聚合草叶蛋白的酸化加热法提取工艺研究

目的:确立酸加热法提取聚合草中叶蛋白的最佳工艺。方法:分析了加热时间、加热温度、pH值对蛋白质提取率有影响;通过正交试验对聚合草叶蛋白的提取工艺进行优化。结果:对提取率影响的因素依次为pH>加热时间>加热温度;当加热时间为7 min,加热温度为90℃,盐酸调pH值为1.5时,叶蛋白的提取率为1.36%,叶蛋白的沉淀率为51.70%。结论:酸加热法提取工艺效果较好、得率较高,可有效提取聚合草中的叶蛋白。     

阳春砂种子蛋白质提取方法的探索

【目的】探索适用于阳春砂种子蛋白质的提取方法,为研究阳春砂种子休眠与萌发过程中的差异蛋白质组学奠定基础。【方法】分别采用4种较常用的蛋白质提取方法[Tris-HCl提取法、三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法、直接裂解法以及改良Tris-饱和酚法]提取,对得到的蛋白质提取液进行定量及十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分析。【结果】直接裂解法蛋白质提取率最大,小分子蛋白较多; Tris-HCl法提取率最小,且条带扩散; TCA-丙酮沉淀法和改良Tris-饱和酚法提取率居中,但是TCA-丙酮沉淀法条带少,饱和酚法条带多,且可以得到大分子蛋白。【结论】可以综合直接裂解法和改良Tris-饱和酚法,为阳春砂种子双向电泳的蛋白质提取方法提供参考。     

不同样品制备方法对双向电泳图谱的影响

【目的】探索体外培养星形胶质细胞双向电泳样品制备方法,提高电泳分辨率和重复性。【方法】分别应用直接裂解法和TCA-丙酮沉淀法制备蛋白样品,比较各提取方法对电泳图谱的影响。【结果】TCA-丙酮沉淀法所制备的蛋白样品,电泳图谱所获蛋白斑点数目较多,斑点较清晰,分辨率较高,重复性较好。【结论】TCA-丙酮沉淀法更适于制备体外培养星形胶质细胞双向电泳蛋白样品。     

三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取

目的 探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率.方法 采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比.结果 三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响.结论 三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究.     

半夏总蛋白提取及其动态变化研究

目的 优选出半夏总蛋白提取的最适方法并研究不同生长时期总蛋白量及成分的变化,为半夏药用成分的监控及合理采收提供科学依据。方法 采用丙酮沉淀法、95% (NH₄)₂SO₄盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取半夏总蛋白,筛选半夏总蛋白提取的最佳方法。分别于半夏出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰苞期及倒苗期采集样品,分为新鲜组和干燥处理组,提取样品总蛋白,进行SDS-PAGE电泳检测及Bradford浓度测定。结果 丙酮沉淀法、95% (NH₄)₂SO₄盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取的半夏总蛋白量分别为0.369、0.678、1.082、0.493 mg/mL;新鲜半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期4.53 mg/g、全苗期2.28 mg/g、珠芽期2.79 mg/g、佛焰苞期7.61 mg/g、倒苗期10.21 mg/g;干燥半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期31.85 mg/g、全苗期18.52 mg/g、珠芽期42.08 mg/g、佛焰苞期28.56 mg/g、倒苗期56.84 mg/g;新鲜半夏块茎中蛋白含有15条蛋白带,干燥处理半夏块茎中蛋白含有5条蛋白带。结论 TCA-丙酮法是半夏总蛋白提取的最佳方法,不同生长时期的半夏块茎中蛋白成分各异,倒苗期总蛋白量最高。     

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。     

聚合草粗多糖提取工艺研究

目的用水提醇沉法对聚合草粗多糖的提取工艺进行研究。方法分析料液比、提取温度和加热时间对聚合草多糖提取率的影响,以正交试验确定聚合草粗多糖提取的最佳工艺条件。结果聚合草粗多糖提取的最佳工艺参数是料液比1∶8,提取温度90℃,加热时间为40 min,在此条件下的粗多糖的得率是2.31%。结论确定了聚合草中粗多糖提取的最佳工艺条件,为以后聚合草的开发利用和功能研究奠定了基础。     

从银杏叶中提取银杏黄酮甙的工艺比较及实验优化

目的　选择微波辅助提取银杏黄酮甙的最佳条件 ,并对银杏黄酮甙的微波辅助提取法与常用的热浸泡法进行对比研究。方法　采用热浸泡法及微波辅助法提取银杏黄酮甙 ,同时对微波法进行正交和均匀实验优化 ,并用分光光度法测定提取干膏中的黄酮甙含量。结果　正交和均匀实验优化获得的最佳条件下的提取率和黄酮纯度基本相当。正交实验的最佳提取率为 2 12 .4mg g ,纯度为 61.9%;均匀实验的最佳提取率为 2 16.2mg g ,纯度为 5 7.1%。而热浸泡的提取率仅为 114 .6mg g ,纯度为 40 .1%。结论　微波辅助提取法的提取率和产物纯度均有显著提高 ,结果表明它是一种合适的提取法。     

