钙结合蛋白Calbindin-D28k在遗传性高钙尿结石大鼠肾组织中的表达及其作用

目的 研究钙结合蛋白Calbindin-D28k在遗传性高钙尿结石(GHS)大鼠肾脏中的表达,并探讨其在特发性高钙尿症发病中的作用.方法 分别取16只GHS大鼠与16只正常对照组(NC)大鼠新鲜肾脏组织,Western印迹检测Calbindin-D28k蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测其基因表达水平.结果 GHS大鼠Calbindin-D28k蛋白表达水平显著高于NC大鼠(4值分别为0.49±0.02和0.20±0.01,P＜0.05),GHS组Calbindin-D28k mRNA表达水平是NC组的1.21倍[2-(△△CT)值分别为1.21和1.0,P＞0.05].结论 Calbindin-D28k的表达上调可能是由GHS大鼠的维生素D受体高表达和高尿钙所引起,在尿钙重吸收中起重要作用,但不是导致特发性高钙尿症的关键分子.     

甲状旁腺素和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响?方法:使用正常?高钙低磷或低钙低磷饮食喂养2月龄野生型(WT)和PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)小鼠4周,测定血清钙?磷?PTH和1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]水平,并利用RT-PCR方法检测肾1α-羟化酶[1α(OH)ase]基因表达水平?结果:正常饮食PTH-/-小鼠表现为低钙血症?高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达上调,而血清1,25(OH)2D3水平则降低?与正常饮食相同基因型小鼠相比,高钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平降低,肾1α(OH)ase基因表达下调?高钙低磷饮食矫正了PTH-/-小鼠的低钙和高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达仍高于WT小鼠,而血清1,25(OH)2D3水平与WT小鼠无差异?与正常饮食相同基因型小鼠相比,低钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平明显升高,肾1α(OH)ase基因表达明显上调?低钙低磷饮食PTH-/-小鼠血清钙严重降低,血清磷仍然较高,肾1α(OH)ase基因表达和血清1,25(OH)2D3水平均较WT小鼠为低?结论:钙磷饮食能够通过PTH依赖性和PTH非依赖性的方式调节活性维生素D的合成?     

胆钙化醇在治疗3期和4期慢性肾脏疾病患者维生素D不足的临床研究

<正>维生素D是维持血清钙稳态和骨骼健康的重要元素,维生素D的主要循环形式是25-羟基维生素D,其需要通过肾脏的1α-羟化酶活化成具有代谢活性的1,25-二羟维生素D。甲状旁腺激素(PTH)在人体处于低钙水平时可增加肾1α-羟化酶的活性[1]。当慢性肾脏疾病(CKD)导致肾1α-羟化酶降低时,PTH代偿性升高,从而导致肾性骨营养不良,增加心血管疾病的风险[2]。研究显示,高达86%的CKD患者维生素D不     

雌、孕激素对去卵巢大鼠肝脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨雌、孕激素对去卵巢大鼠维生素D受体mRNA的影响。方法25只成年SD雌性大鼠,随机分为Sham组(假手术组)、OVX组(单纯去卵巢组)、OVX+E组(去卵巢+补充雌激素组)、OVX+P组(去卵巢+补充孕激素组)OVX+E+P组(去卵巢+补充雌、孕激素组),每组5只。喂养3个半月后处死,取肝脏检测1,25-二羟维生素D3受体mRNA。结果与去卵巢组比较:(1)雌激素对去卵巢大鼠肝脏1, 25-二羟维生素D3受体mRNA的表达有显著上调作用;(2)雌、孕激素联合用药组1, 25-二羟维生素D3受体mRNA的表达介于单用雌激素和孕激素之间;(3)孕激素对去卵巢大鼠肝脏1,25-二羟维生素D3受体mRNA的表达无显著上调。结论雌激素能促进去卵巢大鼠肝脏1, 25-二羟维生素D3受体的表达。     

