单纯疱疹病毒包膜糖蛋白gD的研究进展

HSV gD包膜糖蛋白是HSV的结构蛋白之一，具有重要的抗原表位，参与病毒穿膜过程，介导了病毒的细胞问扩散，在病毒感染和宿主免疫过程中起着重要作用，也是目前疫苗研究的热点。其分子和功能特性的研究对HSV作用机制，预防的研究有着重要意义。近年来，该领域的研究取得一定进展。现就HSVgD糖蛋白结构与功能及疫苗研制方面的研究进展作一综述。     

单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究及其应用

本文简要报道本室近年来在抗单纯疱疹病毒单克隆抗体研究方面的结果。①应用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了18株稳定分泌抗单纯疱疹病毒单克降抗体的杂交瘤细胞系。②探讨了不同株单克隆抗体介导体外中和作用和动物体内保护作用的机制。③建立了应用单克隆抗体检测病毒抗原的方法。④应用型特异性和型共同性单克隆抗体对临床病毒分离株进行了病毒分型和抗原性分析。⑤应用单克隆抗体纯化了病毒的结构蛋白并对其特性做了鉴定。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白B基因疫苗的构建

目的：构建用于治疗和预防单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗,探讨单纯疱疹病毒1型糖蛋白B(HSV-1gpB)基因作为基因疫苗的可能性。方法：利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1gpB去除N端部分信号肽序列(39 bp)的基因片断（2 673 bp）,定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA-gpB,并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。 结果：双酶切重组质粒pcDNA-gpB,电泳可见两条带,分别为目的基因（2 700 bp）和线性质粒pcDNA3（5 400 bp）; 以重组质粒pcDNA-gpB为模板进行PCR扩增,在2 700 bp位置扩增出特异的产物;测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与GenBank中登录的HSV-1 F株gpB基因序列比较,同源性达99.5%。 结论：利用PCR技术从HSV-1 SM44株基因组中扩增出编码HSV-1gpB去除N端部分信号肽序列（39 bp）的基因片断（2 673 bp）, 成功地构建了HSV-1基因疫苗pcDNA-gpB。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步研究

目的：构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白D重组质粒DNA疫苗,初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果,为HSV-1新型疫苗奠定基础。方法：用PCR的方法从HSV－1病毒基因组中扩增糖蛋白D（glycoprotein D,gD)基因,利用基因重组技术构建重组质粒;将重组质粒体外转染真核细胞COS－7,Western blotting检测表达产物;于BALB／C小鼠后腿胫前肌注射免疫,0、2周名免疫1次,100μg/次。初次免疫后0,2,4,6周眼眶采血,ELISA间接法检测抗体。结果：重组质粒酶切出相应大小片段,经测序证实为HSV－1gD序列。Western blotting证实能够在体外真核细胞中表达。免疫小鼠后,产生特异性抗体,抗体滴度1：2000。结论：HSV-1gD重组质粒DNA有可能作为HSV－1的DNA疫苗,用于防治HSV－1感染及其相关疾病。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型与肿瘤

近年来对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)引起肿瘤的研究越来越深入,许多临床调查,动物实验和体外细胞培养等均证明了HSV-2确实能引起肿瘤。 1 HSV-2的结构特点 HSV-2呈球状,病毒的囊膜为脂蛋白,衣壳是对称二十面立方体,由162个子粒所组成。HSV属双股DNA病毒,DNA呈线状,二端可以连接成环状结构,后者与病毒的致癌作用及潜伏感染有关。在病毒增殖过程中产生的胸苷激酶(TK)也与潜伏感染有关。HSV-2DNA的分子量为10~8dalton,G+C含量约69％,碱基分布不均一,它是以编码     

ELISA法检测单纯疱疹病毒Ⅱ型特异性抗体的临床应用研究

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染的早期特异检测手段。方法 对５２例性病门诊的生殖器疱疹患者改良的ＥＬＩＳＡ方法进行了ＨＳＶ－ｇＤ２ＩｇＧ检测并同细胞分离方法进行对比观察。结果 病毒分离的阳性率为６９．２％,ＥＬＩＳＡ法检测抗体的阳性率６５％,两种方法检测结果差异无显著性。结论：ＥＬＩＳＡ法检测血清疱疹病毒ＩｇＧ抗体具有简便,快速,特异的优点,适合于临床大规模检测之有     

