钩吻生物碱单体对肝癌细胞体外抑制作用机制的初步研究

目的:探讨植物钩吻中生物碱单体对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法:MTT法观察3种生物碱单体对HepG2细胞的体外杀伤作用,选取活性最好的单体进一步行时效、量效关系的测定和细胞形态学观察;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;Capspase-3、Capspase-8、Capspase-9活性检测用分光光度法进行。结果:3种单体都显示出对HepG2细胞的增殖抑制活性,其中钩吻素己效果最好,呈时间及剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖;经钩吻素己处理48 h后的HepG2细胞变小变圆,正常贴壁细胞随着药物浓度的增加而减少;各浓度组钩吻素己可阻滞细胞于S期,并诱导细胞凋亡,且Capspase-3、Capspase-8、Capspase-9活性随着药物浓度的增高而增高。结论:3种钩吻生物碱单体中钩吻素己能显著抑制HepG2细胞体外增殖且细胞毒性较小,并通过影响细胞周期分布和激活Capspase-8、Capspase-9进而活化Capspase-3发挥抗肿瘤作用。     

粗叶悬钩子总生物碱对人肝癌细胞增殖的影响

目的探讨粗叶悬钩子总生物碱对人肝癌细胞(HepG2)增殖的影响。方法分别用不同剂量总生物碱干预体外培养的HepG2,观察细胞形态,并用MTT法检测该总生物碱对HepG2细胞活力的影响及其对HepG2的抑制作用。结果粗叶悬钩子总生物碱干预24h后,浓度达1000μg/mL对肝癌细胞才有抑制作用,作用48h和72h后,各组呈现明显的剂量和时间依赖;MTT法结果显示生物碱作用HepG248h和72h后,有显著抑制作用。结论粗叶悬钩子总生物碱能有效地抑制HepG2细胞的增殖。     

钩吻总碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨钩吻总生物碱提取物(钩吻总碱)促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:钩吻总碱体外干预HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察HT-29细胞的凋亡情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察HT-29细胞B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2 mRNA表达情况,利用紫外分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)表达量的变化。结果:钩吻总碱可抑制HT-29细胞增殖,200 mg·L~(-1)钩吻总碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达54.17%。DAPI染色及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察到钩吻总碱可促进HT-29细胞凋亡。RT-PCR观察到钩吻总碱能降低HT-29细胞Bcl-2 mRNA表达(P0.05),对Bax mRNA表达无明显影响,提高了Bax/Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。利用紫外分光光度法检测到随着钩吻总碱浓度的升高,HT-29细胞的Caspase-3表达呈上升趋势(P0.05)。结论:钩吻总碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bax/Bcl-2途径诱导细胞凋亡相关。     

不同生长年限仿野生铁皮石斛醇提物的抗肿瘤活性比较

目的研究不同生长年限的仿野生铁皮石斛醇提物(EIWD)对人肝癌细胞(HepG2)、宫颈癌细胞(Hela)的抗肿瘤活性。方法以体外培养的HepG2、Hela为对象,MTT法检测细胞活性、荧光染色法检测细胞凋亡形态、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各EIWD对HepG2、Hela的抗肿瘤活性。结果 1,2,3年生EIWD对HepG2、Hela具有明显的抑制作用(P0.01),对Hela的抑制作用有明显的时间和浓度的依赖性;Hoechest 33258荧光染色法可见EIWD可诱导肿瘤细胞呈典型的凋亡形态,细胞核皱缩、破碎,显亮蓝色荧光;流式细胞仪检测显示EIWD可提高肿瘤细胞的凋亡率。结论不同生长年限的EIWD对HepG2、Hela有抗增殖作用,其中对Hela抗肿瘤活性作用较明显,且生长期限较长的EIWD活性作用较强;可使肿瘤细胞出现典型的凋亡形态,具有促进凋亡作用。     

白及多糖体外抗肿瘤实验研究

目的探讨白及多糖的抗肿瘤作用。方法体外细胞培养的人胃癌细胞(sgc)、人卵巢癌细胞(A2780)和肝癌细胞(HepG2)经不同剂量白及多糖处理后,应用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪测定白及多糖对3种肿瘤细胞周期的影响。结果白及多糖对sgc、A2780和HepG2的增殖抑制作用具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测显示经200μg/mL白及多糖作用72 h后,sgc G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少;A2780 S期细胞增多,G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞无明显变化;HepG2 G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少。结论白及多糖可通过抑制sgc、A2780和HepG2的生长增殖、细胞周期阻滞作用发挥抗肿瘤作用。     

