HIV-1 env基因序列分析及其与长期感染不进展现象相关性研究

目的研究HIV-1长期感染不进展现象与HIV-1 env基因变异的关系。方法用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对21例感染HIV-1毒株7年以上者外周血单一核细胞(PBMCs)的核酸样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行测定和分析,所得结果与HIV-1该亚型国际标准株进行比较,分析共享序列及突变序列,制作系统树,计算离散率。结果离散率和系统树分析21个毒株均为HIV-1 B亚型,毒株间基因离散率在2%左右,高于前期研究结果;未见V3环顶端四肽特征性GPGR和GRGQ,也未见前期研究曾经发现的脯氨酸向异亮氨酸的变异现象。结论HIV-1长期感染者体内毒株env基因无规律性突变。     

陕西省HIV-1分子流行病学研究

目的研究陕西HIV-1流行亚型及相互关系,分析流行时间及传播途径,为陕西省HIV的预防、控制及感染者治疗提供有力的依据。方法用PCR对15份陕西HIV-1感染者外周血单核细胞(PBMCs)样本进行扩增,获得HIV-1 env基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行分析,所得结果与HIV国际标准株及周边省份流行株进行比较,分析共享序列及突变序列,制作系统树,计算离散率。结果 陕西流行的B、E、C亚型内基因离散率分别为3.0％,1.7％和2.3％。10个B亚型毒株与泰国、我国云南、新疆、河南和四川流行的B亚型代表株基因序列接近;2个C亚型毒株我国新疆流行的C亚型代表株接近;3个E亚型毒株与河南流行的E亚型代表株接近。结论 陕西HIV-1流行株主要为B、E、C亚型,三亚型毒株在陕西的流行时间分别在2.5～3年、2～2.5和1.5～2年之间,传播来源可能为国外或周边省份传入。     

母婴传播感染HIV-1的分子流行病学调查

目的了解母婴传播感染HIV-1的亚型分布和基因变异。方法从感染者的血浆样品中提取病毒RNA,逆转录后采用套式PCR扩增HIV-1gag和env基因的部分片段,对PCR产物直接进行核苷酸序列测定,所获序列与各亚型国际参考株序列比对,确定基因型并进行系统进化树分析。结果对11份HIV-1感染者的样品进行扩增,得到了10份样品的HIV-1基因片段。发现4种HIV-1亚型和重组型,其中B'亚型6例,CRF01_AE和CRF07_BC各1例,C亚型2例。系统进化树分析表明,3对母婴配对样品,每对各自聚在一起,处于一个分支。3对母婴配对样品的env基因组内基因离散率分别为5.9%,12.1%和3.2%,年均基因离散率分别为0.6%,1.5%和0.8%。结论母婴传播病例中存在多种HIV-1亚型和流行重组型,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测。     

