微波对白血病耐药细胞株K562/MDR的影响

目的 研究微波对白血病耐药细胞株K562／MDR耐药性的影响。方法 使用流式细胞仪测量K562／MDR细胞内罗丹明（Rh123)含量及多药耐药基因产物P－糖蛋白（P－gp)的表达，使用DPH标记的荧光分光光度计法测量K562／MDR细胞膜流动性。结果 微波处理后，K562／MDR细胞内罗丹明含量增加，P－gp糖蛋白表达下降，细胞膜流动性增加。结论 微波能对白血病耐药细胞株K562／MDR的耐药性起一定的逆转作用。     

多药耐药逆转剂抗白血病细胞多药耐药性的作用

白血病细胞对化疗药物产生多药耐药性是联合化疗失败的最重要原因之一.虽然大量研究表明白血病耐药的机制很多,包括细胞膜药物泵分子的诱导、细胞浆内药物代谢酶活性或代谢途径的改变、白血病细胞凋亡机制的改变等,但P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在白血病细胞膜上的表达仍是目前研究发现最主要的耐药机制.     

P-170糖蛋白在多药耐药(MDR)K562/ADM细胞中的定位研究

目的：确定P-170糖蛋白在多药耐药（MDR）K562/ADM细胞中表达的位置，方法：通过免疫反应并利用流式细胞仪（FCM）检测表达P-170糖蛋白细胞的百分含量；用免疫电镜技术检测P-170糖蛋白在细胞中的位置及其表达水平。结果：敏感株K562细胞与耐药株K562/ADM细胞对P-170糖蛋白的表达有非常明显的差异；不同的K562/ADM细胞表达P-170糖蛋白的量差别较大；少量的K562细胞也有极少的P-170糖蛋白的表达，细胞表达的P-170糖蛋白位于细胞膜上，结论：多药耐药K562/ADM细胞表达的P-170糖蛋白最终被镶嵌在细胞膜上；在该蛋白质从被表达，修饰和转运到细胞膜上的过程中，该蛋白质不具有成熟P-170糖蛋白的特异构象。     

异搏定对白血病K562细胞耐药性的逆转作用

目的 :研究异搏定对 P-糖蛋白 (Pgp)介导的人类白血病 K 5 6 2细胞多药耐药作用。方法 :用台盼蓝拒染法检测药物敏感性及异搏定对细胞耐药性的影响 ,用免疫组织化学法检测 Pgp的表达 ,用流式细胞仪检测细胞内柔红霉素 (DNR)积聚。结果 :DNR诱导的耐药细胞 K5 6 2 / D对 DNR、长春新碱 (VCR)、高三尖杉脂碱 (HHT)、鬼臼乙叉甙 (VP16 )、米托恩醌 (MIT)交叉耐药。 DNR诱导了 K5 6 2 / D细胞的 Pgp过度表达。异搏定使 K 5 6 2 / D细胞内药物积聚增加 ,明显地逆转了 K5 6 2 / D细胞对 DNR、VCR、MIT、HHT、VP- 16的耐药性 ,而对敏感细胞 K5 6 2 / S的耐药性无影响。结论 :DNR诱导了 K5 6 2 / D细胞的 Pgp过度表达 ,异搏定通过抑制 Pgp功能逆转了 Pgp介导的K5 6 2 / D细胞的多药耐药性     

RNA干扰逆转白血病细胞耐药性的研究

目的 用RNA干扰技术下调白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药基因mdr1的表达以逆转白血病对化学药物的耐药性.方法 针对mdr1基因已知mRNA序列不同位点,选择两条靶序列,构建靶向mdr1 shRNA真核表达载体,脂质体介导转染白血病耐药细胞株K562/A02.实时荧光定量RT-PCR检测mRNA表达,Western blot检测细胞膜P-gp表达,柔红霉素泵出试验检测P-gp外排泵功能,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果 构建了二条针对mdr1基因的shRNA真核表达载体,分别下调mdr1 mRNA的表达89.74%和87.18%,降低细胞膜P-gp表达,使膜外泵功能明显下降,柔红霉素在细胞内贮留明显增多,60min 时柔红泵出率为13.16%、22.02%,对照组为40.44%、45.31%,对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为84.36%和76.69%.结论 RNA干扰技术可有效逆转mdr1所致耐药.     

