抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

我们既往的研究表明 [1,2 ] ,抗纤软肝冲剂对于肝硬变患者和实验性肝纤维化大鼠 ,都具有良好的治疗作用。本实验采用血清药理学方法 ,观察该方对肝星状细胞 ( HSC)增殖和胶原合成的影响 ,从细胞学水平探讨该方抗肝纤维化的作用机理。1　材料和方法1 .1　材料1 .1 .1　动物　 Wisitar大鼠 1 5只 ,体重 40 0 g～5 0 0 g,购自湖北医工所 ,普通饲料喂养。1 .1 .2　药物　抗纤软肝冲剂 (海藻 30 g,鳖甲 30 g,牡蛎 30 g,丹参 2 0 g,莪术 1 0 g) ,由湖北中医学院附院制剂科制成煎剂 ,每毫升含生药 2 .4g;秋水仙碱 ,由上海化学试剂站进口分装 ,批…     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的 从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法 抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清I型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量RT—PCR法检测间质胶原酶(MMN)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1）的mRNA表达。结果 抗纤软肝冲剂组细胞上清中的I型胶原含量明显低于其他两组(P＜0．05或P＜0．01)；明显促进细胞MMN的mRNA表达(P＜0．05或P＜0.01)，显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P＜0．05或P＜0．01)。结论 抗纤软肝冲剂能促进MMN基因表达，抑制TIMP-1基因表达，从而促进胶原降解，这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的：从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影 响。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。免疫细胞化学分析TGF-β1 的 蛋白合成；半定量RT-PCR 法检测TGF-β1 的mRNA 表达量。结果：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC 的自分泌TGF-β1 及其mRNA 表达(P<0.01)。结论：抗纤软肝冲剂能抑制HSC 的TGF-β1 的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化 效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的：探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法：将传代培养的大鼠肝星状细胞系（HSC—T6）与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清（5％、10％、20％）共同培养48h后，应用MTT法测定细胞增殖；应用流式细胞仪测定细胞凋亡；采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FAKmRNA的表达。结果：抗纤软肝颗粒药物血清，均能显著抑制HSC—T6增殖，20％药物血清组作用最强（P〈0．05）；流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡（P〈0.05）；抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAKmRNA的表达下调。结论：抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAKmRNA的表达有关。     

软肝冲剂对肝细胞影响及星状细胞活化机制的干预作用

目的：观察软肝冲剂抗肝纤维化的作用及机理。方法：体外培养四氯化碳（CCL4）肝纤维化大鼠肝细胞（HC）、星状细胞（HSC），观察软肝冲剂含药血清对其影响。结果：软肝冲剂有保护肝细胞、减轻CCl4对肝细胞损伤，抑制HSC活化，促肝细胞再生的作用。结论：软肝冲剂具有抗脂质过氧化和抑制HSC活化的作用，从而抑制肝纤维化的形成。     

软肝冲剂对大鼠肝星状细胞增殖及分泌TGFβ1影响的血清药理学研究

软肝冲剂是我院 30年来防治肝硬化的协定处方 ,已进行的实验研究证实其具有抗鸭乙型肝炎肝纤维化的作用。为进一步从细胞分子水平揭示其抗肝纤维化的机理 ,我们通过建立大鼠肝星状细胞 (ＨＳＣ)体外培养体系 ,用3Ｈ -ＴｄＲ掺入法测定ＨＳＣ的增殖 ,用细胞抑制ＭＴＴ比色法测定总转化生长因子 β1 (ＴＧＦβ1 )的活性来进行软肝冲剂对大鼠ＨＳＣ增殖和分泌ＴＧＦβ1 影响的血清药理学研究 ,现报告如下。1　材料及药物血清制备　分离ＨＳＣ选择体重 30 0～ 450ｇ ,制备药物血清选择体重 2 0 0～ 30 0ｇ的Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠 ,动物购自中国…     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法:将传代培养的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法测定细胞增殖;应用流式细胞仪测定细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FAK mRNA的表达。结果:抗纤软肝颗粒药物血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,20%药物血清组作用最强(P<0.05);流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡(P<0.05);抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAK mRNA的表达下调。结论:抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAK mRNA的表达有关。     