15种中药生物碱类化合物与4-磺酰基杯[6]芳烃的键合作用评价及其键合体系对HepG2和H9c2细胞增殖的抑制作用考察

目的 考察15种中药生物碱类化合物（苦参碱、槐定碱、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、奎尼丁、奎宁、野百合碱、长春新碱、钩吻素甲、钩吻素子、粉防己碱、苦豆碱、氧化苦参碱、槐果碱、青藤碱）与4-磺酰基杯［6］芳烃（SCA6）的键合能力，并探究除槐定碱、氧化苦参碱、青藤碱外，其余12种生物碱及其键合体系对HepG2和H9c2细胞生存率的影响。方法 采用荧光竞争滴定法测定生物碱与SCA6的键合常数，利用细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）法考察生物碱/SCA6键合体系对人肝癌细胞HepG2和鼠源性心肌细胞H9c2增殖的抑制作用。结果 15种中药生物碱类化合物与SCA6均以1∶1比例键合良好（键合常数均>1×10⁵ mol·L^-1，R²>0.98），其中苦豆碱（喹诺里西啶类生物碱）与SCA6键合能力最强（键合常数20.55×10⁶ mol·L^-1）。除钩吻素甲、野百合碱、苦参碱和槐果碱外，苦豆碱、粉防己碱、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、奎尼丁、奎宁、长春新碱和钩吻素子8种生物碱对HepG2均有较强的体外抗肿瘤作用。除蝙蝠葛苏林碱外，其余11种生物碱与SCA6键合前后对HepG2细胞增殖的抑制作用无明显差异；除钩吻素甲、野百合碱、苦参碱和槐果碱外，其余8种生物碱与SCA6键合前后对H9c2细胞增殖的抑制作用无明显差异。结论 SCA6易与双苄基异喹啉类、喹诺里西啶类、吲哚类生物碱发生键合，显著改善生物碱溶解度且不影响其自身的抗肿瘤作用，可为SCA6构建药物传递体系方面的相关应用提供参考。     

蒙药梅花草乙醇提取物对肝癌细胞增殖作用的实验研究

目的:研究蒙药梅花草的乙醇提取物对人肝癌细胞(HepG2细胞)的体外增殖抑制作用。方法:采用MTT法检测梅花草乙醇提取物的不同剂量组对HepG2细胞增殖的抑制作用;ELISA检测HepG2细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达变化情况。结果:梅花草乙醇提取物处理HepG2细胞24h后,可以明显抑制HepG2细胞的增殖。与对照组相比,梅花草的乙醇提取物可以明显升高HepG2细胞的Bax蛋白水平,降低Bcl-2蛋白水平(P0.05和P0.05)。结论:蒙药梅花草的乙醇提取物体外对HepG2细胞的增殖有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。     

钩吻总碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的研究钩吻总碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法制备CAM模型,取50个鸡胚随机分为5组:空白对照组、阳性对照组及实验组(钩吻总碱高、中、低剂量组),于CAM上植入混合纤维素酯微孔滤膜药物载体,实验组加入不同浓度的钩吻总碱,空白对照组不加药品,阳性对照组加入PBS溶液,观察各组CAM新生血管生长的情况。结果钩吻总碱高、中剂量组及阳性对照组均有抑制CAM新生血管生成作用,而钩吻总碱低剂量组无抑制作用,与空白对照组作用相当。结论钩吻总碱具有抑制CAM新生血管生成的作用,并呈量效关系。     

钩吻总碱的抗炎作用研究

钩吻总碱对角叉菜胶性和蛋清性大鼠足爪肿胀及棉球肉芽肿增生均有明显抑制作用,对幼年大鼠的胸腺及肾上腺重量无明显影响,对大鼠血浆皮质醇含量也无明显影响。钩吻总碱能使大鼠炎性组织释放的PGE的量明显降低。     