雌、孕激素对去卵巢大鼠骨代谢及肾脏1,25-(OH)2D3受体mRNA表达的影响

目的:观察雌孕激素替代治疗对去卵巢大鼠骨组织计量学参数变化及大鼠肾脏1,25-(OH)2D3受体(VDR)mRNA 表达的影响,并探讨其可能的机制.方法:25只成年SD雌性大鼠,随机分为为5组,假手术组、单纯去势组以及去势 补充雌激素组、去势 补充孕激素组、去势 补充雌、孕激素组,每组5只.喂养3个半月后处死,取出肾脏,RT-PCR方法检测VDR mRNA的表达;取胫骨上段不脱钙骨制片,应用半自动图像数字化分析仪检测各组大鼠骨组织计量学参数.结果:与假手术组、雌激素及雌孕激素组相比,去卵巢大鼠松质骨骨量明显减少,伴有骨结构变差,骨形成和骨吸收的参数值增加(P<0.05);与去卵巢组相比,孕激素组大鼠无显著改变.去卵巢组大鼠肾脏VDR mRNA的相对表达量显著低于假手术组、雌激素组及雌孕激素组(P<0.05);而与孕激素组无显著差异.结论:雌激素能有效地抑制去卵巢大鼠的骨吸收和骨形成,降低骨转换,可能与促进去卵巢大鼠肾脏VDR mRNA的表达有关.     

密骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠体内25(OH)D3和1,25(OH)2D3含量及肾脏VDR mRNA表达的影响

目的 研究密骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠体内两个骨代谢指标25-羟基维生素D3[25(OH)D3]和1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]含量及肾脏VDR mRNA表达的影响.方法 72只8月龄健康雌性SD大鼠随机分为6组,即假手术组,模型组,对照药物活性维生素D3组以及密骨胶囊小、中、大剂量组,每组12只,治疗3个月后全部处死,用双能X线骨密度仪及生物力学技术评估模型的骨密度(BMD)及骨质量,采用ELISA法检测血清和肝、肾组织中25(OH)D3和1,25(OH)2D3含量,用FQ-PCR法检测肾脏组织中VDR mRNA的表达情况.结果 ①模型组大鼠股骨头及粗隆部的BMD及骨生物力学指标(最大载荷和最大压应变)均明显下降(P＜0.05或P＜0 01);②使用密骨胶囊大、中剂量组与模型组比较,血清和肝脏、肾脏组织中25(OH)D3和1,25(OH)2D3的含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01),与活性维生素D3组比较差异无统计学意义;③模型组大鼠肾脏VDR mRNA的表达低于密骨胶囊治疗组部分大鼠及假手术组(P＜0.05或P＜0.01).结论 密骨胶囊能促进体内VDR mRNA的表达,提高体内25(OH)D3和1,25(OH)2D3含量,从而激活骨代谢,增强骨质骨量.提示适当补充密骨胶囊可有效的防治绝经后骨质疏松.     

穴位激光照射对去势大鼠子宫雌激素受体mRNA表达的影响

目的 探讨雌激素水平降低对子宫雌激素受体基因表达的影响,以及穴位激光照射肾俞穴对去卵巢大鼠子宫雌激素受体基因表达的调整作用.方法 选用3月龄Sprague-Dawley雌性大鼠,将动物分为正常对照组(Nor),去卵巢组(OVX)和去卵巢穴位激光照射组(OVX+L)3组.采用半定量RT-PCR方法获得大鼠子宫雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA的逆转录表达产物cDNA,用琼脂糖凝胶电泳方法检测,计算机图像分析系统进行统计分析.结果 与正常对照组比较,去卵巢组大鼠子宫内ER αmRNA的RT-PCR表达产物减少(P<0.05),ER βmRNA的RT-PCR表达产物增加(P<0.05);与去卵巢组相比,去卵巢穴位激光照射组大鼠子宫内ER αmRNA的RT-PCR产物升高(P<0.05),ER βmRNA的RT-PCR产物增加(P<0.05).结论 大鼠去卵巢后,子宫ER α的表达水平显著下降,穴位激光照射对去势大鼠子宫ERmRNA的表达有一定的调节作用.可能与穴位激光照射对去势大鼠生殖内分泌系统的调节有关.     

