中国HIV感染者细胞毒性淋巴细胞与CD4~+CD25~+调节性T细胞相关性研究

目的：对中国HIV感染者NK细胞、CD8^＋T细胞及胞内穿孔素、颗粒酶-B表达与CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞水平的相关性进行研究,探讨调节性T细胞在HIV感染中的作用机制。方法：选取73名HIV/AIDS患者（长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组）,应用流式细胞仪胞内染色技术检测NK细胞、CD8^＋T细胞数量及胞内穿孔素、颗粒酶-B表达水平,分析其与CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞水平的相关性。结果：CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞百分率与NK细胞、CD8^＋T淋巴细胞数量呈明显负相关（P〈0.01）,与CD8^＋T细胞内穿孔素、颗粒酶-B表达百分率呈明显正相关（P〈0.05）,与NK细胞内穿孔素、颗粒酶-B表达水平绝对值负相关（P〈0.01）,与CD8＋T细胞内颗粒酶-B表达绝对值呈明显负相关（P〈0.01）,与CD8^＋T细胞内穿孔素表达绝对值无明显相关性（P〉0.05）。CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞绝对值与CD8^＋T细胞内穿孔素、颗粒酶-B表达百分率呈明显负相关（P〈0.05）。结论：中国HIV感染者细胞毒性淋巴细胞数量功能的变化与调节性T细胞显著相关,提示高水平的调节性T细胞可能与细胞毒性淋巴细胞耗竭相关,可能为导致疾病进展的原因之一。     

体外培养的人T4~+淋巴细胞获得特异性细胞毒性功能

<正> 作者在1983年已经观察到一些对流感病毒或结核菌素特异的T4~+T8~-表型T淋巴细胞克隆(TLC),在克隆化的开初阶段对靶细胞并无细胞毒性功能;培养数月后,其表型虽无变化,但呈现高度的PHA依赖性细胞毒性。 本文主要报道了在与L.L.刺激细胞的混合淋巴细胞培养中共建立了108株人TLC,其中15株原细胞毒性阴性的T4~+T8~-TLC,在克隆化4周后其细胞毒性功能即可检出,且随培养期的延长而增强。     

CD4~+T淋巴细胞功能性区分

确定T 细胞由其表面表达CD3来决定,CD3为T 细胞受体复合体中的一恒定成份。带有αβ-T 细胞受体异二聚体的T 细胞可进一步分为表达CD4和CD8抗原的二类。虽然CD4~+T 细胞通常被称为T 辅助细胞,但是这种认识并不全面。第一,CD4的表达几乎绝对地和外来抗原识别有关,抗原以多肽形式结合至MHCⅡ类分子上。而MHCⅡ类分子特异性可能是CD4与MHCⅡ类抗原结合的结果,此时CD4作为T 细胞受体对抗原-MHCⅡ类复合物的活信号成份。其次,CD4~+T 细胞具有多种不同的功能,其中之一是激活抗原特异性B 细胞。另外,确有一些CD4~+T 细胞能抑制B 细胞的活化。克隆化T 细胞系的功能区分克隆化T 细胞可分成二型。其中一型能     

CD4~+CD25~+T细胞在CD8~+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用

实验旨在研究CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用。将小鼠脾脏中分离的单个核细胞分为两组,即去除CD4+CD25+T细胞组和未去除CD4+CD25+T细胞组,测定树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽刺激不同T细胞增殖活性、细胞因子IFN-γ分泌,以及多肽特异性CD8+T细胞对同源性胃癌细胞株MFC的杀伤活性。结果显示预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,所诱导的特异性CD8+CTL对肿瘤细胞免疫应答增强,表现为反应性T细胞对树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽增殖反应增强,IFN-γ分泌量提高及CD8+T细胞对MFC杀伤活性增强。这些结果表明,预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,肿瘤抗原多肽修饰的树突状细胞肿瘤疫苗效能可明显增加。CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中起下调作用。     

