西维来司钠抑制裸鼠肺癌H460细胞胸腔种植瘤生长和转移的机制

目的:建立裸鼠肺癌胸腔移植模型,观察西维来司钠(Sivelestat Sodium或ONO-5046.Na)对裸鼠肺癌生长和转移的抑制作用.方法:将H460大细胞肺癌接种于裸鼠左侧胸腔,并随机分成实验组和对照组.分别给予ONO-5046.Na和等体积PBS皮下注射,共28d.测量瘤重、肺癌转移率,测定动物血液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达情况.结果:裸鼠肺癌胸腔内接种成瘤率100%,并出现远处转移.对照组瘤重均高于实验组(P<0.05);对照组裸鼠死亡时间均较实验组早;实验组动物血液中MMP-2的表达明显低于对照组,肺外转移小鼠MMP-2的表达高于没有肺外转移小鼠.结论:ONO-5046.Na可抑制肺肿瘤生长和转移,其作用机制之一与抑制MMP-2的表达活性有关.裸鼠肺癌胸腔移植模型更容易形成肺癌转移模型,为研究ONO-5046.Na抑制肺癌生长和转移提供可靠的研究工具.     

西维来司钠抑制裸鼠肺癌H460细胞胸腔种植瘤生长和转移的机制

目的：建立裸鼠肺癌胸腔移植模型,观察西维来司钠（Sivelestat Sodium或ONO-5046.Na）对裸鼠肺癌生长和转移的抑制作用。方法：将H460大细胞肺癌接种于裸鼠左侧胸腔,并随机分成实验组和对照组。分别给予ONO-5046.Na和等体积PBS皮下注射,共28d。测量瘤重、肺癌转移率,测定动物血液中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的表达情况。结果：裸鼠肺癌胸腔内接种成瘤率100%,并出现远处转移。对照组瘤重均高于实验组（P〈0.05）;对照组裸鼠死亡时间均较实验组早;实验组动物血液中MMP-2的表达明显低于对照组,肺外转移小鼠MMP-2的表达高于没有肺外转移小鼠。结论：ONO-5046.Na可抑制肺肿瘤生长和转移,其作用机制之一与抑制MMP-2的表达活性有关。裸鼠肺癌胸腔移植模型更容易形成肺癌转移模型,为研究ONO-5046.Na抑制肺癌生长和转移提供可靠的研究工具。     

内皮抑素抑制裸鼠肺癌生长转移的实验研究

背景与目的:内皮抑素(endostatin,ES)可以有效抑制血管发生.系统给予ES可引起多种肿瘤异种移植模型生长减缓.本实验通过建立裸鼠肺癌胸腔移植模型,观察ES对裸鼠肺癌生长和转移的抑制作用.方法:将大细胞肺癌H460细胞接种于裸鼠左侧胸腔,并随机分成内皮抑素组(ES组)和对照组.ES组和对照组裸鼠自接种肿瘤的当天开始,每天分别给予ES 20mg/kg和等体积PBS皮下注射,共20 d.每日称量动物体重,记录动物生存时间,处死后称瘤重,测定动物血液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP2)的表达.结果:裸鼠肺癌胸腔内接种成瘤率为100%,并出现远处转移.对照组移植瘤重量(1.54±0.14)g明显高于ES组(0.9±0.3)g,差异有显著性(t=-3.163,P=0.005),且第1天和第21天体重差值(1.9±2.8)g与ES组(-0.8±2.8)g比较,差异有显著性(t=-2.156,P=0.045).而ES组的MMP2表达明显低于对照组.结论:ES可抑制肺肿瘤生长和转移,其作用机制之一与抑制MMP2的表达活性有关.裸鼠肺癌胸腔移植模型更容易形成肺癌转移模型,是研究肺癌生长和转移的理想模型.     

肺癌细胞与成纤维细胞、炎症细胞相互作用对MMP-1,-2,-9表达的影响

目的:研究单个核细胞、胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用.方法:活性胶原立体培养分为空白对照组(CG)、H460细胞组(HG) 、单个核细胞组(MG) 、胚肺成纤维细胞组(FG)、H460与单个核细胞混合组(HMG)、H460与胚肺成纤维细胞混合组(HFG)、三种细胞联合培养组(HMFG)共7组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定MMP-2和MMP-9表达,Western blotting 法测定MMP-1.结果:各组细胞在立体胶原内生长良好;CG与MG未明显分泌MMP-1、MMP-2 和MMP-9,其余各组均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMFG分泌的基质金属蛋白酶明显多于其他各组. 结论: 单个核细胞、成纤维细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌;基质金属蛋白酶可降解细胞外基质(extraclluar matrix,ECM)和其它间质组织,进而促进肺癌的侵袭和转移.     

