成年型多囊肾病家系成员的症前基因诊断

目的：应用ＰＣＲ方法对常染色体显性遗传性多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）家系进行症前基因方法：用ＰＣＲ扩增与ＰＫＤＩ位点连锁的高度多态性的微小卫星体ＤＮＡ（ＳＭ７,ＡＣ２．５,ＫＧ８,ＣＷ２）为遗传标记,对１０个ＡＤＰＫＤ家系的１０４个成员（包括２８个患者）找出染色体上与疾病连锁的单体型,进行连锁分析。结果：对９个无临床症状,且Ｂ超检查呈阴性结果的儿童做出了症前基因诊断。结论：能够应用ＰＣＲ方法对ＡＤＰ－Ｋ     

应用PCR技术进行染色体显性遗传多囊肾病家系的基因诊断

用ＰＣＲ方法对中国的常染色体显性遗传多囊肾病家系进行基因诊断。方法：提取基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ方法扩增与ＰＫＤ１位点连锁的高多态性的微小卫星体ＤＮＡ为遗传标记。进行家系分析。     

应用微小卫星体DNA多态性进行成人型多囊肾病的基因诊断

基因诊断是控制成人型多囊肾病（ＡＰＫＤ）的有效措施，作者利用ＳＭ＿７（一种在１６号染色体上与成人型多囊肾病基因紧密连锁的微小卫星体ＤＮＡ），根据其聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增片段长度多态性，结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ａｇ￣＋染色方法，进行了１４个ＡＰＫＤ家系１０１名个体染色体ＤＮＡ的家系基因连锁分析，其中８个家系得到了明确结果，ＰＣＲ扩增片断条带清晰，ＡＰＫＤ家系中患者致病基因连锁关系自确。对结果不明确的家系分析了其可能原因。本方法是一种快速、简单，灵敏的非同位素ＡＰＫＤ基因诊断方法。     

改良二温式PCR法快速SM7微卫星标志多态分析对多囊肾病的诊断

成人型多囊肾病（ＡＰＫＤ）是一种常染色体显性遗传病,其基因突变定位在第１６染色体短臂１区３带的ＰＫＤ１位点［１］,后来发现ＡＰＫＤ存在遗传异质性,定位了ＰＫＤ２、ＰＫＤ３位点［２、３］。国际上常用的ＰＫＤ１位点相邻的微小卫星体 ＤＮＡ ＳＭ７为遗传标记本研究采用改良二温式ＰＣＲ扩增法结合聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染色对１０个ＡＤＰＫＤ家系成员进行基因连锁分析［５、６、］,并证实是有效的ＡＰ ＫＤ基因诊断方法。１材料和方法１．１染色体ＤＮＡ分离纯化：取静脉血１０ｍｌ,ＥＤＴＡ（１ｍｐ／ｍｌ）抗凝,分离白…     

改良二温式PCR法SM7微小卫星标记快速多态分析对多囊肾病家系的基因诊断

常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）是终末期肾衰的主要原因,发病率高达１／１０００［１］。其基因突变定位在第１６号染色体短臂１区３带的ＰＫＤ１位点［２］,后来发现ＡＤＰＫＤ存在遗传异质性,定位了ＰＫＤ２、ＰＫＤ３位点［３］。国际上常用的ＰＫＤ１位点相邻的微小卫星体ＤＮＡＳＭ７为遗传标记［４］。本研究采用改良二温式ＰＣＲ扩增法结合聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染色对１０个ＡＤＰＫＤ家系成员进行基因连锁分析,结果表明这是一种快速、简便、有效的ＡＤＰＫＤＩ基因诊断方法。介绍如下。１　材料和方法１．１　染色体…     

用微卫生DNA多态性进行血友病甲基因诊断的研究

目的：研究ＦⅧ基因１３内含子（ＣＡ）ｎ重复序列（ＣＡ－１３）、２２内含子（ＣＡ）ｎ重复序列（ＣＡ－２２）及基因旁微卫星ＤＮＡＤＸＳ１５位点的多态性在血友病甲基因诊断中的应用价值。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（测序胶）的方法，检测了三个血友病甲家系共１２名成员Ｘ波色体ＣＡ－１３、ＣＡ－２２、ＤＸＳ１５的长度变化，并进行连锁分析。结果：三个家系均得到诊断，并俭出一名携带者。结论：     

