日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究

目的 观察日本血吸虫（中国大陆株）的线粒体相关蛋白rSj338及膜蛋白rSj22.6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性，为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗rSj338抗体和抗rSj22.6的抗体筛选噬菌体随机12肽库，将获得的rSj338的有效抗原表位与rSj22.6有效抗表位混合后免疫BALB／c小鼠，并与rSj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 rSj338的4种表位和rSj22.6抗原的4种表位混合免疫组小鼠获得了45．4％（P＜0．01）的减虫率及59．1％（P＜0．01）肝总减卵率，rSj338的4种表位混合免疫组小鼠获得了34．2％（P＜0．01）的减虫率及46．8％（P＜0．01）肝总减卵率；rSj338 4种表位和rSj22.6的4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于rSj338的4种表位混合免疫组，差异有显著性（P＜0．05）。结论 两种抗原分子的有效抗原表位联合免疫的效果优于单个抗原分子的有效抗原表位。     

用日本血吸虫感染新模型兔血清筛选噬菌体随机肽库的初步研究

目的在建立一种有成虫寄生但无虫卵肉芽肿形成的日本血吸虫感染小鼠及家兔新模型,并观察其具有较高的抗攻击感染保护力的基础上,用新模型兔血清筛选噬菌体随机12肽库,并初步鉴定阳性噬菌体克隆诱导小鼠抗日本血吸虫感染的免疫保护作用.方法用大肠杆菌抗原吸收后的新模型兔血清,经抗体捕获法筛选噬菌体12肽库,经3轮亲和筛选、富集后获得阳性多克隆.用常规ELISA法检测阳性多克隆噬菌体的抗原性.用滴度为1×1014pfu的阳性多克隆噬菌体按0-2-4周方案皮下多点注射免疫小鼠,末次免疫4周后,用日本血吸虫尾蚴攻击感染,同时设立常规感染兔血清筛获的阳性克隆免疫组、原始肽库免疫组、攻击感染对照组.结果①新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体(滴度为1×1014pfu)与新模型兔血清(稀释度为1:400)反应为强阳性,与常规感染兔血清(1:400)反应为弱阳性,与正常兔血清(1:400)反应为阴性.②用新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体、常规感染兔血清筛获的多克隆噬菌体及原始肽库分别免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为27.2%和38.8%、17.8%和35.0%、4.5%和6.0%.结论与用日本血吸虫常规感染模型兔血清筛获的多克隆噬菌体比较,经新模型兔血清筛获的含有模拟日本血吸虫抗原表位的多克隆噬菌体能诱导小鼠更高的抗攻击感染减虫率(P＜0.05)及相似的减卵率(P＞0.05);与原噬菌体随机肽库相比较,能诱导小鼠较高的抗攻击感染减虫率(P＜0.01)及减卵率(P＜0.05).     

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究

目的　从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。　方法　以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后第 4 5天剖杀小鼠 ,观察减虫和减卵效果。　结果　经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效的富集 ,第三轮洗脱噬菌体的产量约为第一轮的 15 0倍。随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 1个克隆能与旋毛虫感染鼠血清IgG特异性反应。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率与减卵率分别为 4 2 8%与 6 6 3% (P <0 0 0 1)。　结论　利用噬菌体随机肽库技术可获得模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导明显的抗血吸虫的保护性免疫。     

日本血吸虫雌虫抗原模拟表位的筛选及免疫保护性

目的　筛选日本血吸虫雌虫抗原的模拟表位 ,并探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。　方法　用日本血吸虫雌虫免疫兔血清IgG作配体对噬菌体随机 12肽库进行 3轮亲和筛选 ,随机挑取 18个噬菌体克隆用Dot ELISA检测其特异性 ,并对其中的 4个阳性克隆进行测序。分别在 0、2、4周用混合噬菌体克隆免疫小鼠 3次 ,第 6周每鼠经腹部感染 40条日本血吸虫尾蚴 ,42d后剖杀冲虫 ,计数虫数和每克肝卵数。　结果　经 3轮筛选 ,特异性噬菌体富集了 2 0 0多倍 ,随机挑取的 18个克隆经Dot ELISA鉴定有 17个能与雌虫抗原免疫兔血清呈阳性反应。DNA自动测序的 4个序列与GenBank的已知序列均无同源性。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 2 6.5 7% ,减卵率为 65 .3 4%。　结论　采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟日本血吸虫雌虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫。     