贵州省HIV－1感染毒株膜蛋白基因序列测定及流行病学分析

目的 揭示贵州省 HIV－ 1感染毒株的亚型分布及其流行态势。方法 用巢式 PCR法扩增 HIV－ 1膜蛋白基因 (env)，并经序列分析。结果 核酸分离成功的 11份全血标本中， B亚型 7例， C、 E亚型各 2例； B亚型基因离散率为 3.21％± 1.4％，流行时间约 3年， E和 C亚型基因离散率为 1.65％和 0.98％，流行时间约 1年。结论 贵州省 HIV－ 1感染毒株亚型分布广泛，来源复杂，预示今后将以性传播途径为主，防治难度较大。     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 4 2 14 6　浙江省 HIV- 1流行毒株的基因序列测定和亚型分析 /姚亚萍 (浙江省疾控中心 )… / /中国艾滋病性病 .- 2 0 0 4 ,10 (1) .- 4～ 6 ,2 2采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对该省 14例 HIV抗体阳性者的全血进行 env基因 C2～ V3区的扩增与测序 ,9例测序成功者经离散率计算和系统树分析证实 :E亚型的 A / E流行重组模式 4例 ,B亚型 3例 ,C亚型的B/ C流行重组模式 1例 ,G亚型 1例。提示浙江省内存在有多种亚型的 H IV - 1毒株。图 1表 2参 5　 (杨亚琴 )2 0 0 4 2 14 7　静脉吸毒人群 HIV 感染者 CD 3 、CD 4、CD 8T…     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 0 3718　重庆市 HIV- 1样本的亚型分析及 G亚型HIV- 1毒株在我国的发现 /韩梅 (重庆市卫防站 )…∥中国性病艾滋病防治 .- 2 0 0 0 ,6( 2 ) .- 89～ 91对重庆市境内确诊的 3例 HIV抗体阳性者静脉血 ,采用提纯扩增法 ,检测核酸片段 env基因 C2 ～ V3区 ,并进行核苷酸序列分析 ,与各亚型国际共享序列比较。结果 :2例为 E亚型和 C亚型 ,1例为 G亚型毒株。G亚型 HIV- 1毒株是首次在中国发现。表明重庆市存在着 C、E、G3种 HIV亚型病毒。图 1表 2参 9　 (杨亚琴 )2 0 0 0 3719　云南省 2 39例艾滋病病例分析 /张小波 (云南省卫防…     

青海省首次发现的2例HIV感染者HIV—1毒株的基因特征和亚型分析

目的：分析青海省首次发现的HIV感染者HIV－1毒株的基因特征及亚型。方法：从2例感染者外周静脉血淋巴细胞中提取前病毒DNA，使用套式PCR方法，扩增HIV的Env基因，对其Env C2-V3及邻近序列进行分析。结果：两个毒株与国际参考序列的Coon间的基因离散率最小为4．93％，而远离其它亚型，2个毒株间的基因离散率为1．35％，进一步的系统树分析显示，2个毒株与Ccon聚集在一起。结论：2个毒株均为C亚型，而且HIV－1毒株刚进入青海省且流行的时间不长。     

免疫缺陷性皮肤病

20053036HIV-1感染恒河猴外周血单个核细胞的生物学特性和C2-V3区基因序列变化/马丽英(中国疾控中心性病艾滋病预防控制中心),邢辉,张辉…∥中国艾滋病性病.-2005,11(3).-161~164用HIV-1感染原代猴外周血单个核细胞(PBM-Cs),测定其培养0,2,3,7天时上清液中的HIV-1P24抗原,同时HIV-1的env基因C2-V3区进行序列分析。结果显示,HIV-1毒株感染猴PBMCs后第3天时P24抗原达到最高峰,随着培养时间的延长P24抗原逐渐降低。将4株HIV-1病毒分别感染猴PBMCs,并盲传3代后,P24抗原检测均为阴性。与其相反将4株HIV-1病毒感染人PBMCs时,HIV-1的复制一直维持在较高的水平。图2表2参8(杨玉琴)20053037河南省HIV-1流行毒株P01基因的分型与系统发生分析/杨坤(北京军事医科院微生物流行病研究所艾滋病检测中心),鲍作义,李韩平…∥中国艾滋病性病.-2005,11(3).-165~167采集艾滋病病人血浆20份,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增P01基因部分序列,并进行序列测定。结果均显示为B亚型,具有较高的系统同源性,与...     