单纯疱疹病毒I型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步研究

目的构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白Ｄ重组质粒ＤＮＡ疫苗，初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果，为研制ＨＳＶ－１新型疫苗奠定基础。方法用ＰＣＲ的方法从ＨＳＶ－１病毒基因组中扩增糖蛋白Ｄ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄ，ｇＤ）基因，利用基因重组技术构建重组质粒；将重组质粒体外转染真核细胞ＣＯＳ－７，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测表达产物；于ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后腿胫前肌注射免疫，０、２周各免疫１次，１００μｇ／次。初次免疫后０、２、４、６周眼眶采血，ＥＬＩＳＡ间接法检测抗体。结果重组质粒酶切出相应大小片段，经测序证实为ＨＳＶ－１ｇＤ序列。Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ证实能够在体外真核细胞中表达。免疫小鼠后，产生特异性抗体，抗体滴度１∶２０００。结论ＨＳＶ－１ｇＤ重组质粒ＤＮＡ有可能作为ＨＳＶ－１的ＤＮＡ疫苗，用于防治ＨＳＶ－１感染及其相关疾病。关键词单纯疱疹病毒角膜炎ＤＮＡ疫苗糖蛋白Ｄ     

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D酵母表达载体的构建

目的:构建含有单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础.方法:应用PCR方法从HSV-Ⅰ基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-gD;克隆载体与表达载体双酶切后,产物连接、转化大肠杆菌JM109,筛选、测序后确定构建了酵母表达载体pGAPZαA-gD.结果:重组质粒pMD18T-gD和pGAPZαA-gD经PCR和酶切均出现相应长度的片段,测序结果证实为gD基因,序列分析同源性为99.66%.结论:成功构建了含有单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D全基因的克隆载体及酵母表达质粒.     

单纯疱疹病毒I型糖蛋白D酵母表达载体的构建

目的:构建含有单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础。方法:应用PCR方法从HSV-I基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-gD;克隆载体与表达载体双酶切后,产物连接、转化大肠杆菌JM109,筛选、测序后确定构建了酵母表达载体pGAPZαA-gD。结果:重组质粒pMD18T-gD和pGAPZαA-gD经PCR和酶切均出现相应长度的片段,测序结果证实为gD基因,序列分析同源性为99.66%。结论:成功构建了含有单纯疱疹病毒I型糖蛋白D全基因的克隆载体及酵母表达质粒。     

单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的体内被动保护性研究

目的：了解单纯疱疹病毒（HSV）共有型单克隆抗体5B4-6的体内被动保护能力。方法：本研究分别采用体外中和实验和体内被动保护实验以检测单克隆抗体5B4-6的体外中和HSV的能力和体内被动保护BALB/C小鼠于足垫抗受HSV致死剂量攻击的保护能力。结果：1.单抗腹水5B4-6具有HSV-1及HSV-2交叉中和性,但对HSV-1的中和效应要强一些,其中和效价各为1：80（豚鼠新鲜血清（GPS）存在,HSV-1）、1：20（GPS缺乏,HSV-1）及1：20（GPS存在,HSV-2）、1：5（GPS缺乏,HSV-2）。单抗6B3-2-5仅具有抗HSV-1特异性的中和作用,其中和效价各为1：80（GPS存在）及1：20（GPS缺乏）,而对HSV-2在GPS存在时才具有极低滴度的中和作用（1：5）。从中可发现补体参与其中和过程,但不是完全依赖。2.体内被动保护实验表明,单抗5B4-6具有极明显的保护小鼠于足垫接受HSV-1及HSV-2致死剂量攻击的保护能力,其保护率各为100%及80%。结论：单克隆抗体5B4-6具有一定的体内被动保护能力。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型与白血病病毒协同诱发小鼠淋巴细胞白血病的初步观察

将紫外线灭活的疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2),小剂量的小鼠白血病病毒(MuLV)、HSV-2加MuLV分别接种三个实验组的成年小鼠,对照组小鼠不接种任何病毒。结果在四个组中仅HSV-2加MuLV组和MuLV组的动物发生了淋巴细胞白血病,其发病率分别为12.96％(7/54)和1.92％(1/52),二者之间差异有显著性(P<0.05);而且前者的白血病发病时间较后者要早。提示HSV-2与MuLV在诱发小鼠淋巴细胞白血病过程中具有协同作用,其中的HSV-2只是一种“促癌因素”。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型感染培养细胞CV-1后微丝形态变化的观察

应用光镜和电镜技术,对疱疹病毒Ⅰ型感染后的培养细胞CV-1中微丝结构与功能的变化进行动态观察,探讨病毒感染造成的微丝形态及分布变化。观察结果,或染细胞微丝分布不均、结构不清。     