日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和表位疫苗联合免疫诱导的保护性免疫研究

目的 探讨日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和日本血吸虫抗原表位疫苗联合免疫对昆明感染鼠的免疫保护作用。方法 将制备的日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和用特异性抗体筛选噬菌体随机12肽库获得的日本血吸虫抗原表位疫苗联合或单独免疫昆明鼠,共3次,分别在0、2、4周进行。每次背部皮下多点注射50μg重组铁蛋白和/或10~(13)pfu表位疫苗,第6周每鼠经腹部感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴。攻击感染后42d剖杀冲虫,计数成虫及肝虫卵数。在免疫前和末次免疫后从小鼠尾静脉采血,分离血清,用间接ELISA法检测抗体反应。结果 联合免疫组与对照组相比,获得了32.8％的减虫率和63.0％的减卵率;单独重组铁蛋白疫苗免疫组的减虫率为21.6％,减卵率为49.5％;单独表位疫苗免疫组减虫率和减卵率分别为17.1％和44.3％,显著低于联合组(P<0.05);联合免疫组小鼠体内IgG的抗体水平明显高于其他各组。结论 日本血吸虫重组铁蛋白疫苗和表位疫苗联合免疫的效果优于单独应用铁蛋白免疫和表位疫苗免疫。     

日本血吸虫模拟短肽诱导小鼠的免疫保护性研究

目的　研究日本血吸虫模拟短肽对小鼠的免疫保护效果,预测其在抗血吸虫感染中的作用。　方法　用粗提纯大鼠血清IgG为配基对噬菌体肽库进行3轮免疫学筛选。随机挑取噬菌体克隆,检测其特异性并进行序列分析;用阳性克隆免疫小鼠,以40条日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42d剖杀取虫,计算减虫率和减卵率;用ELISA测定免疫鼠抗体反应。　结果　经过3轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集;自动测序仪测序获得2个模拟肽分子;将其用于免疫小鼠后,各免疫组与对照组相比,2个模拟肽混合免疫组的减虫率为34.9%P<0.05,肝内减卵率为67.6%(P<0.001)。 2个模拟肽分子分别免疫小鼠 ,各组的减虫率为31.0%(P<0.05)和14.5%(P>0.05)及肝内减卵率为61.2%(P<0.001)和35.7%(P<0.05)。ELISA检测其免疫组鼠血清特异性IgG抗体滴度均大于1∶6 400以上。　结论　利用噬菌体表面呈现技术获得的2个模拟肽分子均可诱导部分抗日本血吸虫感染的免疫保护力     

日本血吸虫雌虫抗原模拟表位的筛选及免疫保护性

目的筛选日本血吸虫雌虫抗原的模拟表位，并探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法用日本血吸虫雌虫免疫兔血清IgG作配体对噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选，随机挑取18个噬菌体克隆用Dot-ELISA检测其特异性，并对其中的4个阳性克隆进行测序。分别在0、2、4周用混合噬菌体克隆免疫小鼠3次，第6周每鼠经腹部感染40条日本血吸虫尾蚴，42d后剖杀冲虫，计数虫数和每克肝卵数。结果经3轮筛选，特异性噬菌体富集了200多倍，随机挑取的18个克隆经Dot-ELISA鉴定有17个能与雌虫抗原免疫兔血清呈阳性反应。DNA自动测序的4个序列与GenBank的已知序列均无同源性。与对照组相比，混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为26．57％，减卵率为65．34％。结论采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟日本血吸虫雌虫特异性抗原表位的短肽分子，这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫。     

日本血吸虫23kD抗原表位及多价疫苗的初步研究

目的　研究日本血吸虫 2 3kD抗原表位及日本血吸虫 2 3kD抗原大亲水区多肽 (LHD -Sj2 3)与脂肪酸结合蛋白(SjFABP)两个基因重组抗原联合免疫小鼠的保护效果。 方法　人工合成血吸虫 2 3kD抗原中一段可诱导T细胞和B细胞免疫应答的抗原表位多肽p14 ,与鸡白蛋白偶联后免疫小鼠。用LHD -Sj2 3和SjFABP两个基因重组抗原联合免疫大鼠 ,观察诱导的免疫保护效果。结果与结论　人工合成肽 p14诱导了 2 2 2 2 %～ 30 18% (P <0 0 5～ 0 0 0 1)的减虫率。用LHD -Sj2 3和SjFABP两个基因重组抗原免疫大鼠时 ,分别获得 32 14 %和 31 85 %的减虫率 (P >0 0 5 ) ,当用这两种基因重组抗原联合免疫大鼠时 ,获得了 4 7 2 8%的减虫率。加强抗原表位及“鸡尾酒”疫苗研究 ,可为寻找更高保护作用的抗血吸虫病疫苗提供基础。     

