IgM特异性激活补体Clq类循环免疫复合物的检测

目的：建立检测IgM特异性激活Clq类循环免疫复合物（IgG/Clq-TCIC）的捕捉法ELISA。方法：以羊IgM抗人Clq为包被抗体，HRP－羊抗人IgM为检测抗体，采用捕捉法ELISA检测IgM/Clq-TCIC,并通过阻断试验、替代试验、重复性试验进行方法学论证。结果：最佳包被浓度为15μg/ml，标本稀释度为1：75，酶标抗体浓度为1：800。结论：本法敏感度高、特异性强、重复性好，对研究经典途径激活补体类循环免疫复合物具有重要意义。     

ELISA法检测HBsAg错误结果分析

临床多采用ELISA双抗体夹心法,检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg),其基本原理:包被抗原或抗体后,通过抗原抗体免疫学反应使酶标抗体结合到载体上,使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离,洗去游离的酶标抗体,加人底物,生成有色产物,在一定温度下一定时间后终止反应,根据颜色深浅进行定性或定量分析.在ELISA方法中,应用辣根过氧化物酶(HRP)作为标记酶最普及,用此方法检测HBsAg时,常出现一些错误的结果即假阳性或假阴性,本文对产生假阳性或假阴性的错误结果进行分析如下.     

检测肺炎荚膜多糖IgG抗体ELISA方法的建立

对抗原的包被浓度，缓冲液及包被条件进行了选择和优化，建立了检测肺炎荚膜多糖抗体浓度的间接ELISA法，用该ELISA系统比较了不同包被的（CPS，CPS－Tyr,mHSA)在不同酶标测定板中的包被效果。结果表明，单独的多糖对酶标测定板有较强的吸附性，板孔间检测结果均一性良好（CV＝1．24％），同其它结合物包被一样，足以区别保护和非保护性抗体浓度，能够较好地评价结合疫苗在动物和人体内诱导的抗体水平。     

夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的：建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的双抗体夹心ELISA，了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系．方法：以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb）为包被抗体，加入待测抗原以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定，建立双抗体夹心ELISA，并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平．结果：方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg／L，血清稀释倍数1：100，HRP标记mAb的最佳工作浓度为1：400．     

小鼠抗—HB_S单克隆抗体XM—B_5在免疫诊断中的初步应用

小鼠杂交瘤 XM—B_5 细胞培养上清液和小鼠腹水均含高滴度抗—HBs 抗体。经稀释后两者可直接用于免疫扩散法(ID)检测 HBsAg。上清液和腹水之抗—HBs 经纯化,可用于:1、致敏血球建立反白血凝法(RPHA),2、结合辣根过氧化物酶建立酶连免疫法(ELISA)。用三种方法(ID、RPHA、ELISA)检测132份血清标本,HBsAg 阳性率分别为46.21%,64.4%和70.4%。同时用市售北京生物研究所马抗—HBs2和 RPHA 检测时血球阳性率为37.9%和75%。     

结缔组织生长因子ELISA定量检测方法的建立及初步应用

目的:建立定量检测人结缔组织生长因子(CTGF)双抗体夹心ELISA方法,并应用此方法检测人血清中CTGF含量.方法:利用简易过碘酸钠法对纯化的抗CTGF单克隆抗体(mAbs)进行HRP标记后,行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性...     

性病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性lgM的酶联捕获技术,并分析性病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM（μ链特异性）抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶（HRP）标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测688例性病患者及450名健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行比较。结果性病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为274例（39.8%,酶标抗体法）和262例（38.1%,酶标抗原法）,与正常对照组（0.89%）存在显著性差异（P〈0.05）。酶标抗体法与酶抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时无显著性差异（P〉0.05）,阳性符合率95.6%,且不受类风湿因子（RF）的影响。结论酶联捕获HCMVpp65特异性lgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

探讨231例早产的原因

目的：探讨胶体金标法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的灵敏度和特异性。方法：以酶联免疫吸附（ELISA）法作为金标准方法，检测患者血清388份，其中检测出阴性262份，阳性126份，同时再用胶体金标法检测。结果：胶体金标法检测HBsAg的灵敏度为73．8％、特异性为96．6％，阳性预期值0．912，阴性预期值0．885，假阴性率26．2％，假阳性率3．44％。结论：胶体金标法检测HBsAg灵敏度低于ELISA，存在一定的漏检率，与ELISA法比较差异有显著性。     