正交试验法优选飞机草药材中芹菜素提取工艺研究

目的：优选飞机草药材中芹菜素的提取工艺。方法：以芹菜素提取率为考察指标,采用正交试验,以丙酮用量、提取时间和药材粉碎粒度为考察因素,优化飞机草中芹菜素的提取工艺。结果：优选出的最佳提取工艺为飞机草药材量与丙酮量之比为1∶100,超声提取30min,药材粉碎粒度为80目。结论：该提取工艺合理,方法简便,可为飞机草中总黄酮提取工艺的确定提供实验依据。     

木麻黄鞣质提取工艺的初步研究

目的：研究木麻黄鞣质的提取工艺,为其开发应用提供理论依据。方法：分别采用不同溶剂对木麻黄鞣质进行提取及纯化。结果：以60％丙酮为溶剂进行提取,以乙酸乙酯为溶剂进行纯化,鞣质纯度可达到75％左右,且重复性较好。结论：本提取工艺鞣质提取率及纯度均达到一定水平。     

聚合草中黄酮类物质的提取工艺研究

目的:采用浸提正交实验设计优化聚合草中黄酮的提取工艺。方法:以水为提取溶剂采用正交试验设计探讨提取温度、料液比、提取时间等因素对聚合草中黄酮类物质提取量的影响。结果:聚合草黄酮类物质的最佳提取工艺参数为:浸提温度90℃、料液比1∶40、浸提时间2.5 h,在此条件下聚合草提取液中黄酮类物质百分含量为3.01%。结论:优选得到的工艺确实可行,适合聚合草中黄酮类物质的提取。     

聚合草多糖对油脂抗氧化作用的研究

目的检测聚合草多糖对食用油脂氧化的抑制作用,为多糖抗氧化作用的进一步研究和利用提供科学依据。方法采用水提法从聚合草中提取多糖,以猪油、芝麻油为底物,采用碘量法对聚合草多糖的抗氧化性能做了初步研究。结果在第5天时,与猪油空白对照（过氧化值为0.082%）相比,添加了聚合草多糖的猪油过氧化值（0.059 6%）降低了27.3%,添加了维生素c（Vc）的猪油过氧化值（0.042 5%）降低了48.2%;与芝麻油空白对照（过氧化值为0.058 4%）相比,添加了聚合草多糖的芝麻油过氧化值（0.034 3%）降低了41.3%,添加了Vc的芝麻油过氧化值（0.027 5%）降低了52.9%。结论聚合草多糖对动植物油脂均具有抗氧化性能,但其抗氧化性能要弱于Vc。     

菟丝子水溶性蛋白提取工艺研究简

目的：优化菟丝子水溶性蛋白提取工艺。方法：采用单因素考察法,以蛋白提取率为评价指标,优选最佳提取工艺。结果：菟丝子水溶性蛋白最佳提取工艺为：pH 8.5（含0.5 mol/L NaCL）,料液比1∶60,浸提3次,每次24 h。结论：优选出的提取工艺稳定、合理,可为菟丝子水溶性蛋白提取工艺的确定提供实验依据。     

口虾蛄总生物碱提取及其对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖影响

目的筛选口虾蛄总生物碱的提取方法,并研究口虾蛄总生物碱在体外对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用。方法口虾蛄乙醇提取物及新鲜口虾蛄分别以酸提碱沉,继以乙酸乙酯萃取,取得上清提取物(简称L)和沉淀提取物(简称S);以薄层色谱法探讨各提取物的分离条件及初步化学性质鉴定;继用CCK-8法观察各提取物体外对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长增殖的影响。结果以新鲜口虾蛄酸提碱沉后萃取所得总生物碱较多;氯仿-环乙烷系统分离各提取物效果最佳;沉淀提取物(S)的显色反应及色谱显色结果显示其可能为生物碱类物质;口虾蛄总生物碱S1和S2均对人鼻咽癌CNE-2Z细胞有明显的抑制作用,而上清提取物L1及L2则不明显;口虾蛄总生物碱S1和S2作用于人鼻咽癌CNE-2Z细胞48 h后,其IC_(50)分别为(71.18±0.56)μg/mL和(49.31±0.65)μg/mL。结论以新鲜口虾蛄酸提碱沉后萃取总生物碱的方法,简便、稳定、高效;口虾蛄总生物碱体外可明显抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长,显示有较好的开发应用前景。     