大蓟对5种癌细胞抑制作用的研究

目的：研究大蓟对癌细胞生长的抑制作用。方法：细胞形态观察、活细胞计数法和克隆形成率法研究大蓟对人白血病细胞K562、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞Hela、胃癌细胞BC,C823、结肠癌细胞HT-29生长的抑制作用。结果：大蓟可使五种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、裂碎等变化，生长受到明显抑制，抑制率最高可达81．73％。结论：大蓟有确切的抑癌作用。     

漏芦对油酸诱导HepG2细胞脂肪累积的干预作用

目的:通过体外肝细胞脂肪累积模型评价漏芦清除肝细胞脂肪累积的干预能力。方法:用油酸诱导HepG2细胞脂肪累积建立模型;以噻唑兰染色吸光度(OD值)、甘油三酯(TG)含量变化为指标,结合细胞内脂滴形态,评价漏芦对油酸诱导HepG2细胞脂肪累积的干预作用。结果:漏芦能显著降低油酸诱导的肝细胞脂肪累积,其中250μg.mL-1漏芦提取液对TG的清除率达到14.22%。结论:漏芦对油酸诱导HepG2细胞脂肪累积具有干预作用。     

消瘤汤抗肿瘤作用的实验研究

目的:探讨中药复方消瘤汤对小鼠肝癌模型的抗肿瘤作用。方法:用腋下注射Hep G2细胞造成小鼠腋下皮下肿瘤移植模型,给予小鼠消瘤汤灌胃后查看对肿瘤组织的抑制作用;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测消瘤汤含药血清对HepG2细胞的生长抑制作用;用PCR ELISA法测定HepG2细胞端粒酶的活性。结果:药物组瘤重明显比生理盐水组小,以大剂量组最为明显,抑制率达41.88%;MTT法显示肿瘤细胞抑制率与药物剂量呈直线关系;消瘤汤大剂量组对肝癌组织端粒酶活性有明显的抑制作用(P<0.01)。结论:消瘤汤有明显的抗实验性小鼠肝癌的作用,有可能与抑制肿瘤细胞端粒酶活性有关。     

槐果碱体外对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg HBeAg的影响

目的:探讨槐果碱的体外抗乙型肝炎病毒作用。方法:采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐果碱,以拉米夫定作阳性对照,作用9天后检测上清液中HBsAg、HBeAg的分泌,观察药物对HepG2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,同时以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,从而评价药物的抗HBV作用。结果:药物作用9天后,槐果碱对HepG2.2.15细胞的50%生长抑制率(TC50)为0.002M,对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的50%抑制率(IC50)为4.9uM,其治疗指数(TI=TC50/IC50)为408.16;而拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%。槐果碱对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率在所选浓度范围内均低于50%,但明显优于拉米夫定对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率。结论:槐果碱在体外具有显著的抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用,是一个高效低毒的抗乙肝病毒的有效药物。     

Effects of gossypol acetic acid on rat luteal cells in vitro

The action of gossypol acetic acid (GAA) on 125I-hCG binding, gonadotropin-stimulated cAMP accumulation and progesterone production was investigated utilizing rat ovaries. Incubation of luteal cells for 3 h with increasing concentration of GAA caused a significant inhibition of gonadotropin-stimulated steroidogenesis. The inhibitory effect of GAA was concentration dependent. GAA at concentrations of 10-30 micrograms/ml reduced cAMP formation in response to hCG. It was shown that the activity of adenylate cyclase of luteal cells was inhibited by 10 micrograms/ml GAA. GAA at a concentration of 30 micrograms/ml was found to have an inhibitory effect on 8Br-cAMP-stimulated progesterone production. GAA did not affect 125I-hCG binding to LH receptor on the luteal cell surface. These results suggest that in luteal cells GAA inhibits steroidogenesis at the step of gonadotropin-stimulated cAMP formation. Adenylate cyclase of luteal cells was inhibited.     