HBsAg采用胶体金试纸法检测时的漏检情况探讨

目的探讨HBsAg采用胶体金试法与ELISA酶标法检测时漏检情况比较。方法选择该站2011年5—10月无偿献血者标本中用国产和进口两种ELISA酶标试剂筛查HBsAg均为阳性的标本185例。行胶体金试法检测,对造成胶体金法漏检的资料进行回顾性分析。结果 ELISA酶标法185例血清标本检测中,HBsAg阳性,男性110例,女性75例。胶体金试纸法185例血清标本检测中,110例男性样品中HBsAg阳性65例,阳性率为59%,漏检率为41%。75例女性样品中HBsAg阳性40例,阳性率为53%,漏检率为47%。男女两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论针对胶体金试纸法检测HBsAg的漏检情况,对于HBsAg浓度较低的标本,胶体金法检测时易出现假阴性造成漏检,需进一步提高胶体金试纸法的灵敏度,降低无偿献血HBsAg阳性的报废率;采用ELISA酶标法,同时在利用ELISA酶标法对HBsAg进行检测时,需应用相关部门提供的血清临界值做质控,以防止漏检发生。     

ELISA抑制法检测霍乱抗毒素影响因素的探讨

本文对ELISA抑制法检测霍乱抗毒素的影响因素进行了探讨，确定了抗体的包被浓度，时间和温度，选择了合适封闭剂，并对酶标板的再生方法进行了讨论。     

Hook效应引起的HBeAg检测假阴性问题

酶联免疫吸附试验（ELISA）中的Hook效应是由于抗原抗体（包括酶标抗体）比例不适所致。此效应引起HBsAg检测假阴性问题早有人关注[1]，但引起HBeAg检测假阴性并伴随HBeAb假阳性问题，虽为人所理解，但重视不够，尤在一步法ELISA检测中．这一问题更为严重。HBeAg作为乙肝传染性的血消学指标[2]．在临床上具有重要意义。本文就Hook效应引起的HBeAg检测假阴性问题进行探讨。1材料与方法1．1样品：我们收集经一步法ELISA检验的HBsAg阳性标本533份，其中摸式HBsAg（＋）、HBeAg（＋），HB-cAb（＋）标本123份，模式HBsAg（＋…     

乙型肝炎病毒DNA检测与其血清标志物的相关性

目的探讨实时荧光聚合酶链反应（FIQ—PCR）检测HBV—DNA与乙型肝炎病毒五项血清标志物（HBV—M）的关系。方法采用FO—PCR技术和酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测637例患者血清中的HBV—DNA拷贝数和乙肝五项血清标志物。结果HBV—DNA在“大三阳”组（HBsAg＋HBeAg＋抗HBc＋和HBsAg＋HBeAg＋）和“小三阳”组（HBsAg＋抗HBe＋抗HBc＋和HBsAg＋抗LHBc＋）可检出,在“单纯抗体阳性”组（抗HBs＋抗HBe＋抗HBc＋、抗HBs＋抗HBc＋、抗HBs＋抗HBe＋、抗HBs＋、抗HBe＋抗HBc＋及抗HBc＋）未捡出。“大三阳”组患者血清中HBV—DNA检出率为92．13％。且82．68％的患者HBV—DNA拷贝数在105copies／ml以上;“小三阳”组患者血清中HBV—DNA检出率为44．39％,HBV—DNA拷贝数分布范围广。结论HBeAg的存在可间接反映HBV在体内的复制状态,而HBV—DNA的检测更客观地反映了HBV复制的程度和传染性。     

MLCK定量检测的双抗体夹心ELISA方法建立

目的:建立定量检测人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的双抗夹心ELISA法.方法:用抗MLCK兔多克隆抗体包被酶标板,1％小牛血清白蛋白(1％BSA)作为封闭液,抗MLCK羊多克隆抗体和HRP-兔抗羊抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的优化;同时对新建立方法的灵敏度、精密度进行了评价...     