雌、孕激素对去卵巢大鼠肝脏维生素D受体mRNA表达的影响

目的：探讨雌、孕激素对去卵巢大鼠维生素D受体mRNA的影响。方法：25只成年SD雌性大鼠，随机分为 Sham组（假手术组）、OVX组（单纯去卵巢组）、OVX＋E组（去卵巢＋补充 雌激素组）、OVX＋P组（去卵巢＋补充孕激素组）、OVX＋E＋P组（去卵巢＋补充雌、孕激素组），每组5只。喂养3个半月后处死，取肝脏检测1，2，5－二羟维生素D3受体mRNA结果:与去卵巢组比较 :(1)雌激素对去卵巢大鼠肝脏1,2,5-二羟维生素D3受体mRNA的表达有显著上调作用;(2)雌、孕激素联合用药组1，25－二羟维生素D3受体mRNA的表达介于单用雌激素和孕激素之间；（3）孕激素对去卵巢大鼠肝脏1，25－二羟维生素D3受体mRNA的表达无显著上调。结论：雌激素能促进去卵巢大鼠肝脏1，25－二羟维生素D3受体的表达。     

大豆异黄酮和钙对去卵巢大鼠骨密度及IGF—I表达的影响

目的探讨大豆异黄酮和钙对去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度及胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)表达的影响。方法将雌性SD大鼠28只,随机分为假手术组(sham)、去卵巢组(OVX)、去卵巢补钙组[Ca,50mg/(kg.d)]和去卵巢加大豆异黄酮组[Isof,100mg/(kg.d)],10周后测骨密度和尿液钙含量,用免疫组化法测骨骼组织IGF-Ⅰ表达,原位杂交法测骨骼组织IGF-ⅠmRNA的表达。结果去卵巢组大鼠尿钙显著增高,而骨密度降低,骨IGF-Ⅰ和IGF-ⅠmRNA表达显著低于sham组。大豆异黄酮组大鼠尿钙丢失减少,骨密度升高,IGF-Ⅰ和IGF-ⅠmRNA表达增加。单纯补钙组与去卵巢组比较,各指标恢复不明显。结论大豆异黄酮表现出类似雌激素的作用,能够调节IGF-Ⅰ等生长因子的表达,减少尿钙丢失,可用于预防骨质疏松。     

甲状旁腺素和活性维生素D在调节肾脏钙结合蛋白中的协同作用

目的:明确甲状旁腺素(PTH)和1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]在调节肾脏钙结合蛋白中的各自和协同作用.方法:采用免疫组织化学方法观察PTH基因敲除、1α羟化酶基因敲除及双基因敲除对钙结合蛋白D28K和D9K在小鼠肾脏不同部位表达的影响.结果:钙结合蛋白D28K和D9K均定位于肾脏皮质远曲小管及髓质集合管上皮细胞的胞浆内.两种钙结合蛋白在PTH基因敲除小鼠肾脏的表达均明显减少.它们的减少在1α羟化酶基因敲除小鼠更为明显,而以双基因敲除小鼠最为显著.结论:PTH和活性维生素D均能调节钙结合蛋白在肾脏的表达,而且两者具有协同作用.     