小半夏加茯苓方含药血清抑制HepG2细胞增殖及促进凋亡

目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏茯苓方对肝癌HepG2细胞增殖的影响,初步探索该方诱导肝癌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法:制备含药血清,正常实验用动物Wistar大鼠,采用灌胃或腹腔注射给药途径,连续给药3 d,其中,正常对照组,灌服生理盐水;环磷酰胺(CTX)组,腹腔注射CTX;原方汤剂组,灌服小半夏加茯苓汤;原方汤剂加CTX组,灌服小半夏加茯苓汤的同时腹腔注射CTX;颗粒剂高中剂量组,灌服相当于小半夏加茯苓汤等量、二倍量的颗粒剂,末次给药后12 h,腹主静脉取血,制备含药血清,刺激体外培养的HepG2肝癌细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测其对各时相细胞周期分布,免疫组织化学的方法观察其对凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)、半胱天冬酶-9(caspase-9)的影响。结果:小半夏加茯苓方能抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在作用24 h时效果最明显。流式检测结果显示,药物作用细胞24 h,小半夏加茯苓方阻滞细胞于S期,环磷酰胺将细胞阻滞于G2期。小半夏加茯苓方作用24 h能诱导HepG2细胞的凋亡,caspase-3表达与药物的剂量呈正相关。结论:小半夏加茯苓方可能通过激活caspase-3蛋白表达,从而诱导肝癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,有效抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用。     

人参Ri质粒转化及代谢产物对HepG2细胞的作用

目的:发状根生产的次生代谢产物含量比植物自身合成的含量高几倍甚至几十倍,利用人参发状根可以生产大量人参皂苷,并有效的抑制癌细胞的增值。方法:通过正交试验设计筛选人参发状根诱导的条件,通过发状根生物积累量和皂苷含量的测定确定培养条件,然后利用MTT法测定了人参皂苷对HepG2细胞的影响。结果:本实验优化了人参发状根的最佳诱导条件,吸光度A 0.6,侵染时间为10 min,预培养时间为3 d,筛选出发状根的最佳培养条件,MS培养基,pH 6.1,24℃培养时,发状根的生物积累量和皂苷含量均较高,采用人参总皂苷对肝癌细胞HepG2的抑制效果进行研究,证实人参总皂苷对HepG2的抑制率与给药浓度呈正相关。结论:筛选出最适的人参发状根诱导及培养条件,不同部位的总皂苷对肝癌细胞HepG2的增殖均具有抑制作用。     

复方六月雪含药血清对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的:观察复方六月雪(六月雪、白花蛇舌草、栀子根等)体外抗HBV的作用。方法:采用血清药理学法进行实验,复方六月雪含药血清作用于HepG2.2.15细胞,分别在第72h和144h收集细胞培养上清液,采用ELISA法测定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果:复方六月雪含药血清在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制细胞HBsAg和HBeAg的表达(P<0.05、P<0.01),抑制作用有明显的量效反应关系。结论:复方六月雪含药血清在体外具有显著的抗HBV作用。     

马蹄金素衍生物体外抗肿瘤实验研究

目的：研究马蹄金素衍生物的体外抗肿瘤活性.方法：采用MTT法检测3个马蹄金素衍生物对人肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞L02细胞的生长增殖影响.结果：3个化合物对肝癌细胞株HepG2的细胞毒性IC50分别为51.59、29.51、6.37μg/mL,而对正常肝细胞L02细胞的细胞毒性IC50分别为247.0、191.6、60.6μg/mL.3个化合物在给药质量浓度≥10μg/mL时,对这两种细胞增殖影响差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：3个化合物对正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2均有抑制作用,对L02细胞毒性较低,而对肝癌细胞HepG2具有较强的增殖抑制作用,并且呈现出剂量-效应关系.其中Y26对肝癌细胞HepG2的细胞毒性最高,IC50为6.37μg/mL.     

六月青含药血清对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响

目的 观察六月青(Liuyueqing,LYQ)含药血清的体外抗乙型肝炎病毒的作用.方法 以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,采用酶联免疫法(ELISA法)检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg的滴度.结果 LYQ含药血清对HepG2.2.15细胞50%生长抑制率的给药剂量为11.56 g·(kg·d)-1;而对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg 50%生长抑制率的给药剂量为0.178 g·(kg·d)-1,其治疗指数(TI)为64.94;另外,LYQ含药血清对HBeAg抑制作用不明显.结论 LYQ含药血清在体外有显著的抗HBV的作用,且毒性较低.