LDL诱导的人脐带静脉血管内皮细胞损伤有保护作用,其保护作用与降低ADMA和TNF-α浓度有关。     

丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮的保护作用

用培养的人脐静脉内皮细胞为对象，用~3H-TdR掺入法，观察了抗氧化剂丙丁酚对氧化型低密度脂蛋白作用下的内皮细胞DNA合成的保护作用，并用扫描电子显微镜观察其对培养细胞形态结构的影响．结果发现，在作用24h后，氧化型低密度脂蛋白组的~3H－TdR掺入量是天然低密度脂蛋白组的48％，是丙丁酚组的56％（P＜0．001），超微结构显示丙丁酚组的细胞结构保持正常，而氧化型低密度脂蛋白组则受到破坏．本实验显示丙丁酚对内皮细胞的氧自由基损伤有明显的保护作用．     

转染血红素加氧酶1基因对高糖和高脂诱导内皮细胞损伤的影响

目的探讨血红素加氧酶1对高浓度软脂酸和葡萄糖诱导的内皮细胞损伤的影响.方法利用逆转录病毒介导的基因转染技术将血红素加氧酶1基因转染入人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞).应用逆转录-聚合酶链反应检测转染细胞血红素加氧酶1mRNA表达水平.将未转染和转染血红素加氧酶1基因的内皮细胞分别培养于含不同浓度的葡萄糖和/或软脂酸的培养基中,培养48h后,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶释放率和细胞脂质过氧化产物丙二醛的含量.结果血红素加氧酶1基因在转染内皮细胞的表达显著升高;未转染细胞在20mmol/L 葡萄糖和不同浓度软脂酸共同培养后存活率明显下降,乳酸脱氢酶释放率和丙二醛含量增高;而转染细胞存活率较相同处理因素的未转染细胞提高,乳酸脱氢酶释放率和丙二醛含量下降;应用血红素加氧酶1抑制剂锌原卟啉后,上述保护作用消失.结论血红素加氧酶1基因的表达上调可减轻高糖和高脂对内皮细胞的损伤,其机制与抑制细胞内氧化应激反应有关.