老瓜头愈伤组织诱导培养技术的研究

目的为老瓜头Cynanchum komarovii资源利用提供前期的生物技术实验参考。方法以老瓜头的根段、茎段和叶片为外植体,采用正交试验方法,筛选诱导愈伤组织产生的最适培养基;进行愈伤组织增殖培养过程中,测定了不同时间愈伤组织的鲜、干质量,绘制愈伤生长曲线;同时进行了愈伤组织分化培养基的实验筛选。结果不同外植体诱导愈伤产生,其根诱导效果最好,各处理诱导率达90%~100%,茎段和叶片愈伤组织诱导最佳配方分别为MS 2,4-D1.0mg/L 6-BA2.0mg/L NAA0.5mg/L和MS 2,4-D0.5mg/L 6-BA0.5mg/L NAA0.5mg/L,茎段比叶片较容易诱导,各处理诱导出的愈伤组织质地松散,颜色鲜黄,几乎无褐化现象。愈伤组织继代生长在第10天进入对数生长期,愈伤鲜生长量最大达4.961g,干质量0.496g。愈伤组织的分化率很低,很难生芽,易分化出钉状根。结论对于诱导愈伤形成,根段是最佳的外植体,筛选出了茎段和叶片诱导愈伤的最适配方,愈伤组织生长量较大,但分化困难。     

采收时期、部位、干燥方式对海南罗勒精油质量的影响

目的:探讨采收时期、部位以及干燥方式对海南罗勒精油的影响。方法:采摘海南罗勒(Ocimumbasilicum L.)无花鲜叶(嫩)、含花鲜叶(嫩)、全花、全叶、茎;取新鲜罗勒嫩叶,部分经过冻存、50℃低温烘干或自然风干等处理,再用水蒸气蒸馏法提取精油,以精油收率对上述处理过程进行评价。利用气相色谱或气相色谱-质谱联用技术分析上述所得的精油,利用正交实验法优选罗勒鲜叶水蒸气蒸馏的最佳工艺。结果:无花嫩叶出油率最低,全花出油率最高,顺序是:全花>全叶>含花鲜叶>无花嫩鲜叶,茎中不含精油。鲜叶低温烘干或自然风干比鲜叶和冻存鲜叶的出油率低,约损失35%。精油中主要的物质为沉香醇(34.4%)、丁香酚(19.0%)、甲基胡椒酚(13.4%)等。丁香罗勒鲜叶剪成5cm长、加入5倍量水和提取3h为水蒸气蒸馏的最佳提取工艺。结论:采收时期、部位、干燥方式对海南罗勒精油的质量产生影响,这些信息可为海南罗勒精油的研究开发提供参考。     

黄瓜籽蛋白提取工艺及性质研究

目的：确定黄瓜籽蛋白最佳提取工艺,并对蛋白等电点及分子量进行考察。方法采用盐溶法通过L9（34）正交试验进行提取工艺考察,通过测定最低溶解度的pH值确定蛋白等电点、硫酸铵分级沉淀及膜透析除盐得到黄瓜籽蛋白,并利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白分子量。结果黄瓜籽蛋白最佳提取工艺为NaCl溶液浓度0.14 mol/L、料液比1：3、提取温度4℃、pH值5、浸提时间8 h、提取次数为3次,经计算生药黄瓜籽中蛋白含量为3.04％,硫酸铵沉淀饱和度为55％,等电点为3.8,蛋白分子量分布于35 KD以下。结论本法确定了黄瓜籽蛋白的最佳提取工艺及性质,为蛋白的进一步分离、纯化及活性研究奠定了基础。     

Comparison of Three Methods of Protein Extraction from Dermatophagoides Pteronyssinus for Two-dimensional Electrophoresis

Obiective To explore an effective method of Dermatophagoides pteronyssinus protein extraction suitable for two-dimensional electrophoresis （2-DE） analysis. Methods The extracts of Dermatophagoides pteronyssinus were prepared with Coca＇s solution, lysis buffer of 2-DE, and Trizol reagent, respectively. Bicinchoninic acid （BCA） assay was used to determine the total protein concentration of the samples. The efficiency of different protein extraction methods were evaluated with 2-DE analysis. Results The concentrations of extracted protein by methods of Coca＇s solution, lysis buffer, and Trizol reagent were 0.63 g/L, 0.90 g/L, and 0.80 g/L, respectively. The 2-DE analysis results showed that some protein spots in low molecular weight （LMW） range could be detected with the Coca＇s solution method. With the lysis buffer of 2-DE method, more protein spots in LMW range could be detected, while the medium molecular weight （MMW） protein spots were absent. Several MMW protein spots （174-178 kD and 133 kD） and more LMW protein spots were detected withTrizol reagent method. Conclusions Among Coca＇s solution, lysis buffer of 2-DE, and Trizol reagent, the concentration of extracted protein of Dermatophagoides pteronyssinus by lysis buffer of 2-DE is the highest. However, most protein components of Dermatophagoides pteronyssinus purified mite bodies can be extracted by Trizol reagent, which may generally reflect the whole profile of Dermatophagoides pteronyssinus allergens.