制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较张津辉蒋中华陈惠鹏军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和非解离聚丙烯酰胺凝胶电泳（非解离ＰＡＧＥ）在实验室中常用于制备少量天然或重组蛋白质以供研究其理化性质和...     

毛细管区带电泳法测定头孢氨苄胶囊的含量

目的毛细管区带电泳法测定头孢氨苄胶囊的含量。方法毛细管区带电泳法,有效毛细管长度40cm×75μm;硼砂缓冲液25mmol·L-1(pH7.89),分离电压14kV,温度25℃,检测波长214nm,枸橼酸昔多芬为内标。结果头孢氨苄在33.9~678μg·ml-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9996),回收率在97.9%~102.4%之间。结论本法简单、快速、灵敏,可用于头孢氨苄胶囊的含量测定。     

毛细管区带电泳法测定哌拉西林钠的含量

目的　建立毛细管区带电泳法测定哌拉西林钠的含量。方法　以 2 5mmol·L-1的硼砂为缓冲液 (pH7.78) ,检测波长2 5 4nm ,内标枸橼酸昔多芬。结果　哌拉西林钠在 2 9.6～ 5 92 μg·ml-1范围内线性关系良好 ;加样回收率 98.7%～ 10 2 .4 % ,RSD在 1.8%～ 2 .7%之间。结论　本法简便、快速 ,可用于哌拉西林钠的含量测定。     

高效毛细管区带电泳法测定羟基喜树碱注射液的含量

目的　建立羟基喜树碱注射液的毛细管区带电泳测定方法。方法　在Beckman 5 0 0 0型毛细管电泳仪上 ,采用石英毛细管柱 ,以 2 0mmol·L-1硼砂溶液为电极缓冲液 ,2 14nm的检测波长 ,进行定量分析。结果　在 1～ 10 μg·ml-1范围内呈良好的线性关系 ,其回归方程为 :Y =0 .0 0 5 5 2X +0 .0 0 3 5 ,r=0 .9996 ,回收率大于 95 .6 8% ,最小检测限为 0 .5 μg·ml-1(S/N =3)。结论　毛细管区带电泳可以用于羟基喜树碱注射液的定量分析 ,具有高效、快速、简便、样品及试剂消耗少等优点     

游泳对不同蛋白质负荷大鼠蛋白质代谢的影响

实验观察了３种蛋白质负荷水平（７％、１７％、２７％）的Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠，游泳后蛋白质代谢情况，结果表明，游泳可降低氮平衡值和骨骼肌氮含量，而血清尿素和氨基酸水平以及肝脏氮含量均增高，表明蛋白质分解代谢增强。游泳对不同蛋白质负荷水平大鼠的影响程度不同，１７％组大鼠更有利于抵御高强度游泳引起的蛋白质分解作用，并具有较强的运动耐力。     

膜蛋白质组分析技术的研究进展

膜蛋白在细胞中执行着一些非常重要的功能。膜蛋白的溶解性是膜蛋白质组分析面临的主要挑战。膜蛋白溶解性的提高，使得经典的基于凝胶的蛋白质组策略和新兴的鸟枪蛋白质组策略在膜蛋白质组分析中逐渐被广泛应用，进而可以揭示膜蛋白的拓扑学特征和鉴定其翻译后修饰，为深入研究其重要的生物学功能积累数据。     

无胶筛分毛细管电泳分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸方法初探

目的：建立和优化分离不同碱基数目硫代脱氧寡核苷酸的有效方法。方法：用去离子水溶解硫代脱氧寡核苷酸样品并采用核酸蛋白分析仪定量。在无胶筛分毛细管电泳分离分析之前超声波和高速离心脱气。无胶筛分毛细管电泳以线性大分子ssDNA 100-R Gel作为分离介质。为得到最佳效果，对毛细管温度、分离电压、进样方式和进样时间进行了优化。结果：灵敏度、迁移时间和重现性的最佳实验条件为：毛细管温度25℃，电动进样10kV10s，DAD检测器波长为255nm，18kV恒压分离模式。在此条件下，成功分离了依次相差一个碱基的21种脱氧寡核苷酸[pd(A)40-60]。结论：建立并优化了一种简单快速分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸的毛细管电泳方法。     

高效毛细管电泳（HPCE）的分析应用进展

目的：综述毛细管电泳的定量分析应用。方法：通过总结毛细管电泳在蛋白质，核酸等生命物质及各种药物，离子方面的分析应用，展望毛细管电泳的广泛前景。结果与结论：毛细管电泳在分析方面具有以往分析方法无法比拟的优越性。     

毛细管区带电泳法测定甘草浸膏粉中甘草酸和甘草次酸的含量

目的　建立测定甘草浸膏粉中甘草酸和甘草次酸含量的方法。方法　用毛细管区带电泳法 ,紫外检测波长 2 2 8nm ,电压 14kV ,以 5 0mmol·L-1硼砂溶液为背景电解质 ,氢氯噻嗪为内标 ,对甘草浸膏粉中的甘草酸和甘草次酸进行定量分析。结果　甘草酸和甘草次酸的相对峰面积 (氢氯噻嗪为内标 )与各自的质量浓度呈良好的线性关系 ,甘草酸和甘草次酸的平均回收率分别为 98.2 %、96 .8% .结论　该法操作简便、准确、快速     