HIV-1与HIV-2交叉反应毒株的基因亚型分析

目的分析HIV-1+2蛋白印迹试验中HIV-1确证阳性同时出现HIV-2带型样本的基因亚型。方法将HIV-1+2确证试验中同时出现HIV-2带型的样本,通过基因诊断确认是否为HIV-2共感染;同时扩增HIV-1 gag,env基因段,通过测序和系统进化树的构建,分析具有HIV-2带型的HIV-1毒株的基因亚型。结果在34份出现HIV-2带型的标本中,基因诊断发现均为交叉反应,并非HIV-1和HIV-2共感染。出现交叉反应的毒株中以AE亚型为主,占73.5%(25/34),BC重组和B亚型分别占17.7%(6/34)和8.8%(3/34)。结论HIV-1+2蛋白确证试验中HIV-1确证阳性,同时出现HIV-2带型的阳性样本,并非HIV-1和HIV-2共感染,而是交叉反应。出现交叉反应的HIV-1毒株以AE亚型为主。     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 10 14 0　贵州省 HIV- 1感染毒株膜蛋白基因序列测定及流行病学分析 /雷世光 (贵州省皮研所 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 0 ,33( 3) .- 14 9～ 151为探索贵州省 H IV - 1感染毒株亚型分布及变异情况 ,分析其流行态势。对 2 0份确诊的 HIV - 1感染者血样 ,用巢式 PCR法扩增膜蛋白基因并作测序分析。核酸分离成功有排列结果仅有 11份 ,其中云南 B亚型4份 ,欧美 B亚型 3份 ,国际 E亚型 2份 ,国际 C亚型2份。结果显示贵州 H IV毒株来源广泛 ,分布复杂 ,主要通过性接触传播。输血和静脉吸毒方式传播的 B亚型可通过政策因素在短期…     

广州地区淋球菌营养分型和抗生素耐药性的研究

为了解广州地区淋球菌的营养型分布和4种抗生素的耐药性,以广州地区167株淋球菌进行MIC测定和PPNG检测,同时对其中113株淋球菌进行营养分型检测。结果显示,167株菌中检出PPNG菌株9株,TRNG16株,青霉素耐药株109株（65.3%）,环丙沙星耐药株131株（78.4%）,大观霉素、头孢曲松未发现耐药株。113株淋球菌分16种营养型,以Pro^-型、Proto型、Pro^-、Ile^-、Ile^-型、Pro^-Ile^-Ser^-型5种营养型为主,占86.5%,其余11种营养型占13.5%。青霉素和环丙沙星的耐药菌株主要分布于Pro^-型中,TRNG菌株主要分布于Ile^-型,PPNG菌株散在于各种营养型中。研究结果表明广州地区淋球菌的营养型和耐药性的分布状况,有助于该地区淋球菌的流行病学研究和淋病防治。     

HIV-1 V2区175位变异可提高中和抗体对病毒的结合能力

目的 探讨HIV-1 V2区175位变异对于V3中和抗体与病毒结合能力的影响。方法 使用真核细胞表达质粒分别串联HIV-1野生型和突变型的env基因和绿色荧光蛋白GFP,并转染293T细胞,使gp120表达到293T细胞的表面,并根据GFP荧光来检出转染成功细胞。然后使用免疫染色和双荧光流式细胞仪检测几种常见V3区中和抗体对野生型和突变型gp120的结合力。结果 L175P突变使表达在293T细胞表面的gp120三聚体与3种V3区特异性抗体结合的荧光强度差异有统计学意义,与阴性对照的荧光强度分布差异有统计学意义,图形的位置和峰值均有变化,平均荧光强度MFI显著升高;而表达野生株gp120三聚体的293T细胞与V3抗体作用后,曲线与阴性对照的荧光强度分布基本重叠,MFI基本相同。结论 提示V2区突变可以提升病毒对V3抗体中和作用的敏感性。     

艾滋病患者白念珠菌ERG11基因突变的研究

目的 探讨艾滋病患者的白念珠菌唑类耐药株中唑类抗真菌药物(氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑)的作用靶位基因ERG 11基因突变与耐药的关系.方法 用PCR对临床分离的93株白念珠菌的Erg11基因进行扩增、测序,DNAman软件将测序结果与基因库中的X13296进行比对,将突变碱基翻译为氨基酸,确定是否发生错义突变.结果 共检出40个碱基突变位点,包括27个同义突变位点和13个错义突变位点.耐一种药物的突变菌株中每株菌只发生一处错义突变或无错义突变,而耐二种或三种药物的菌株中每株菌还可以同时出现两处或三处错义突变.结论 ERG 11基因错义突变与白念珠菌耐药有关.     