急性白血病细胞生存素、bcl—2和P-糖蛋白表达及临床意义

目的 :探讨生存素、P-糖蛋白及 bcl-2在急性白血病细胞中的表达及其与耐药的关系。方法 :应用间接免疫荧光染色检测急性白血病 43例 P-糖蛋白、bcl-2蛋白的表达 ,逆转录 -聚合酶链反应检测生存素的表达。结果 :急性白血病患者细胞中 P-糖蛋白、bcl-2及生存素的阳性率均高于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;3者的表达在急性髓细胞性白血病与急性淋巴细胞性白血病中无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;P-糖蛋白、bcl-2、生存素阳性的患者耐药率均明显高于阴性者 (P<0 .0 5 ) ;3因素中生存素与 bcl-2的表达呈轻度正相关 ;生存素和 P-糖蛋白及生存素和 bcl-2双阳性患者的耐药性明显高于双阴性的患者 ;生存素、P-糖蛋白和 bcl-2 3者都阳性患者的耐药性明显高于双阳性、单阳性或 3阴性的患者 (P<0 .0 5 )。结论 :急性白血病中存在着生存素、bcl-2和 P-糖蛋白的高表达 ,其中生存素与 bcl-2的表达有相关性 ,3指标中 2项或 2项以上阳性的患者耐药性明显增高。     

蝙蝠葛碱逆转K562/ADM细胞多耐药性的研究

目的：研究具有钙拮抗作用的中药蝙蝠葛碱对多耐药性的逆转作用。方法：选用异搏定作阳性对照，观察其对多药耐药细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用。结果：蝙蝠葛碱在非细胞毒性剂量下能使K562/ADM对阿霉素的浓度升高，但对细胞表面的糖蛋白P-170却没有影响。结论：蝙蝠葛碱具有逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的作用。     

逆转mdr1引起的多药耐药性的策略

多药耐药基因1（mdr1）编码的P-糖蛋白表达的增加是肿瘤细胞多药耐药性最常见的发生机制之一。近年来以mdr1/P-糖蛋白为靶点,在蛋白质水平和基因水平上采用多种策略逆转MDR,这些研究均有较大进展,本文就目前逆转多药耐药性的研究状况进行综述。     

P—170在复发难治性白血病中的表达及临床意义

急性白血病的复发与难治和白血病发生多药耐药（multidrugresistance，MDR）有关，发生MDR现象的主要机制是多药耐药基因（mdr；基因）的过度表达，mdr；基因的表达产物为定位于细胞膜上．分子量为170KDa的糖蛋白（Glycoproteins，P-170），为探讨P－170在复发难治性白血病中的表达及临床意义，用免疫组织化学ABC法检测了48例复发难治性白血病的P－170表达，其，阳性表达率为77．1％．结果表明：P－170在复发难治性白血病中有高度表达，本方法检测白血病MDR及对逆转白血病的MDR有一定的临床意义及指导意义．     

和厚朴酚对U937/ADR细胞系耐药逆转作用及其机制研究

目的 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞U937阿霉素(ADR)耐药细胞系U937/ADR多药耐药逆转作用及其机制.方法 以大剂量(IC50)ADR短时间诱导方法 ,构建U937/ADR细胞系.以低浓度HNK(IC20)与不同化疗药物联合作用于U937/ADR细胞系,检测其对不同化疗药物耐药逆转倍数.罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR(FQ-PCR)和Western blotting检测不同浓度HNK对U937/ADR细胞系核转录因子-κB(NF-κB)和耐药相关基因MDR1及其蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响;ELISA法检测NF-κB亚单位p65(NF-κB p65)的DNA结合活性.结果 成功构建了白血病多药耐药细胞系U937/ADR,对ADR耐药指数为亲代U937细胞的11倍.6.5 μg/mL HNK可以逆转U937/ADR对ADR的耐药,逆转倍数为2.20倍.HNK能够浓度依赖性地下调U937/ADR细胞NF-κB、MDR1 mRNA和P-gp表达,抑制NF-κB p65的活性.结论 HNK能有效逆转U937/ADR多药耐药,其机制可能与抑制NF-κB p65活性、下调MDR1和P-gp表达有关.     

Establishment of multidrug-resistance cell line C6/adr and reversal of drug-resistance

Objective To investigate the mechanism of multidrug resistance (MDR) in a human glioma cell and methods for overcoming multi-drug resistance.Methods MDR cell line C［6］/adr was established. The expression of the mdr-1 gene and its P-glycoprotein (P-gp) in the C［6］/adr cell line was observed by RT-PCR and flow cytometry. The reversal of MDR by verapamil, erythromycin, dihydropyridine, P-gp monoclonal antibody and Salvia miltiorrhiza (SM) was studied by microtiter tetrazolium (MTT) assay or by high performance liquid chromatographic assay.Results The mdr-1 gene of the C［6］/adr cell line was positive, over-expressing P-gp. The drug-resistance of the C［6］/adr cell lines could be partly reversed by 2-6μg/ml of verapamil, 50-100μg/ml of erythromycin, or 5μg/ml of dihydropyridine. As concentration increased, they had a better effect. Among these drugs, 100μg/ml of erythromycin had the best result of reversal. Dihydropyridine 1μg/ml, P-gp monoclonal antibody and SM had no effect.Conclusion The mdr-1 gene and its expression might be associated with the MDR of glioma cells. Verapamil, erythromycin and dihydropyridine could reverse the MDR of glioma cells.     