Amp-FLP连锁分析对DMD基因诊断的价值

①目的　探讨扩增片段长度多态性（Ａｍ ｐ－ＦＬＰ）连锁分析对杜氏进行性肌营养不良（ＤＭＤ）基因诊断中的价值。②方法　运用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,对１０ 个ＤＭＤ家系成员的抗肌营养不良蛋白基因内９个基因区进行了Ａｍ ｐ－ＦＬＰ连锁分析。③结果　１０ 个ＤＭＤ家系中的９ 个先证者,６ 例为外显子缺失,１ 例为内含子缺失,２ 例为非缺失型。④结论　Ａｍ ｐ－ＦＬＰ连锁分析是对ＤＭＤ进行基因诊断的实用方法。     

新染色体8q24.1带特异性微卫星DNA的筛选和分析

运用人类高分辨染色体显微切割、ＰＣＲ和微克隆技术构建的８ｑ２４．１带特异性ｐＵＣ１９文库，筛选出一个含ＣＡ重复的新的多态微卫星ＤＮＡ［（ＣＡ）ｎ］。经ＰＣＲ检测人鼠杂种细胞板，证实其来源于人８号染色体；在正常人群中检出１１个等位片段，杂合度为０．８４；在１１个家系中进行连锁分析。结果显示，此多态标记与三个已知的位于８ｑ２３－２４．１区域的微卫星ＤＮＡ（Ｄ８Ｓ８５，Ｄ８Ｓ１９９，Ｄ８Ｓ２８１）紧密连锁，其在８号染色体遗传图谱上的相对位置为：着丝粒－Ｄ８Ｓ８５－新（ＣＡ）ｎ－Ｄ８Ｓ１９９－长臂末端。     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

Amp—FLP连锁分析对DMD基因诊断的价值

①目的 探讨扩增片段长度多态性（Ａmp-ＦＬＰ）连锁分析对村氏进行性肌养不良（ＤＭＤ）基因诊断中的价值。②方法运用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,对１０个ＤＭＤ家系成员的抗肌营养不良蛋白基因内９个基因区进行了Ａmp-ＦＬＰ连锁分析。③结果１０个ＤＭＤ家系中的９个先证者,６例为外显子缺失,１例为内含子缺失,２例为非缺失型。④结论 Ａmp-ＦＬＰ连锁分析是对ＤＭＤ进行基因诊 实用方法。     

常染色体显性多囊肾疾病行胚胎植入前遗传学诊断的实验研究

目的：建立由PKD1突变所致常染色体显性多囊肾疾病（autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD）的胚胎植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis,PGD）方法。方法：①通过微卫星连锁分析确定2个多囊肾家系的ADPKD致病基因。检测的微卫星包括为与PKDI连锁的KG8、SM6、CW4和CW2以及与PKD2连锁的D4S1534、D4S1563、D4S414和D4S423。②对18个淋巴细胞和1个PKD1突变所致ADPKD成员行常规体外受精胚胎移植后的5个废弃胚胎15个卵裂球行多重巢式PCR和毛细管电泳检测与PKD1连锁的微卫星分型。结果：①KG8、CW4和CW2可作为连锁微卫星分析外周血和单个细胞的PKD1突变;②2个家系的致病基因均为PKD1;③单个卵裂球扩增成功率为86.67％（13／15）,单个淋巴细胞扩增成功率为88.89％（16／18）,CW4等位基因脱扣率为25％（4／16）,CW2未发现等位基因脱扣,均未发现污染,2个胚胎携带致病基因。结论：PKD1连锁的微卫星分型可作为PKD1突变所致ADPKD的PGD诊断方法。     