东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫噬菌体展示抗原的免疫预防效果

目的寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性靶基因。方法选取利用东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示文库获得的4个阳性噬菌体克隆免疫小鼠,评估观察其对小鼠日本血吸虫病的免疫预防效果。结果与噬菌体对照组、佐剂对照组和PBS对照组相比,1号克隆免疫组分别获得了28.23%、31.12%、29.86%的减虫率和51.73%、48.02%、55.58%的肝脏减卵率;4号克隆免疫组分别获得了24.28%、27.32%、26.00%的减虫率和45.52%、41.13%、49.86%的肝脏减卵率。结论 1号克隆展示的SJCHGC06713蛋白以及4号克隆展示的SJCHGC068068蛋白作为抗血吸虫疫苗值得进一步研究。     

模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.     

内镜下Oddi括约肌测压的临床意义

为观察胆石症、胆囊切除术后等胆系疾病及功能性消化不良（ＦＤ）、糖尿病胃轻瘫（ＤＧＰ）等非胆系疾病Ｏｄｄｉ括约肌（ＳＯ）功能变化，通过内镜采用灌注式高分辨多道胃肠功能测定仪，对１５例胆系疾病患者、１３例非胆系疾病患者进行Ｏｄｄｉ括约肌测压。结果显示，胆系疾病组的胆总管压力、ＳＯ基础压及蠕动波振幅明显高于非胆系疾病组（６．８６±０．６３ｋＰａ与１．２７±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；７．３１±０．９５ｋＰａ与１．８７±０．１６ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３２．００±１．２ｋＰａ与２４．１４±１．５ｋＰａ，Ｐ＜０．０５）；同时，非胆系疾病组的十二指肠压、ＳＯ蠕动频率及间期较胆系疾病组明显降低、减慢及延长（１．４２±０．２６ｋＰａ与０．３０±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３．６±１．２次／分与２．２±０．４次／分，Ｐ＜０．０５；７．４±１．２秒与１１．０±１．８秒，Ｐ＜０．０５）。结果显示，无论是胆系疾病还是ＦＤ及ＤＧＰ等非胆系疾病均有ＳＯ功能紊乱，但表现形式相反，对指导临床诊断与治疗有一定价值。     

钉螺3种酶的酶谱分析

本研究用淀粉凝胶同工酶电泳法比较了安徽及云南两省的钉螺的酸性磷酸酶（ＡｃＰ，ＥＣ３．１．３．２）、过氧化物酶（Ｐｏ，ＥＣ１．１１．１．７）及酯酶（Ｅｓｔ，ＥＣ３．１．１．１）的电泳带型。ＡｃＰ及Ｐｏ的同工酶中ＡｃＰ１、ＡｃＰ２及Ｐｏ１、Ｐｏ２由单态位点编码。Ｅｓｔ的同工酶由４个位点编码，其中Ｅｓｔ３在安徽的钉螺中为１条电泳快带，相对迁移率（Ｒｆ）为０．３６２±０．０２７；在云南的钉螺中为１条电泳慢带，Ｒｆ为０．３４０±０．０３６。     

骨代谢指标测定在骨质疏松诊治中的应用价值

目的 比较妇女绝经前后骨代谢指标的变化，研究各指标在骨质疏松症治疗后的变化率，对各指标在骨质疏松症诊治中的应用作出初步评价。方法 48例绝经前妇女、48例绝经后妇女测定10项骨代谢指标．45例绝经后骨质疏松症患者．治疗前、治疗6个月后分别测定10项骨代谢指标，观察其变化率。12名绝经后妇女，每两个月测定10项骨代谢指标。共观察一年。结果 绝经后妇女骨代谢指标明显升高，绝经后骨质疏松症患者经抗吸收治疗后．大部分骨代谢指标明显降低，血清骨形成指标比尿骨吸收指标长期个体内的变异要小。结论 绝经后骨质疏松症患者骨转换加快，部分血清骨代谢指标优于尿骨代谢指标，尤以血清骨形成指标N—mid骨钙素和血清骨吸收指标CTX为优。     

五例尸检法乐氏四联症的解剖形态观察

本文报告5例未经心内手术矫治的法乐氏四联症,对其心脏解剖形态及合并畸形,作了详细的观察和描述。