斑点杂交法检测SEN病毒感染

目的:探讨斑点杂交法检测SEN病毒(SENV)感染的应用价值.方法:应用地高辛标记、制备SENV部分基因探针并用斑点杂交技术检测SENV DNA,与聚合酶链反应(PCR)检测结果相比较. 结果: 在191份血清中,采用斑点杂交法检出6份阳性,检出率为3.1%. PCR方法检测出11份阳性,阳性率5.8%. 结论: 制备的地高辛探针具有SENV特异性,以地高辛标记的SENV探针可用于检测SENV感染.     

PCR和核酸探针法与ELISA法检测乙肝感染的比较

PCR(聚合酶链反应的简称)是近年来发展起来的分子微生物学技术。核酸探针技术是属于生物学技术领域的一个先进检测手段。1990年10月,作者对133份已用ELISA法检测乙肝二对半的血清标本用PCR和核酸探针技术进行了HBV—DNA检测以比较此二法检测乙肝感染的灵敏度,结果报告如下。     

斑点杂交法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的临床研究

目的 探讨斑点杂交技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的应用价值.方法 设计mecA基因特异性引物,用地高辛标记;制备mecA基因探针,运用斑点杂交方法、聚合酶链反应（PCR）法检测mecA基因.结果 100例临床分离的金黄色葡萄球菌中共检出mecA基因阳性32例,阳性率为32％; PCR方法检出阳性36例,阳性率为36％.结论 通过斑点杂交技术可以方便、特异地检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因.     

聚合酶链反应检测HBV DNA的方法探讨

建立聚合酶链反应（PCR）检测HBV DNA的方法（PCR-EB），用^32P HBV DNA斑点杂交和免疫印迹试验证实其特异性，并与国外试剂进行了比较。结果表明PCR-EB法特异性强、稳定性好，敏感性与国外报道类似，适合于临床常规检测。     

不同核酸提取法对HCMV-DNA准确定量的影响

目的 评价不同核酸提取法对人巨细胞病毒核酸(HCMV-DNA) 荧光定量PCR准确定量的影响.方法 含HCMV AD169株病毒颗粒的病毒培养物,以不同浓度分别与10份健康人HCMV-DNA阴性血浆标本混合;另取15份临床移植患者HCMVpp65抗原血症阳性血浆样本,上述2种标本分别用碱裂解吸附法、沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿抽提法提取病毒核酸模板,随后运用荧光定量聚合酶链反应对样本进行定量分析,并作评价.结果 15例临床检测阳性血浆标本中,酚-氯仿法提取效率为最高(P＜0.05),换算后其相对提取效率为100%,而沉淀煮沸裂解法为90%,碱裂解吸附法为65%;此外,沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿法的重复性均好于碱裂解吸附法,变异系数(CV)值分别为0.26、0.30和0.39.结论 经典、传统的酚-氯仿抽提法仍不失为实验室首选的核酸提取方法.     

不同核酸提取法对HCMV-DNA准确定量的影响

目的评价不同核酸提取法对人巨细胞病毒核酸(HCMV-DNA)荧光定量PCR准确定量的影响。方法含HCMVAD169株病毒颗粒的病毒培养物,以不同浓度分别与10份健康人HCMV-DNA阴性血浆标本混合;另取15份临床移植患者HC-MVpp65抗原血症阳性血浆样本,上述2种标本分别用碱裂解吸附法、沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿抽提法提取病毒核酸模板,随后运用荧光定量聚合酶链反应对样本进行定量分析,并作评价。结果15例临床检测阳性血浆标本中,酚-氯仿法提取效率为最高(P<0.05),换算后其相对提取效率为100%,而沉淀煮沸裂解法为90%,碱裂解吸附法为65%;此外,沉淀煮沸裂解法和酚-氯仿法的重复性均好于碱裂解吸附法,变异系数(CV)值分别为0.26、0.30和0.39。结论经典、传统的酚-氯仿抽提法仍不失为实验室首选的核酸提取方法。     

铜绿假单胞菌oprI基因的反向斑点杂交检测法

目的 建立一种早期快速检测铜绿假单胞菌的方法。方法 根据铜绿假单胞菌特异的oprI基因设计引物，聚合酶链反应合成特异探针，光敏生物素标记细菌DNA，应用反向斑点杂交法检测铜绿假单胞菌。结果 所合成的探针具有高度特异性，能鉴别铜绿假单胞菌，与其他细菌、病毒、真菌间无交叉反应。该方法能检测出100ng细菌DNA。结论 反向斑点杂交法具有快速、特异的优点，对铜绿假单胞菌的早期检测具有重要意义。     