129个常染色体显性遗传性多囊肾病家系的致病基因检测及分析

目的 探讨中国常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）患者多囊肾病1型致病基因（PKD1）和多囊肾病2型致病基因（PKD2）的突变类型。方法 采用长链PCR和高通量测序方法对129个ADPKD家系的PKD1和PKD2基因进行突变分析,并用双脱氧链终止法测序技术对阳性突变进行验证。结果 在129个ADPKD遗传家系中共检测到116个家系存在PKD1或PKD2基因的118个突变位点,检出率为89.9%（116/129）。PKD1和PKD2的突变率分别为92.2%（107/116）和8.6%（10/116）。在这118个突变位点中,80个（67.8%）为新突变,38个（32.2%）为已知突变;109个位于PKD1（33个已知突变和76个新突变）,9个位于PKD2（5个已知突变和4个新突变）。结论 新发现的PKD1和PKD2突变位点将有助于ADPKD患者的早期诊断和预后预测,并为临床干预提供基本的遗传信息。     

联合运用四种技术进行血友病A的基因诊断

目的：最大限度地提高血友病A（HA）患者及家系成员的基因诊断、携带者检出及产前诊断的可诊断率。方法：对于26例HA患者和家系的女性家属首先采用长距离DNA扩增（LD-PCR）技术,直接检测是否为FⅧ基因倒位及其携带者;对于非倒位的HA家系依次采用Bcl I PCR/RFLP分析技术、基因内含子13（CA）n、内含子22（GT）n(AG)n二核苷酸重复序列多态性分析技术以及与FⅧ基因紧密连锁的可变串联重复序列多态性分析技术（St14 VNTR/PCR)进行间接诊断。结果：在26个HA家系的16个重型家系中查出7个基因倒位,占重型HA的43.8%。19个非倒位HA家系,用上述三种间接诊断技术分别有16、13及17个HA家系可以作出诊断,可诊断率分别为84.2%、68.4%和89.5%,联合上述四种技术,对26个HA家系全部作出了诊断。结论：联合采用四种基因诊断技术,几乎可以为所有有家庭史的HA家系作出基因诊断及携带者检出。     

Research on autosomal dominant polycystic kidney disease in China

Objective To review the history and recent development of research on autosomal dominant polycystic kidney disease （ADPKD） in China. Data sources Both Chinese and English literatures were searched in MEDLINE/CD ROM （1979 - 2006） and the Chinese Biomedical Literature Disk （1979 - 2006）. Study selection Published articles about ADPKD from mainland of China were selected. Data were mainly extracted from 58 articles which are listed in the reference section of this review. Results Some preliminary reports on cyst decompression surgeries and mutation analysis represent the contribution to the ADPKD research from China in the history. A serial of basic research and clinical studies on ADPKD in recent years also have been summarized. A technique platform for ADPKD research was firstly established. The genomics/proteomics/bioinformatics approach was introduced, which provide a lot of valuable information for understanding the pathogenesis. By denature high performance liquid chromatography （DHPLC） technique the entire PKD1 and PKD2 gene sequence screening system for Chinese Han population has been successfully established. Based on the characteristic data of Chinese patients, an integrated therapy protocol was put forward and won an advantage over the traditional therapy. Some novel experimental studies on therapy also were encouraging. Condusions Remarkable progress of ADPKD research in China have been made recently. Still many works, including the government support, international collaboration and active participation of more Chinese nephrologists, should be enhanced to advance this process in the near future.     

上海市汉族人群与PKD1基因紧密连锁的微卫星DNA的多态性分析

目的；研究与多囊肾病PKD1基因紧密连锁的4个微卫星DNA的多态性，为家系连锁分析和临床分子诊断提供有用的遗传标记。方法：抽提上海市80名汉族无关个体（均为健康志愿者）的DNA，对其进行4个微卫星位点（KG8，SM6，CW2和SM7）的PCR扩增，采用毛细管电泳分离PCR扩增增加，用GeneScan^TM,Genotyper^TM软件对其进行基因分型。结果：在上海市汉族人群中，发现KG8，SM6，CW2，SM7分别有4，10，11和9个等位基因片段，其杂合度和多态信息含量分别为0.29和0.274,0.852和0.819,0.786和.779,0.85和0．827，群体分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论：微卫星位点SM6，CW2，SM7具有较高的杂合度和多态信息含量，在基因连锁分析和群体遗传学中具有产重要的应用价值。     