苦参碱逆转人结肠癌细胞株（HT-29）奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的：研究苦参碱对结肠癌耐药细胞HT-29/奥沙利铂(Oxaliplatin, OXA)耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株HT-29/OXA;CCK-8法测定苦参碱对HT-29/OXA细胞的耐药性逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化;实时定量PCR 检测各组细胞肺耐药蛋白（lung resis-tance protein LRP)和 P-glycoprotein (P-gp) mRNA表达水平; Western blot 检测各组细胞LRP和P-gp蛋白的表达水平。结果苦参碱使HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的敏感性增加,耐药性得到部分逆转。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对结肠癌耐药细胞株HT-29/OXA细胞周期以及细胞凋亡没有影响;联合用药对HT-29/OXA生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡（P<0.05）。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对HT-29/OX-ALRP和P-gp mRNA以及蛋白的表达没有影响;联合用药作用后LRP mRNA和P-gp mRNA表达水平降低（P<0.01）,同时下调了LRP和P-gp蛋白表达（P<0.01）。结论苦参碱部分逆转HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制可能与细胞内LRP和P-gp表达降低有关。     

RNA干扰抑制MDR1表达并逆转Bel7402/5-Fu肝癌细胞耐药性的研究

目的：研究小片段RNA干扰对肝癌耐药细胞系Bel7402／5-Fu中多药耐药基因（muhidrug resistance 1,MDR1）及其蛋白产物P-gP表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果。方法：合成针对MDR1启动子区域的RNA干扰小片段,转染肝癌耐药细胞Bel7402／5-Fu。通过RT-PCR和Westem blot方法,在mRNA和蛋白水平评价RNA干扰对MDR1表达的影响。MTT法检测RNA干扰逆转Bel7402／5-Fu细胞耐药性的效果,按实验组和对照组细胞的半数抑制剂量（IC50）计算RNA干扰对细胞耐药倍数的改变和RNA干扰组细胞的耐药逆转倍数。以流式细胞仪比较各组细胞在相同浓度化疗药物作用时细胞的凋亡情况。结果：在耐药肝癌细胞Be17402／5-Fu中,RNA干扰明显抑制了MDR1 mRNA和蛋白产物P-gP的表达水平,其表达仅为对照组细胞的22．55％和25．49％（P〈0．01）。在相同浓度化疗药物的作用下,RNA干扰组Bel7402／5-Fu细胞凋亡比例显著高于对照组（P〈0．01）,表明细胞耐药性显著下降,对5-Fu的耐药逆转倍数为14．88倍。结论：肝癌耐药细胞Bel7402／5-Fu中,RNA干扰对MDR1 mRNA及其蛋白产物P-gP的表达水平有显著抑制作用,具有良好的逆转耐药性的效果。     

葡萄球菌属对抗生素的耐药性分析

目的:了解葡萄球菌属临床分离株对常用抗生素的耐药性和对大环内酯类、林可霉素类及链阳霉素类(MLS)的耐药表型。方法:用K-B法测定葡萄球菌属对14种抗生素的敏感性,进行D试验,测定链阳霉素类耐药表型。结果:在258株葡萄球菌属中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)分别为62.8%和83.4%。对青霉素高度耐药,对磷霉素和利福平敏感率在74%以上,未发现万古霉素耐药株。195株葡萄球菌属对红霉素耐药,84.1%(69/82)株金黄色葡萄球菌为结构型耐药;在凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)中,56.6%(64/113)为结构型耐药,32.7%(37/113)为外排型耐药。对红霉素耐药但对克林霉素敏感的62株葡萄球菌中,18株为诱导型克林霉素耐药。结论:临床分离的葡萄球菌属对常用抗生素易产生多重耐药,应根据分离株耐药特点选用不同的方案。     

罗格列酮对耐药乳腺癌细胞影响的研究

目的：探讨罗格列酮( ROS)对耐他莫西芬( TAM)的乳腺癌细胞MCF-7/TAM体外生长的影响,及对其耐药性的逆转效果和作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝( MTT)比色分析法测定ROS作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率及逆转耐药的效果;采用流式细胞术检测ROS作用MCF-7/TAM细胞后的凋亡率;采用实时定量荧光 PCR 技术检测ROS作用MCF-7/TAM细胞后对FOXA1、ERα、ErbB-2和P53基因表达的影响。结果 ROS干预MCF-7/TAM细胞后,呈量-效和时-效关系抑制其增殖。半数抑制浓度(136μmol/L)的ROS对MCF-7/TAM细胞具有明显的逆转耐药效果,逆转耐药倍数为2.05倍。高浓度可诱导MCF-7/TAM细胞凋亡。半数抑制浓度(136μmol/L)的ROS作用MCF-7/TAM细胞后,能够上调FOXA1、ERα和P53基因表达水平(P<0.05),下调ErbB-2基因表达水平(P<0．05)。结论ROS可抑制MCF-7/TAM细胞增殖,高浓度ROS可诱导其凋亡,其机制可能与上调 P53基因表达有关。 ROS 可逆转MCF-7/TAM细胞的耐药性,逆转机制可能与上调FOXA1和ERα基因表达,下调ErbB-2基因表达有关。     