低水平HBsAg检测的初步探讨

目的 对低水平HBsAg检测的初步探讨。方法 将ELISA法检测HBsAg阴性标本106例分为两组，Anti-HBe阳性、Anti—HBc阳性56例作为第一组，Anti—HBs阳性、Anti—HBe阳性与Anti—HBc阳性50例作为第二组，用微粒子捕捉酶免法(MEIA，Mieroparticle enzyllle immunoassay)检测HBsAg。结果第一组阳性18例，占31％，第二组阳性5例，占10％。结论 ELISA法检测出的HBsAg阴性者中，仍可能有部分低水平HBV存在于体内或低水平的复制。     

双向离心法包被ELISA反应板制备乙型肝炎表面抗原检测试剂

目的通过提高包被板抗体的包被量来提高ELISA检测乙型肝炎表面抗原试剂的检出灵敏度。方法采用垂直自转离心和水平离心进行酶标板抗体包被,然后按常规ELISA法制成检测乙型肝炎表面抗原试剂,并对试剂各项性能指标进行检测。结果采用垂直自转离心和水平离心进行抗体包被制成的乙型肝炎表面抗原检测试剂灵敏度可达0.2ng/ml,特异性和精密性未受影响。结论可通过增加抗体包被量来提高ELISA试剂的灵敏度。     

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。     

巨细胞病毒感染捕获ELISA分析方法的建立和应用

目的：建立CMVIgM抗体捕获ELISA法并用聚合酶链反应（PCR）技术对此方法进行了评价。评价：采用巨细胞病毒（CMV）AD－169株感染人胚肺细胞的方法制备CMV抗原，并采用冻化抗制备法及甘愿酸法制备抗原，羊抗人IgM（μ链）McAb包被酶标板，建立CMVIgM抗体捕获ELISSA法。结果：不同浓度抗μ链McAb包被，包被时间、包被液、封闭液等不同条件，以有抗原浓度、抗CMV抗体酶结合物浓度对此法的建立有不同的影响。PCR法与用最佳条件配合后的本方法CMVIgM抗体检出率无显著差异（P＞0．05）。结论：本法测定CMV－IgM抗体的敏感性和特异性较高，简便、适用，易于推广，可广泛应用于临床。     

双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的初步建立

目的 建立快速检测骨唾液酸蛋白的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法,为试剂盒的研制奠定基础。方法 用鼠抗人骨唾液酸蛋白（BSP）单克隆抗体包被酶标板,兔抗人BSP检测,辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠二抗与兔抗人BSP相结合,初步建立BSP的双抗夹心ELISA检测方法。结果 自建双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的灵敏度为1.5ng/ml,标准曲线的线性范围为2-100ng/ml,回归方程y=0.2548x+0.0775 (r=0.992);批内批间变异系数分别为4.6％-5.4％和5.2％-7.1％,对人血清做50、25和10ng/ml三个加标浓度的回收率实验,回收率在47.2％-101％之间;4℃有效期至少360天。结论：成功建立双抗夹心ELISA检测BSP的方法。     

兔抗麻雀IgY酶标抗体的制备

目的制备辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和纯化兔抗IgY血清IgG,,使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果硫酸铵盐析法粗提IgY,可去除部分杂蛋白,SDS-PAGE上分离后切下带有目的条带的凝胶,可以得到足够纯度的抗原,将带有IgY的凝胶作为抗原免疫后获得的抗血清经Protein-A纯化后,二抗在SDS-PAGE上鉴定,纯度达到99%以上。改良的过碘酸钠法标记获得的抗体浓度为1.008 mg/mL,ELISA检测酶标抗体效价为1∶1000。Western blotting鉴定抗体具有特异性。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY酶标抗体。     

于洪区1～5岁儿童HBsAg和抗-HBs调查

目的：了解于洪区1-5岁儿童乙肝表面抗原（HBsAg）和乙肝表面抗体（HBs）水平。方法：用酶联免疫（ELISA）进行检测。结果：1—5岁儿童HBsAg阳性率为0．50％，接种疫苗1年的幼儿抗-HBs阳性率为80．36％，随接种年数的增长抗-HBs阳性率下降趋势明显。在抗-HBs阳性的儿童中有28．93％的儿童的阳转率处于微弱阳性状况。结论：应根据抗-HBs检测结果，及时给予乙肝疫苗补种和加强。