献血员CD8~+T细胞的增加对CD4~+T细胞的抑制作用

实验发现 6 5 %体检合格的献血员外周血CD8+T细胞数量明显增加 ,并伴随CD16 +淋巴细胞数量的增加。这些异常的淋巴细胞与葡萄球菌肠毒素B (SEB )共同培养 6d ,CD4+T细胞无增殖反应。预先用抗CD8抗体去除CD8+T细胞 (去除率 >90 % )再用SEB刺激淋巴细胞 ,其应答能力恢复正常。增殖的细胞是CD4+T细胞 ,它们由 34 0 4%增加到 99 34%。CD8+T细胞由最初的 9 5 7%降低到 0 12 %。这些结果显示过量的CD8+T细胞有可能是被外原性抗原活化的T细胞。它们直接抑制CD4+T细胞对SEB的免疫应答反应 ,但不破坏CD4+T细胞的TCRVβ结构。     

抗原特异性初始CD4+T细胞的体内分化及特性

为了探讨抗原特异性CD4+T细胞在体内的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织器官的分布。将CFSE标记的抗原特异性初始CD4+T细胞静脉被动输给小鼠后,进行免疫,3d后处死小鼠取其脾脏、淋巴结和肺组织,分离单个核细胞,利用流式细胞计数仪在单个细胞水平上,观察细胞的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织分布。结果显示在没有抗原刺激的情况下,未见初始CD4+T细胞分裂,其主要分布于淋巴结和脾脏。当受到抗原刺激后,CD4+T细胞分裂1～5次,主要分布于脾脏和肺组织,CD25的表达增加,CD62L的表达随着细胞分裂次数的增加而减少。IL-12促进CD25的表达和细胞的分裂。促进Th1细胞的分化和IFN-γ的表达。研究的结果提示,在体内,当CD4+T细胞活化后,主要分布于脾和非淋巴组织发挥其免疫效应。     

香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞(DC),流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4~+T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4~+T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4~+T淋巴细胞共培养可以促进CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4~+T细胞共培养后分化的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞和肿瘤免疫

近期研究发现一个有独特免疫调节功能的T细胞亚群 :CD4 + CD2 5 + 调节性T细胞 ,不仅能抑制自身免疫性疾病发生 ,还可能参与肿瘤免疫的调节。这群细胞具有免疫无能和免疫抑制特性 ,通过与细胞直接接触发挥作用 ,而不依赖于其分泌的细胞因子。肿瘤环境中CD4 + CD2 5 + 调节性T细胞比例增加 ,导致肿瘤免疫失调 ,去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫 ,为肿瘤治疗提供了一种新的方法。     

小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3~+ CD4~+及CD3~+ CD8~+T淋巴细胞亚群的差异

目的:探索小细胞和非小细胞肺癌晚期患者CD3+CD4+及CD3+CD8+T淋巴细胞亚群是否存在差异,并为治疗提供参考。方法:选取肺癌晚期患者共65例,其中包括小细胞肺癌14例,非小细胞肺癌51例以及20例健康对照。用流式细胞仪检测研究对象外周血淋巴细胞表面CD3+CD4+及CD3+CD8+的表达情况。结果:CD3+CD4+T细胞所占比例无论是小细胞还是非小细胞肺癌晚期的患者都较健康对照显著降低;CD3+CD8+T细胞所占比例在肺癌晚期的患者较健康对照并无显著变化;CD4+/CD8+比值在小细胞肺癌晚期患者较健康对照显著下降。结论:无论是小细胞还是非小细胞肺癌晚期的患者CD3+CD4+T细胞的水平较健康人都显著降低,说明肺癌晚期患者细胞免疫功能严重受损。     

CD4~+T细胞功能的双重性

<正> T细胞受体由 CD3分子与α、β两条异质性的肽链共同组成。已知T细胞分为OD4~+和CD8~+两个亚群。CD4~+细胞亚群并非都是T辅助细胞,因为①CD4~+细胞具有多种功能,只有一部分细胞能够活化抗原特异性B细胞;②CD4分子与识别连结在MHC分子的外来多肽抗原密切相关,它决定着MHCII     

CD4~+CD25~+调节性T细胞可塑性分化的研究进展

新近研究显示CD4+CD25+调节性T细胞的分化过程及其功能在一定条件下存在可塑性。这不仅体现了机体免疫调节机制的复杂性,而且还提示该过程与炎症、自身免疫性疾病和肿瘤等临床疾病的发生发展过程密切相关。本文就其相关研究进展做一综述。     

CD4~+CD25~+CD127~(low)识别人外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的优势