单纯疱疹病毒性角膜炎与Ⅰ型变态反应的关系

对34例单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)患者血清 IgE 水平进行了测定,结果发现在急性朗增高(195.34±42.90Iu/ml),恢复期下降(111.31±20.80Iu/ml),结果提示 IgE 参与了 HSK 的免疫病理过程,与Ⅰ型变态反应有着密切关系。另外,对其它各类免疫球蛋白(Ig)产生的动力学也做了观察。     

双引物聚合酶链反应同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型

目的 建立双引物聚舍酶链反应（PCR）用于同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型。方法 基于单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的DNA聚合酶基因以及梅毒螺旋体47KD膜蛋白基因序列，自行设计2对特异性寡核苷酸引物，建立了同时检测上速2种痛原体的双引物PCR。结果 各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA，即单纯疱疹病毒Ⅱ型扩增产物为202bp以及梅毒螺旋体扩增产物为252bp。其他11种生殖道常见微生物及正常人基因组DNA不被扩增。检测了51例临床标本，梅毒螺旋体暗视野显微镜检查阳性检出率为15．7％，双引物PCR阳性检出率为19．6％；二种方法检测结果间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。HSV阳性培养率23．6％，双引物PCR阳性率47．1％，双引物PCR阳性检出率显著高于HSV培养且差异有统计学意义（P=0．019）；上速临床标本分别进行了2种痛原体的单引物PCR，与双引物PCR对照结果完全一致。结论 我们建立的双引物PCR一次可同时检测2种病原体，且有快速、敏感、特异以及简便的特点。     

细胞单层速成法病毒空斑试验在单纯疱疹病毒分型中的应用

作者应用细胞单层速成法病毒空斑试验的方法,改进了单纯疱疹病毒分型的鸡胚细胞空斑形成试验,并首次证明用原代鸡胚细胞进行细胞单层速成法病毒空斑试验的可行性。改进后的空斑形成试验不需预先制备细胞单层,把原代鸡胚细胞和单纯疱疹病毒同时加入培养孔内,使细胞在贴壁的同时被病毒吸附,然后在营养凝胶下细胞形成单层的同时病毒产生空斑,最后经中性红染色,单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的空斑直径分别为0.3～0.4mm和0.9～1.0mm。本试验分型结果容易判断,方法简单、快速而准确。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型定量紫外线照射后某些生物学特性的改变

<正> 近些年来,关于单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)与宫颈癌的病因学关系,已受到国内外的相当重视,并有许多关于 HSV-2引起体外培养细胞恶性转化和动物体内诱癌的报道。为了减少该病毒增殖性感染所致的细胞死亡,有利于感染细胞转化研究的进行,Duff 和 Rapp 以及 Rapp 和Turner 曾试用了各种方法来灭话     

SPECIFIC IDENTIFICATION OF HERPES SIMPLEX VIRUS IN HUMAN ESOPHAGUS WITH RAPID IN SITU HYBRIDIZATION IN 5 CASES

HUMAN herpes simplex virus esophagitis （HSVE） was first reported in 1940 by Johnson. ^1HSVE usually occurs in immunocompromised patients,such as those with acquired immunodeficiency syndrome （AIDS）, 2-4 malignancies, cutaneous burns, connective tissue diseases, inflammatory bowel disease, those taking immuno-suppressive therapy, and those undergoing organ transplantation,5 etc. In the immunocompetent individuals, HSVE is rare, having been reported in 39 cases and mainly affecting young males^6,7 The aim of this study was to delineate the clinical experience in the diagnosis of HSVE using rapid in situ hybridization and assess the various detection methods.     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV-1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

人乳头瘤病毒、疱疹病毒Ⅱ型及人巨细胞病毒与宫颈癌关系的研究

用人乳头瘤病毒(HPV)16,18,11型、疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)N/BglⅡ,L/HindⅢ片段和人巨细胞病毒(HCMV)DNA等6个核酸探针,通过分子杂交技术对宫颈疾患活检标本进行了检测和分析,结果在同一标本中未发现3种病毒DNA均阳性者,但宫颈癌标本中46%HPV和HCMV DNA同时存在,2例HSV-2 DNA阳性的宫颈癌标本中有1例同时存在HCMV DNA。提示宫颈癌的病毒病因是多因素的,HPV,HSV-2和HCMV均可能有关,在宫颈癌发生过程中3者之间可能有某些内在联系。