EGCG逆转人耐药肝癌细胞株多药耐药的体内实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体内逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制.方法:MTT法检测肝癌耐药细胞株BEL-7404/ADR与其亲本细胞BEL-7404耐药倍数,采用BEL-7404/ADR种植于裸鼠皮下,建立肿瘤耐药模型,两周后EGCG灌胃,腹腔注射阿霉素(ADM),联合治疗两周;荧光分光光度法检测瘤体内ADM含量,HE染色观察形态学改变;RT-PCR检测瘤组织mdr1 mRNA的表达,免疫组化法检测瘤组织P糖蛋白(P-gp)的表达.结果:低、中、高EGCG联合ADM组肿瘤生长速度明显低于ADM组,瘤重明显低于阿霉素组;EGCG联合ADM可增加瘤体内ADM的含量 (P<0.01);三个EGCG联合 ADM组与阿霉素组相比HE病理图片显示肿瘤组织纤维包裹,炎细胞浸润; mdr1 mRNA和P-gp的表达明显低于对照组和阿霉素组 (P<0.01).结论:EGCG在体内具有逆转BEL-7404/ADR的耐药作用,机制可能是EGCG下调了肝癌细胞mdr1基因的表达,使P-gp的表达降低,瘤组织内药量增高.     

儿科住院患者标本中分离葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性

目的了解儿科住院患者标本中分离出的葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,检测红霉素诱导克林霉素耐药的发生情况。方法使用纸片扩散法测定葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,使用D-试验方法检测红霉素诱导克林霉素耐药表型。结果585株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)406株,其中甲氧西林敏感的SA(MSSA)387株,甲氧西林耐药的SA(MRSA)19株;凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)179株,其中甲氧西林敏感的CNS(MSCNS)20株,甲氧西林耐药的CNS(MRCNS)159株。红霉素、克林霉素均敏感的葡萄球菌117株(20.0%),红霉素和克林霉素均耐药的葡萄球菌282株(48.2%);红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌186株(31.8%),其中D-试验阳性占82.3%(153/186)。MSSA,MRSA,MSCNS和MRCNS中表现为诱导克林霉素耐药分别为92.2%(94/102),50.0%(1/2),77.8%(7/9)和69.9%(51/73)。结论在儿科住院患者标本分离的对红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌中,对克林霉素诱导耐药率高,对该类菌株应采用D-试验检测,以指导临床合理使用抗生素。     

奥曲肽逆转肝癌细胞多药耐药机制的初步研究

目的：探讨生长抑素类似物奥曲肽(octreotide)逆转肝癌细胞多药耐药，增加肝癌细胞对化疗药物敏感性的机制。方法：应用MTT法分析肝癌细胞对化疗药物的敏感性；用RT—PCR、流式细胞术检测肝癌细胞多药耐药基因MDR1、MRP2 mRNA蛋白质的表达。结果：奥曲肽联合化疗药物可以显著降低各化疗药物的IC50。肝癌原代培养细胞有SSTR2、SSTR3、MDR1、MRP2的表达，奥曲肽可以显著降低肝癌细胞表面MDR1、MRP2的表达。结论：奥曲肽可以与肝癌细胞表面的SSTR结合，降低肝癌细胞表面MDR1、MRP2的表达，从而使细胞内细胞毒药物浓度增加，逆转肝癌细胞多药耐药。     

可诱导克林霉素耐药金黄色葡萄球菌医院感染分子流行病学调查

目的 了解我院金黄色葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性，测定红霉素对克林霉素诱导耐药率及诱导耐药基因。方法 双纸片法测定临床分离株红霉素对克林霉素的诱导耐药表型，聚合酶链反应检测诱导耐药基因。结果 94株金黄色葡萄球菌中有77株为红霉素耐药，其中结构型克林霉素耐药45株，诱导型耐药（D试验阳性）26株。51株MRSA中结构型耐药菌株占62．7％，D试验阳性菌株占19．6％。43株MSSA中结构型耐药菌株占30．2％，D试验阳性菌株占37．2％。克林霉素诱导型耐药主要由ermC基因决定。结论临床微生物实验室须加强可诱导克林霉素耐药的检测，以指导临床合理使用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素。