Detection of HIV-1 in epidermal Langerhans cells of HIV-infected patients using the polymerase chain reaction

Langerhans cells (LC) are bone marrow-derived, HLA-DR+, CD1a+, dendritic antigen-presenting cells found in stratified squamous epithelia. Within resident epidermal cells (EC), LC are the only cells expressing the CD4 antigen and are, therefore, a possible target for human immunodeficiency virus (HIV) infection. To date, conflicting results have been reported on the in vivo infection of LC by HIV. The aim of the present study was to investigate the presence of HIV-1 proviral DNA in epidermal LC of HIV-1-infected patients. EC suspensions were prepared from clinically normal skin of nine seropositive patients. Purified LC and LC-depleted EC were obtained by immunomagnetic separation and analyzed for the presence of HIV-1 proviral DNA by the polymerase chain reaction using primer pairs from different conserved regions (env and gag) of the HIV-1 genome. HIV-1 proviral DNA was detected in LC from seven of nine patients. LC-depleted EC fractions from the same nine patients were all negative, with the exception of one case. Altogether these results demonstrate that epidermal LC are infected by HIV-1 and constitute the only resident cell type in the epidermis harboring the virus. Further studies are, however, needed to demonstrate HIV replication in LC and to elucidate the functional role of LC in this infection.     

沙眼衣原体对大环内酯类药物敏感性试验及23S rRNA基因突变研究

目的 检测天津地区近年来大环内酯类抗生素对泌尿生殖道沙眼衣原体临床分离株的抗菌活性,筛查耐药株,从基因分子水平上探讨耐药机制。方法 将经McCoy细胞培养法检测出的42株沙眼衣原体临床株,传代培养至感染率达90%以上,收集标本进行3种常用大环内酯类抗生素的药敏试验,用RT-PCR、PCR方法分别扩增与大环内酯类耐药相关的23S核蛋白体RNA基因、核糖体蛋白L4基因,产物直接测序检测基因突变。结果 最小抑菌浓度（MIC）结果为红霉素0.5 ～ 2 mg/L,克拉霉素0.008 ～ 0.032 mg/L,阿奇霉素0.125 ～ 0.5 mg/L。发现2株红霉素耐药株,MIC值为2 mg/L,2株耐药株的23S rRNA基因有C2452A、T2611C的突变（大肠杆菌序列编号）,红霉素耐药株及敏感株L4基因均发现脯氨酸113→亮氨酸、脯氨酸156→丙氨酸两个位点的突变。结论 沙眼衣原体对红霉素已产生一定的耐药性。C2452A、T2611C的突变导致红霉素低水平耐药,L4基因的点突变可能与红霉素耐药无关。     

男男性行为者CCR5、CCR2、SDF1、CXCR4基因多态性与HIV-1感染关联性分析

目的:研究男男性行为者(MSM)艾滋病病毒感染相关辅助受体CCR5、CCR2、CXCR4和SDF1基因多态性与HIV-1感染的相关性。方法:收集HIV-1抗体确证阳性者纳入病例组,HIV抗体筛查阴性者作为对照组,应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序法,检测两组MSM样本CCR5基因△32(rs333)和59029A/G(rs1799987)、CCR2、SDF1、CXCR4基因外显子区域的等位基因多态性,分析病例组和对照组基因型分布差异与HIV-1感染的相关性。结果:共收集病例组102例,对照组91例,两组样本CCR5基因rs333位点未检出杂合子和纯合子突变,rs1799987A/G位点突变频率为59.59%,病例组和对照组基因型差异分析显示,rs1799987A/G位点变异可能为影响HIV感染的风险因素[比值比(OR)=2.998,95%可信区间(CI):1.034～8.696];rs1799987A/G、rs1799864、rs1799865、CXCR4、SDF1基因突变频率分别为59.59%、19.95%、26.61%、11.92%和0.26%;CCR2第三外显子测序产物多态性...