以硅类作为吸附材料的两种不同核酸提取方法在HCV-RNA定量检测中的应用比较

目的 比较及评价以硅类作为吸附材料的两种不同核酸的提取方法在丙型病毒性肝炎定量检测中的效果.方法 选取124份抗-HCV阳性血清,分别采用核酸纯化柱提取法和二氧化硅吸附法提取HCV-RNA,用实时荧光定量PCR对其提取效果进行比较分析.结果 ①124份抗-HCV阳性血清中以柱提法提取核酸后进行HCV-RNA定量检测的阳...     

应用二氧化硅微粒快速灵敏提取HCV-RNA

目的：探索一种快速、经济、灵敏的HCV-RNA提取方法。方法：在裂解缓冲液中加入二氧化硅微粒提取血清中的HCV-RNA，并按传统的酚一氯仿提取法从血清中提取HCV-RNA作为对照，然后结合逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测二氧化硅微粒提取法有25例RT-PCR检测结果（ ）。结论：应用二氧化硅微粒撮HCV-RNA，其灵敏度不低于传统的酚一氯仿提取法，而且操作简单，避免了传统提取法的繁杂操作步骤，是一种快速、经济、灵敏的HCV-RNA提取方法。     

逆转录——巢式聚合酶链反应检测戊型肝炎病毒核酸方法的建立

逆转录—巢式聚合酶链反应检测戊型肝炎病毒核酸方法的建立＊鲁学恒１李颖王占英乔光彦刘庆成（第二临床学院传染科，沈阳１１０００３）关键词戊型肝炎；戊型肝炎病毒；逆转录—巢式聚合酶链反应近来，聚合酶链反应方法已应用于ＨＥＶ的研究，但作为临床ＨＥＶ的诊断方法...     

分子生物学技术检测儿童病毒性脑炎病原体的研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测儿童病毒性脑炎脑脊液（CSF）中的病原体的价值。方法应用定性聚合酶链反应（PCR）作筛选，检测最常见的引起病毒性脑炎的6种病毒，对单纯疱疹病毒（HSV），柯萨奇病毒（CV），埃可病毒（EV）阳性者作荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测，其中单纯疱疹病毒脑炎（HSVE）分别在3个时点（治疗前、治疗中、出院时）检测DNA拷贝数。结果定性聚合酶链反应阳性标本FQ-PC检测100％阳性，HSV—DNA量在3时点有差异，病毒核酸拷贝数与临床表现一致。结论FQ—PCR可作为儿童病毒性脑炎早期诊断的有效方法之一，动态观察HSV—DNA含量有助于指导治疗，估计疾病的发展和预后     

反向斑点杂交法快速检测嗜肺军团菌

目的　探讨早期、快速检测嗜肺军团菌的方法。方法　根据嗜肺军团菌特异的巨噬细胞感染增强子mip基因设计引物 ,通过聚合酶链反应合成一段特异的 2 6 0bp长链DNA探针 ,采用反向斑点杂交法检测生物素标记细菌DNA ,并应用于痰标本的检测。结果　所合成的 2 6 0bpDNA探针具有高度特异性 ,只和嗜肺军团菌杂交 ,与其他细菌、真菌、病毒无交叉反应 ,该探针最低可检测出 1ng的细菌DNA。杂交法和培养法分别检测 10 0份痰标本 ,两者的阳性率分别为 8%和 2 %。结论　该方法快速、特异 ,对嗜肺军团菌的早期诊断具有较高的应用价值。     

聚合酶链反应法检测肝硬变腹水中结核杆菌

聚合酶链反应法检测肝硬变腹水中结核杆菌杨沛赵久法肝硬变患者免疫功能低下，为了解这组患者腹水中结核杆菌感染状况，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法对５３份肝硬变腹水进行检测。现将结果作一报道。１资料与方法１．１标本来源１９９４年６月～１９９６年３月，蚌埠医学...     