维生素D_3体外羟化反应的实验研究

本文利用肝脏羟化酶及肾脏羟化酶,对维生素D_3的体外25位羟化作用及1α位羟化作用进行了初步研究。结果表明:应用佝偻病鸡的肝线粒体及微粒体悬液,分别与维生素D_3、NADPH孵化系统在体外进行孵育,均可得到羟化产物—25-OH-D_3,线粒体维生素D_3-25羟化酶的活性为0.49Pmol 25-OH-D_3/2h·10mg pr,微粒体为0.28 pmol 25-OH-D_3/2h·10mg pr。二者转化率分别为11.9％与5.8％,线粒体25-羟化酶活性明显高于微粒体。应用佝偻病鸡的肾线粒体悬液,与25-OH-D_3、NADPH孵化系统在体外进行孵育,可以获得羟化产物-1a,25-(OH)_2-D_3,其转化率为37.5％。     

Decompensation of physiologic hypocalcemia in infants inducing vitamin D deficiency rickets

43 infants taking the same dosage of vitamin D and calcium were investigated. The results showed that vitamin D deficiency rickets (VDR) were still present in some infants when vitamin D was sufficient, because of deficiency of 1,25-dihydroxyvitamin D (1,25-(OH)2D3). Serum calcium, phosphorus, alkaline phosphatase, triiodothyronine (T3), thyroxine (T4), calcitonin (CT), immunoreactive parathyroid hormone (iPTH), and 25-hydroxyvitamin D (25 OHD3) concentrations were compared among infants with normal, VDR of the early and recovering stages. The decompensation of physiological hypocalcemia in infants is probably the real cause of VDR and the decompensation is correlated closely with the development of parathyroid gland. This new concept is raised both at home and abroad. More practical methods for the treatment and prevention of VDR are suggested.     

维生素D受体在C57BL/6小鼠十二指肠中的定位表达分析

目的 为探讨维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）在C57BL/6小鼠十二指肠中的定位与表达,研究维生素D系统与肠道发育过程的相关性。方法 利用实时定量PCR （quantitative PCR,qPCR）、苏木精伊红染色、免疫荧光染色、免疫印迹（Western blotting,WB）的检测技术,对C57BL/6小鼠十二指肠中VDR定位表达做定性与定量的分析。结果 VDR的mRNA在C57BL/6小鼠十二指肠组织中的表达在其出生的第21天达到峰值。此外,VDR主要分布在C57BL/6小鼠十二指肠上皮细胞和平滑肌细胞的胞质中。对组织样品的WB检测显示,C57BL/6小鼠十二指肠发育过程中,VDR没有发生明显的核转位。结论 从分子生物学角度分析了VDR在C57BL/6小鼠十二指肠不同生长发育阶段的表达规律,为了解和完善VDR在肠道中的作用奠定理论基础。     

尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响

 目的 研究卵巢摘除（ovariectomy,OVX）后大鼠血清25(OH)D、1,25双羟维生素D［1,25(OH)2D］水平和骨表型的变化及雌激素干预效果。方法 采用6月龄SD雌性大鼠双侧卵巢摘除术建立去势骨质疏松模型并随机分为去势模型组（OVX组）和去势后雌激素干预组（OVX-E组）,另设假手术对照组（SHAM组）,每组10只。术后5周OVX-E组开始灌服尼尔雌醇（1 mg/kg,2次/周）,其他组灌服饮用水作为对照,均给药13周。采用酶免法（EIA）检测血清25(OH)D和1,25(OH)2D水平,用体积骨密度（volume bone mineral density,vBMD）和骨小梁面积（BV/TV）等指标进行骨表型分析。结果 OVX组血清25(OH)D水平保持稳定,与SHAM组比较差异无统计学意义。去势后1,25(OH)2D水平显著升高,OVX组为63.1 pmol/L,较SHAM组的38.5 pmol/L增加了64%（P<0.001）。OVX大鼠骨密度降低,较SHAM组分别减少9.5%（股骨,P<0.001）和9.8%（腰椎,P<0.001）。同时出现骨小梁面积减少和尿吡啶酚增加（58.7%,P<0.05）等骨质疏松表型。口服雌激素后,血清1,25(OH)2D水平较OVX组明显下降60.8% （P<0.001）,甚至低于SHAM组（P<0.01）,同时延缓骨丢失和改善骨微结构。结论 去势影响大鼠维生素D（vitamin D,VD）代谢,致血清1,25(OH)2D水平明显升高,小剂量雌激素对VD代谢改变和骨丢失具有显著纠正作用。     