抗纤软肝冲剂抗大鼠肝纤维化的实验研究

采用四氯化碳(CCl4)高脂低蛋白等复合因素诱导的大鼠肝纤维化模型,以秋水仙碱作对照,观察抗纤软肝冲剂对肝功能、免疫学、肝纤维化相关指标、肝组织羟脯氨酸(Hyp)及肝组织病理学的影响.结果抗纤软肝冲剂和秋水仙碱有良好的抗肝纤维化效果,其中抗纤软肝冲剂有显著改善肝功能、调节免疫功能、降低免疫复合物(IC)、降低肝纤维化相关指标和Hyp含量的作用.     

软肝冲剂对肝细胞影响及星状细胞活化机制的干预作用

目的:观察软肝冲剂抗肝纤维化的作用及机理。方法:体外培养四氯化碳(CCL4)肝纤维化大鼠肝细胞(HC)、星状细胞(HSC),观察软肝冲剂含药血清对其影响。结果:软肝冲剂有保护肝细胞、减轻CC l4对肝细胞损伤,抑制HSC活化,促肝细胞再生的作用。结论:软肝冲剂具有抗脂质过氧化和抑制HSC活化的作用,从而抑制肝纤维化的形成。     

抗纤软肝颗粒含药血清对肝星状细胞黏着斑激酶mRNA、蛋白表达的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒含药血清对肝星状细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA、蛋白表达的影响。方法:运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为(1)空白包被+10%生理盐水血清组;(2)纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水血清组;(3)FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(kxr)组;(4)FN+10%kxr组;(5)FN+20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测FAK蛋白的表达,采用RT-PCR法测定FAKmRNA的表达。结果:kxr组肝星状细胞的FAKmRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了72.78%和27.88%,78.82%和44.85%,85.51%和57.58%,与对照组及FN组相比,5%kxr组(P<0.05),10%kxr组、20%kxr组(P<0.01)。结论:kxr能在转录及翻译水平抑制FAKmRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的FAK途径的信号转导。     

软肝煎药物血清对肝星状细胞免疫保护作用的研究

目的:探讨软肝煎药物血清对肝星状细胞(HSC)的免疫保护作用.方法:先采用不同两种种族的动物血清培养人肝星状细胞株(Lx-1),研究不同种族的血清对同一细胞的免疫损伤作用,然后再采用对Lx-1细胞株损伤小的血清组与软肝煎药物血清组进行比较来研究对肝星状细胞的免疫保护作用.结果:在测定LDH活性中,小牛血清组与大鼠血清组比较,各组浓度均有非常显著性差异(P＜0.01).药物血清组与大鼠血清组比较,各组浓度均有非常显著性差异(P＜0.01).药物血清组5%与10%比较无显著性差异(P＞0.05),浓度5%、10%两组与浓度20%比较有非常显著性差异(P＜0.01).结论:软肝煎药物血清对肝星状细胞有很好的免疫保护作用;培养细胞最好使用与培养细胞同一种族的血清.     

抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的实验研究

目的 :通过抗纤软肝冲剂对肝纤维化动物防治作用的研究 ,探讨该方抗肝纤维化的作用机理。方法 :四氯化碳、高脂、高胆固醇、低蛋白等复合因素诱导大鼠肝纤维化动物模型 ,同时给予抗纤软肝冲剂 ,以秋水仙碱为对照。检测肝组织羟脯氨酸 Hyp、超氧化物歧化酶 SOD及丙二醛 MDA,观察血清肝纤维化指标 (透明质酸 HA、层粘蛋白 LN、 型前胶原 PC 、 型胶原 -C)及肝功能 (白蛋白 Alb、球蛋白 G、谷丙转氨酶 A LT)。结果 :抗纤软肝冲剂对肝纤维化大鼠有升高A lb,降低 AL T和 G的作用 ;显著提高肝 SOD活性 ,降低 MDA含量 ;显著降低 HA ,LN ,PC , -C;减轻肝脏 Hyp的作用。结论 :抗纤软肝冲剂具有确切的防治肝纤维化的作用 ,其机理在于抗脂质过氧化和保护肝细胞 ,对胶原代谢也有直接作用     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.