氨基酸组成分析直接鉴定SDS-PAGE分离的蛋白质

蛋白质组学是后基因组时代研究的重要领域。蛋白质组研究的基本技术包括双向凝胶电泳分离技术、蛋白质鉴定技术、计算机图像数据处理与蛋白质组数据库构建等。氨基酸组成分析［1,2］作为蛋白质组研究中的鉴定方法之一,对质谱鉴定、N端氨基酸序列鉴定等具有补充及验证作用。蛋白质是由20种氨基酸通过肽键连接起来的生物大分子,测定蛋白质的氨基酸组成可获得蛋白质的基本信息。本研究以马心肌红蛋白和细胞色素C为样品,优化实验条件,以此建立一种高灵敏度、高准确度的鉴定双向凝胶电泳分离后的蛋白质点方法。该方法还可用于分析天然蛋白质、基因重组蛋白质。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 试剂丙烯酰胺、过硫酸胺、甘氨酸、十二烷基磺酸钠(SDS)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、三氟醋酸(TFA)、无水醋酸钠均为国产分析纯;甲叉双丙烯酰胺为进口分装;乙腈、甲醇为色谱纯;邻苯二甲醛（OPA）溶液、氯甲酸芴甲酯(FMOC)溶液、标准氨基酸溶液、硼酸盐缓冲液（pH 10.2）购自Hewlett Packard公司;邻苯二甲醛、马心肌红蛋白、细胞色素C为Sigma公司产品。 1.1.2 仪器 Hewlett Packard 1100 HPLC自动氨基酸分析仪;转印仪为Bio-Rad 半干转印仪。 1.2 SDS-PAGE电泳 采用15%分离胶,5%浓缩胶;马心肌红蛋白、细胞色素C上样量均为10 μg;聚集电压85 V,1 h;分离电压105 V,3 h;考马斯亮蓝染色。 1.3 电转印 转印缓冲液：0.025 mol/L Tris,0.192 mol/L甘氨酸,20%甲醇;电转印条件：恒电压24 V,1 h。当凝胶上的蛋白质点转印到PVDF膜时,将PVDF膜用水多次漂洗,晾干,待用。 1.4 酸水解 切割PVDF膜上的蛋白质点,放入小玻璃管中,加6 mol/L盐酸400 μl,封口,110℃水解24 h。1.5 氨基酸的提取 将水解后小玻璃管中的样品转移至1 ml样品管中,用氮气吹尽盐酸,并减压抽干。加170 μl提取溶液（水、乙腈和0.1%TFA的比例为50∶100∶20）,充分振摇,超声10 min,除去PVDF膜,冷冻干燥。加40 μl硼酸盐缓冲液,混匀,离心,取上清液,浓缩。 1.6 氨基酸的测定 采用OPA/FMOC柱前衍生方法。色谱条件：色谱柱C18 ODS-Hypersil,5 μm,125 mm×4 mm;柱温40℃;检测波长338 nm,226 nm;流速1 ml/min,进样量1 μl。流动相A：0.02 mol/L醋酸钠,0.018%三乙胺,0.3%四氢呋喃,用10%醋酸调pH至7.2。流动相B：0.1 mol/L醋酸钠（pH 7.2）∶乙腈∶甲醇（20∶40∶40）。洗脱梯度：0.0 min,0%B;17 min,60%B;18.0 min,100%B;24.0 min,100%B;25.0 min,0%B。 1.7 数据库检索 采用Internet上ExPASy蛋白质数据库检索,软件为AACompIdent,选择匹配模型free constellation,按以下各氨基酸之间的摩尔比值输入计算机,Asx,Glx,Ser,Thr,Ala,Pro,Arg,Val,Ilu,Leu,His,Gly,Tyr,Phe。蛋白质酸水解后Cys和Trp几乎被完全破坏,Met,Lys大部分被破坏,因此不输入计算机。Asn和Gln水解后分别为Asp和Glu。     

高效毛细管电泳法测定何首乌中二苯乙烯甙的含量

目的：建立测定何首乌中二苯乙烯甙含量的高效毛细管电泳法。方法：电解液为２０ｍｍｏｌ·Ｌ＾－１硼砂,检测波长２１４ｎｍ,二苯乙烯甙为对照品,测定了何首乌及其制剂中二苯乙烯甙的含量。结果：进样量在１０．０￣１００．０μｇ·ｍｌ＾－１范围内线性关系良好（ｒ＝０．０９９９９）,加样回收率为９８．７１％,ＲＳＤ为１．５１％（ｎ＝３）,测得生何首乌,制何首乌及优生宝胶囊中二苯乙烯甙的含量分别为０．１２７％、０     