921消毒剂对乙肝病毒DNA消毒效果的评价

乙型肝炎病毒为 DNA病毒 ,患者在感染 HBV的不同时期 ,血清内可以出现不同的 HBV感染标志 [1] ,其中包括检测 HBV DNA,其为 HBV复制和传染的直接标志。利用斑点杂交可检测 pg水平的HBV DNA,应用聚合酶链反应 ( PCR)可检测 fg水平的 HBV DNA,较斑点杂交法敏感 1 0 0 0倍。作者利用 PCR技术检测 HBV DNA,结合 ELISA法检测 HBs Ag、HBe Ag评价 92 1消毒剂的消毒效果。材料与方法一、仪器　 FTS- 960型扩增仪 (澳大利亚 )、ZF- B紫外线透射分析仪 (上海 )、TDL - 1 6B型高速台式离心机 (上海 )、Denley Dragon Wells…     

细菌培养法与聚合酶链反应检测方法对淋病奈瑟菌的检测效果对比

目的：探析淋病奈瑟菌采用聚合酶链反应检测与细菌培养法的临床效果对比。方法：选取124例疑似淋病的患者,按照检测方式的不同分为观察组和对照组,每组62例。观察组患者实施聚合酶链反应检测,对照组患者实施细菌培养法检测,观察2组患者的阳性检测结果并进行对比分析。结果：2种检测方法细菌培养法与聚合酶链反应相比较,观察组聚合酶链反应的阳性检出率19.4%,显著高于对照组细菌培养法的6.5%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：淋病奈瑟菌采用聚合酶链反应检测,降低了临床漏诊率,具有灵敏度高、特异性强的优点,效果显著,是临床检测淋病奈瑟菌的好方法,值得推广。     

随机引物聚合酶链反应指纹法对变形链球菌标准株进行 …

「目的」探索一种利用随机引物聚合酶链反应指纹法技术进行变形链球菌基因分型的方法。「方法」利用变形边球菌不同血清型标准株和通用引物５’－４ＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧ－３’，研究了在不同条件下进行聚合酶链反应的结果，寻找满意的聚合酶链反应条件。「结果」找到了较为满意的聚合酶链反应条件：９４℃３０ｓ３６℃３０ｓ，７２℃１ｍｉｎ，反应进行４５个循环。「结论」随机引物聚合酶链反应指纹法技术在一定的控制条件下可用于     

用聚合酶链反应技术制备地高辛素标记的人巨细胞病毒探针

用聚合酶链反应技术制备地高辛素标记的人巨细胞病毒探针史金阳，刘兰青，吕绳敏，任舒月，刘庆（第二临床学院病毒室）关键词聚合酶链反应，核酸杂交，人巨细胞病毒核酸杂交￣［１］及聚合酶链反应￣［２］（ＰＣＲ）技术是近代分子生物学诊断技术发展的结果。而ＰＣＲ技...     

用RT-PCR方法检测登革病毒E基因核酸

目的：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术建立检测登革2型病毒E基因的方法。方法：分别抽提登革2型病毒NGC株和从登革出血热病人血清中分离得到的2型登革热病毒(DV)核酸(RNA)，合成CD-NA第一链，经过RT-PCR得到cDNA产物，用HinfI限制性内切酶酶切鉴定。结果：通过RT-PCR检测登革2型病毒核酸。结论：登革2型病毒E基因核酸的RT-PCR检测方法的建立为快速诊断登革病毒感染提供了可靠的方法。     

微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒

目的 寻找一种快速、准确、简便的丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）RNA逆转录-聚合酶链反应产物的检测方法。方法 所有标本均作逆转录-套式聚合酶链反应，其产物分别以微孔板固相杂交法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，对结果可凝及阴性者均以HCV Amplification KIT对其血清再作扩增并检测，并以此为金标准进行比较。结果 144份血清（其中抗-HCV阳性64例），微孔板固相杂交法阳性70例，灵敏度97.18%，特异度98.63%，聚丙烯酰胺凝胶电泳法阳性61例，灵敏度81.69%，特异度95.89%，取同一份产物倍比长稀释后再作检测，前者可检测出2^-9稀释度，后者检测出2^-7稀释度。结论 微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒快速、准确、简便，并且可定量，尤其适用于大批量标本的检测，但于基层推广。     

反向斑点杂交技术的临床应用

核酸杂交技术根据检测目的和检测手段的不同，可分为液相杂交、固相杂交及细胞内定位（原位）杂交。固相杂交又司分为斑点杂交、凝胶电泳印迹转移杂交。而反向斑点杂交（reverrsedotblot，RDB）是Saiki等提出的一种斑点杂交技术，该技术较正向斑点杂交和凝胶电泳印迹转移杂交具有快速、简便、高敏感性、特意性强的特点，尤其是基因分型、基因突变检测，病原体的检测等方面有其独特的优势。