目的:探索可用于检测人外周血中CD4+CD25+Treg 细胞的最佳标记物.方法:以 52 名健康人和 47 名非血液系统肿瘤患者为研究对象,采用多色免疫荧光素标记和多参数流式细胞术同时检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和 CD4+CD25+CD127lowT 细胞,并以经典指标CD4+CD25high 和 CD4+CD25+FoxP3+为标准,分析和比较CD4+CD25+CD127low作为识别CD4+CD25+ Treg 细胞的可行性及其优势.结果:健康人和肿瘤患者外周血 CD4+CD25high、CD4+ CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CDl27+lowT 细胞占CD4+T 细胞百分比分别为(1.769±O.682)%和(2.958±1.392)%;(2.905±1.772)%和(5.128±2.227)%以及(5.396±1.306)%和(7.175±2.565)%.三者呈相同的趋势,即肿瘤患者组>健康人组,且三者之间呈显著正相关(P<0.05).用两种不同标记法高纯度分选CD4+ CD25high 和 CD4+CD25+CD127lowT 细胞群后,FoxP3 阳性率分别为90.9%和92.7%.结论:CD4+CD25+CD127low 三标记法可以帮助识别 CD4+CD25+Treg 和部分激活的 CD4+T 细胞,提高CD4+CD25+Treg细胞的可检出数量,并且不影响细胞活性度,是反映CD4+CD25+Treg 细胞更理想的指标.     

人CD4~+CD25~+调节性T细胞体外扩增研究

目的:建立有效的体外培养扩增人CD4+CD25+Treg细胞的体系,为临床输注供者来源的CD4+CD25+细胞抑制急性移植物抗宿主病(Auctegraft versus host disease,aGVHD)提供实验基础。方法:用免疫磁珠分选法从健康人外周血淋巴细胞中得到CD4+T细胞、CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+Treg细胞。分别进行长期培养、扩增;流式分析其表型及FOXP3表达,MTT法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。结果:经过3周培养,三组细胞均有明显的扩增。磁珠分选后的CD4+CD25+Treg细胞的扩增倍数为(20±8)倍,细胞纯度由89.28%±2.43%下降到76.36%±2.38%。CD4+CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为(110±21)倍,并且CD4+CD25+Treg细胞的比例由培养前0.55%±0.27%增加到53.73%±3.81%。CD4+T细胞组扩增倍数为(89±8)倍,并且CD4+CD25+Treg细胞的比例由10.63%±3.87%增加到70.93%±1.71%。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低。而且其各浓度梯度的抑制作用在自体和异体之间无明显的差异。结论:我们在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4+T细胞组扩增倍数大,细胞数量多,细胞纯度有很大提高,方法简便,有望应用于临床试验。     

供体抗原特异性的CD4~+CD25~+Treg对肾移植大鼠体内B细胞功能的影响

目的 供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg体内应用后对同种异系肾移植大鼠受体B细胞功能的影响.方法 以F344大鼠为供体、Lewis大鼠为受体建市大鼠肾移植模型,于术前1大、术后2周分别将供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg(1×106)于尾静脉注入受休体内,术后1月抽取人鼠外周血,分离B细胞,检测其在抗IgM抗体刺激下的增殖情况,检测大鼠外周血IgG、IgA水平,以判断应用CD4+CD25+Treg后大鼠体内B细胞功能状态.实验分组:实验组术前、术后2周使用CD4+CD25+Freg(n=8),阳性对照组术前、术后未使用CD4+CD25+Treg(n=8),空白对照组未移植大鼠(n=8).结果 实验证实实验组B细胞增殖水平最低、空白对照组其次,阳件对照组最高,三者均有显著差异(P＜0.05),外周血IgG、lgA水平检测证实,实验组与空的对照组无显著差异(P＞0.05),二者明显低于阳性对照组(P＜0.01).结论 经尾静脉注入CD4+CD25+Treg后肾移植受体体内B细胞的功能可明显受到抑制,CD4+CD25+Treg 可通过对B细胞的这一作用调节受体免疫状态,从而达到控制排斥反应,诱导免疫耐受的作用.     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+和CD4~+CD25~-Foxp3~+T细胞