非水毛细管电泳拆分抗胆碱能药物对映体

目的建立非水毛细管电泳拆分体系拆分抗胆碱能药物。方法以有机溶剂甲醇为分离介质,磷酸和氢氧化钠为支持电解质,采用带负电荷的环糊精作手性选择剂,对几种抗胆碱能药物进行了毛细管电泳拆分,并探讨了影响拆分的因素。结果以带负电荷的环糊精HDMSβCD为手性添加剂,在含有20mmol·L-1H3PO4和10mmol·L-1NaOH的甲醇介质中,成功分离了6种抗胆碱能手性药物。结论该方法具有操作简单、重现性好、分析时间短等优点,值得推广应用。     

毛细管电泳法测定尿路康颗粒中水苏碱的含量

目的建立一种以毛细管电泳法测定尿路康颗粒中盐酸水苏碱含量的方法。方法以水为溶剂,用外标法进行含量测定;采用毛细管区带电泳（CZE）分离模式,运行缓冲液2．0mmol·L^-1（pH5．0）磷酸盐缓冲液;分离温度25℃;分离电压20kV;进样压力为0．5Psi,持续5s;检测波长195nm。结果盐酸水苏碱在0．0149—0．993mg·ml^-1浓度范围内线性关系良好（r=0．9998）,回归方程为：A=90735C-785．36;加样回收率为97．1％（n=6）,RSD为2．2％。结论此方法准确可靠,操作简便易行,可用于控制尿路康颗粒的质量。     

毛细管电泳法测定蒲黄饮片黄酮苷含量

目的探寻蒲黄饮片炮制前后黄酮苷含量的变化。方法采用毛细管电泳法测定市售蒲黄、炒蒲黄和蒲黄炭及炮制前后蒲黄中黄酮苷含量。结果毛细管电泳缓冲体系为pH 8.4的20 mmol.ml-1硼砂溶液。香蒲新苷在1.96～78.4μg.ml-1浓度范围内线性关系良好,精密度RSD小于3.03%。异鼠李素-3-O-新橙皮苷在2.04～102μg.ml-1浓度范围内线性关系良好,精密度RSD小于2.59%。市售的5种蒲黄中的黄酮苷(香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷)含量大于0.27%;市售的3种炒蒲黄中黄酮苷含量大于0.19%;蒲黄炭中的黄酮苷含量都很低。蒲黄中的黄酮含量与烘制法炮制的温度和时间有关。结论市售的5种蒲黄中有4种蒲黄黄酮苷含量符合《中国药典》的规定,市售的3种炒蒲黄中的黄酮苷含量均明显高于蒲黄炭。用烘制法炮制蒲黄温度控制在140℃8～12 min或170℃4 min时,黄酮苷含量降低并与市售的炒蒲黄相近。     

高效毛细管电泳法同时测定苦豆子总碱注射液中3种生物碱的含量

目的应用高效毛细管电泳法测定苦豆子总碱注射液中苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱的含量。方法运行缓冲液为100mmol·L-1硼砂,pH=9.2;运行电压8kV(恒压分析);柱温25℃;检测波长215nm;盐酸麻黄碱为内标。结果槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱的线性范围分别为52.4～524、48.8～488、20.4～204μg·ml-1,平均回收率分别为98.22%、97.73%、98.82%,RSD分别为1.38%、2.15%、1.99%(n=6)。结论该方法简便、准确、重现性好,可作为苦豆子总碱注射液中生物碱的质量控制方法。     

毛细管电泳法测定去甲肾上腺素进样方法探讨

目的：比较毛细管电泳法测定去甲肾上腺素（ＮＥ）中流体力学和区带浓缩两种进样方法对检测灵敏度的影响。方法：区带浓缩法：２ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１硼酸压力进样１０ｓ,样品电进样８０ｓ,（样品溶于２ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１硼酸溶液中）;流体力学法：样品压力进样８０ｓ缩法进样有很高的浓缩因子,检测限从流体力学法的１μｇ．ｍｌ＾－１降至１ｎｇ．ｍｌ＾－１,灵敏度提高了１０００倍。     

Capillary zone electrophoresis and artificial neural networks for estimation of the post-mortem interval (PMI) using electrolytes measurements in human vitreous humour

Determination of electrolyte concentrations (mainly potassium) in vitreous humour has long been considered an important tool in human death investigations for the estimation of the post-mortem interval (PMI). On the basis of its well known potential in ion analysis, capillary zone electrophoresis (CZE) has recently been applied to achieve a rapid and simultaneous determination of inorganic ions in this extracellular fluid. In the present work, artificial neural networks (ANN) were applied for modelling of the relationship of multicomponent CZE analysis of K⁺, NH₄ ⁺, Na⁺, and Ba²⁺ ions in vitreous humour with PMI. In a study based on 61 cases with different causes of death and a known PMI ranging from 3 to 144 h, the use of ANNs considering all inorganic ion data from the human vitreous humour, achieved a substantial improvement of post-mortem interval prediction. Good linear correlation was observed (r ² = 0.98) and in comparison to the traditional linear least squares (LLS) method applied only to K⁺ levels in the vitreous humour, the prediction of PMI with ANN was improved by a factor of 5 from ≈± 15 h to less than 3 h. Received: 23 January 2001 / Accepted: 29 May 2001