基因扫描微卫星DNA进行常染色体显性遗传性多囊肾病囊肿前诊断

目的；利用与多囊肾病PKD1基因紧密连锁的微卫星DNA，通过家系连锁分析，进行了常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）的囊肿前诊断，为临床分子诊断奠定基础。方法：采用PCR－基因扫描的方法，对4个ADPKD家系共39人进行了连锁分析。结果：通过连锁分析，发现4个家系中1名16岁个体为PKD1突变携带者，处于囊肿发生前期。结论：基因扫描微卫星DNA是一种快速，准确的基因分型方法，可用于ADPKD的囊肿前诊断。     

上海市汉族常染色体显性多囊肾病遗传异质性和表型差异的研究

目的应用与多囊肾病基因1（PKD1）和多囊肾病基因2（PKD2）紧密连锁的微卫星DNA进行家系连锁分析,研究中国上海市汉族该病的遗传异质性,并比较1型和2型常染色体显性多囊肾病（ADPKD）患者临床表现的差异.方法根据知情同意的原则,收集43个诊断明确的汉族ADPKD家系,利用聚合酶链反应扩增与PKD1和PKD2紧密连锁的微卫星DNA,对PCR扩增产物进行基因扫描分型和连锁分析,确定患病家系与PKD1或PKD2连锁.收集家系中所有患者（包括死亡个体）的病史,现有症状和超声检查结果,对两型患者的临床表现进行统计学比较.结果在进入研究的43个家系中,36个家系与PKD1连锁,占全部家系的84%,7个家系与PKD2连锁,占16%.1型和2型ADPKD患者的诊断平均年龄为36.8岁和46.3 岁,高血压的发生率和诊断平均年龄分别为62%、54%和37.4岁、49.1岁,终末期肾病（ESRD）的发生年龄为51.2岁和64.7岁.结论在上海市汉族中,约84%的ADPKD患者由PKD1突变所致,约16%的患者由PKD2突变所致.两型患者临床并发症发生率无明显差别.但1型患者与2型患者比较,其ADPKD诊断年龄、高血压诊断年龄和终末期肾病发生的平均年龄分别提早9.5年、11.7年和13.5年,这提示1型患者的预后较差.     

恶性疟原虫海南、云南、安徽株裂殖子表面抗原MSA1第二区基因的克隆和序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增并克隆恶性疟原虫海南、云南、安徽３个地理株ＭＳＡ１第二区基因，测定并分析其基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株扩增片段长度为４２３ｂｐ，基因序列完全相同，我国虫株ＭＳＡ１与ＷＥＬＬＣＯＭＥ株最为相似，存在ＭＡＤ和Ｋ１两种等位基因型的基因内重组现象。     

7个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析

目的：对7个肾上腺脑白质营养不良家系进行基因突变分析。方法：应用RT—PCR技术。对7个患者的ABCD1基因编码区，分4个片段进行扩增并对PCR产物直接测序。应用PCR-限制性酶切或DNA测序等方法分析相应的基因组DNA,进一步确证ABCD1的突变位点。结果：在7名肾上腺脑白质营养不良患者的ABCD1基因上，存在6个不同的碱基置换（709C〉A、807G〉A、1161C〉T、2065C〉T、2113T〉C和2235C〉T）、1个碱基缺失（1801delAG）和1个碱基插入（1126insGCCATCG），分别造成5个错义突变（A141T、R259W、P560L、L576P和R617C）、2个移码突变（fs I246和fs E471）和1个无义突变（S108X）。结论：在中国人肾上腺脑白质营养不良患者中发现4个新的ABCD1基因突变。即S108X、fs I246、R259W和L576P突变。不同家系具有不同的突变位点，且突变类型和表型之间无特殊的相关性。