羟乙膦酸钠对实验性高钙尿症的防治作用及其机制

目的：观察骨吸收抑制剂羟乙膦酸钠对实验性高钙尿症的防治作用,并其可能机制。方法：建立大鼠实验性高钙尿症模型,观察羟乙膦酸钠治疗后２周和４周的尿钙,Ｃａ＾２＋／Ｃｒ,ＮＡＧ／Ｃｒ,以及肾和十二揸肠Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶（钙泵）的变化。结果：２周时尿钙,Ｃａ＾２＋／Ｃｒ,血ＡＬＰ量有所升高,但４周时尿钙,Ｃａ＾２Ｃｒ,ＮＡＧ／Ｃｒ及血ＡＬＰ均显著下降（Ｐ〈０．０１）,２４小时尿一量与尿ＮＡＧ／Ｃｒ值呈正     

雌激素及雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780对大鼠垂体泌乳素GH3细胞Calbindin-D9k表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对大鼠泌乳素腺瘤细胞株GH3细胞Calbindin-D9k（CaBP-9k）表达的影响,并探讨选择性雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780是否能够拮抗雌激素对CaBP-9k表达的诱导作用.方法 以GH3细胞作为垂体泌乳素腺瘤的体外模型,通过免疫荧光法观察CaBP-9k在GH3细胞的表达情况;E2分3个剂量：10-8、10-9、10-10 M对GH3细胞作用24h,分别以RT-PCR法及Western blot法检测CaBP-9k基因和蛋白的表达水平;E2以10-8 M的剂量对GH3细胞作用24 h,同时设ⅡCI 182780拮抗组（10-6M）,被用于研究ER介导的通路对CaBP-9k表达的影响;用免疫共沉淀法检测CaBP-9k与ERα的相互作用关系.结果 在GH3细胞中,CaBP-9k的表达水平随E2给药浓度的增高而增加.当同时给予ⅡCI 182780时,E2诱导CaBP-9k表达的作用被拮抗,其表达水平显著降低.进一步通过免疫共沉淀法证实,在GH3细胞中,CaBP-9k与ERα能够直接结合,E2能够上调2者的相互作用.结论 雌激素可能通过ERα途径诱导GH3细胞CaBP-9k的表达,且CaBP-9k与ERα能够直接结合相互作用.提示CaBP-9k可能参与GH3细胞ER途径相关的生物学效应.     

维生素D与免疫功能的研究

维生素D是维持人体生命所必需的营养素,体内的维生素D有内源性和外源性两种,最终被转化为有较强生物活性的1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3],经血液循环运送到各个靶器官发挥作用。最近研究表明,维生素D是一种新的神经内分泌-免疫调节激素,对细胞免疫具有重要的调节作用,包括维生素D受体(VDR)在免疫相关细胞内的表达,1,25-(OH)2D3对细胞因子生成的调控,VDR和各羟化酶缺损的转基因动物研究等。因此,除了对血钙、血磷代谢的调节预防和治疗佝偻病外,维生素D在免疫功能的调节方面也越来越受关注。     

Protective effect of calcitriol on podocytes in spontaneously hypertensive rat

Background

Hypertension is a major global public health issue. Uncontrolled hypertension leads to organ damage, especially renal damage. Calcitriol is used to treat osteoporosis, promote bone formation, and increase bone mass. Previous studies have demonstrated that 1,25(OH)2D3, in addition to its classic role, also has multiple immune regulation and renoprotective functions and inhibits the activity of the renin-angiotensin-aldosterone system (RASS). The aim of the current study was to investigate the renoprotective effects of calcitriol in a spontaneously hypertensive rat (SHR) model.