目的：研究初发系统性红斑狼疮患者（Systemic lupus elythematosus，SLE）外周血CD4^＋T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义。方法：根据SLE疾病活动积分（SLEDAI）将初发SLE患者分为活动组（10例）和不活动组（11例），流式细胞仪检测治疗前后外周血CD4^＋T细胞中CD25、Foxp3和CD127表达百分率，并对其与SLE临床活动度、尿蛋白、补体和anti-ds-DNA相关性进行研究。结果：初发活动组和不活动组SLE患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞表达百分率分别为（1．91％～6．75％）和（2．74％～7．01％），与正常对照（2．11％～9．90％）相比没有统计学差异（P=0．524，P=0．794）；且初发SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞在体外增殖反应和增殖抑制功能与正常对照相比无明显差别（P=0．174，P=0．689）；外周血CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞百分率在初发活动组（3．71％～10．94％）和不活动组（2．97％～7．69％）SLE患者均比正常对照（1．01％～3．62％）显著增高（P〈0．01和P〈0．01）；而CD4^＋CD2^＋Foxp34^-T百分率在初发活动组SLE患者（1．19％～9．23％）显著低于正常对照（2．67％～11．26％）和初发不活动组SLE患者（3．73～8．27％）（P=0．039，P=0．048）；与CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞类似，90％左右的CD4^＋CD25一Foxp3^＋T细胞不表达或低表达CD127，其百分率与anti-ds-DNA浓度呈正相关，且尽管未达到统计学意义，但激素和免疫抑制治疗后其水平下降。结论：初发未经治疗的SLE患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞数量和功能无明显异常，而CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞数量增多，与SLE疾病活动相关，可能具有调节功能。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

树突状细胞扩增抗原特异性CD4+ CD25+调节性T细胞研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T细胞.研究证实,CD4+ CD25+ Tr在抑制器官特异性自身免疫性疾病及GVHD是抗原特异性的,因此,应用器官特异性而不是多克隆性的Tr将大大促进以Tr为基础的免疫治疗.而具有调节活性的CD4+ CD25+ Tr仅占人类外周血CIM+ T细胞的1%～2%,因此,研究体外大量扩增的方法 对于以Tr基础的治疗至关重要.研究表明,树突状细胞(DC)作为机体强有力的专职抗原递呈细胞可以扩增具有抗原特异性的CD4+ CD25+ Tr且能增加后者的抑制活性,这为治疗自身免疫性疾病及GVHD提供了新的治疗前景.     

CFSE标记抗原特异性CD4+CD25+T细胞在胰岛移植体内归巢的研究

目的:观察抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞在小鼠同种异体胰岛移植后体内的分布特点,探讨抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞免疫调节可能机制。方法:构建小鼠同种异体胰岛移植模型。CFSE对抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞标记,经尾静脉输注。用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记的抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞在受体内的分布和增殖变化。结果:抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞联合胰岛移植组胰岛移植物平均生存期为(34.57±17.15)d,较胰岛移植组生存时间(10.6±1.82)d,差异有统计学意义(P<0.01)。抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞在各级淋巴结均有能定居,但是胰腺淋巴结定居的细胞数量明显多于其他淋巴结。结论:抗原特异性Treg细胞抑制STZ诱导的糖尿病小鼠的急性移植排斥反应,细胞抑制功能与细胞在体内淋巴结的归巢有关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对巨噬细胞泡沫化的影响

目的 研究CD4~+ CD25~+调节性T细胞(Tr)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制.方法 磁性细胞分离器(MACS)分离CD4~+ CD25~+ T细胞及CD4~+ CD25~- T细胞,在氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)作用下,将巨噬细胞分别与CD4~+ CD25~+ T细胞、CD4~+ CD25~- T细胞共培养48 h.采用油红O染色和细胞内脂质测定的方法观察CD4~+ CD25~+ T细胞对巨噬细胞泡沫化的影响;采用RT-PCR、real-time PCR、Western blot的方法测定泡沫细胞清道夫受体(CD36和SRA)的表达.结果 与对照组比较,CD4~+ CD25~+ T细胞可显著抑制巨噬细胞脂质聚集及清道夫受体的表达.结论 CD4~+CD25~+ T细胞可显著抑制巨噬细胞泡沫化,其作用机制可能为下调清道夫受体的表达.