肺癌细胞与成纤维细胞、炎症细胞相互作用对MMP-1,-2,-9表达的影响

目的：研究单个核细胞、胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用。方法：活性胶原立体培养分为空白对照组（CG）、H460细胞组（HG）、单个核细胞组（MG）、胚肺成纤维细胞组（FG）、H460与单个核细胞混合组（HMG）、H460与胚肺成纤维细胞混合组（HFG）、三种细胞联合培养组（HMFG）共7组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定MMP-2和MMP-9表达,Western blotting法测定MMP-1。结果：各组细胞在立体胶原内生长良好;CG与MG未明显分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,其余各组均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMFG分泌的基质金属蛋白酶明显多于其他各组。结论：单个核细胞、成纤维细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌;基质金属蛋白酶可降解细胞外基质（extraclluar matrix,ECM）和其它间质组织,进而促进肺癌的侵袭和转移。     

单个核细胞与H460细胞相互作用对MMP-1,MMP-3表达的影响

目的:研究单个核细胞与肺癌H460细胞在混合培养条件下,相互作用对基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法:H460细胞、志愿者血分离出的单个核细胞分别培养于无血清的DMEM中;同时,单个核细胞和H460细胞以1:5的比例混合培养,48小时后,用细胞裂解液(lysis buffer)裂解细胞,然后收集细胞裂解液采用Western blot法检测MMP-1、MMP-3的表达.结果:在混合培养条件下,单个核细胞与肺癌H460细胞相互作用,能明显促进胞浆内MMP-1、3的表达水平.结论:单个核细胞与肺癌H460细胞相互作用能通过上调MMP-1、3的表达,促进肺癌侵袭和转移.     

慢病毒载体介导的Annexin-A10对HepG2皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察重组慢病毒对人肝癌裸鼠皮下移植瘤体生长情况的影响及其对移植瘤细胞中膜联蛋白A10（Annexin-A10,ANXA10）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法:制备HepG2细胞悬液注入裸鼠右侧腋下。待瘤体直径长至1~2cm时,取出瘤体,分别接种至24只雌性裸鼠右侧腋窝皮下。每3天测量瘤体大小,计算瘤体体积。待瘤体直径长至0.3~0.5cm时,将裸鼠随机分为3组,分别为实验组、阴性对照组及空白对照组。3周后处死裸鼠,并取出裸鼠皮下瘤体。采用免疫组化法检测ANXA10、MMP-9的表达。结果:实验组裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑制,体积和重量均明显小于阴性对照组和空白对照组（体积:F=19.13,P<0.01;重量:F=46.91,P<0.01）。免疫组化结果显示:实验组裸鼠瘤体较阴性对照组及空白对照组的ANXA10蛋白表达明显升高;同时,MMP-9蛋白表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:重组慢病毒抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤体的生长,ANXA10基因过表达的慢病毒抑制MMP-9蛋白的表达。     

非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞MT1-MMP表达的影响

目的:探讨非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞增殖及其膜型基质金属蛋白酶-1(mem-brane type 1-matrix metalloproteinase,MT1-MMP)表达的影响。方法:应用MTT法检测细胞生长抑制率,免疫荧光法检测MT1-MMP蛋白质表达,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测细胞培养液中活性基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)的浓度。结果:NS398可抑制H460细胞的增殖及MT1-MMP蛋白质的表达,减少H460细胞培养液中活性型MMP-2的含量,并呈剂量依赖关系。结论:NS398可能通过抑制肺癌细胞MT1-MMP表达及MMP-2的激活而抑制肺癌细胞的侵袭转移。     

三维立体培养中H460细胞MMP-2、MMP-9的表达

目的:建立肺癌细胞的三维立体培养模型,测定肺癌细胞在三维立体培养中的基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,研究MMPs在肺癌侵袭与转移中的作用.方法:采用非小细胞肺癌H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,观察癌细胞的生长,同时设置平面培养对照组,用明胶酶谱法测定两组不同时间点MMP-2、MMP-9.结果:H460细胞在立体胶原内生长良好,分泌有MMP-2、MMP-9,且分泌量多于平面培养组.结论:三维立体培养肺癌细胞能清晰地表达MMPs,是研究MMPs在癌细胞的侵袭与转移作用机制的一种可行方法.     

在细胞三维立体培养模型中观察VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响

目的:建立H460细胞三维立体培养模型,探讨VEGF对H460细胞、MMP-2表达的影响.方法:采用非小细胞肺癌(NCLC)H460 细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,随机分成3组,给与不同浓度的VEGF,明胶酶谱法测定3组MMP-2的表达情况.结果:各组H460细胞生长良好;各实验组的H460细胞在不同浓度的VEGF和不同时间的作用下,细胞内的MMP-2的表达有差异.结论:VEGF能上调H460细胞MMP-2表达,且促进作用具有剂量-时间依赖性;三维立体培养模型有利于观察和研究基质金属蛋白酶在肿瘤侵袭和转移的作用.     

IL-1β对人肺成纤维细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的:建立人肺成纤维(HFL)细胞三维立体培养模型,探讨IL-1β对HFL细胞MMP-2表达及细胞增殖的影响。方法:采用HFL细胞建立三维立体培养模型,随即分成对照组与实验组,对照组用不含IL-1β的DMEM培养,实验组分别加入含不同浓度的IL-1β(10,20 ng/m l)的DMEM培养液,用倒置显微镜观察细胞的形态,培养24、72h后收集培养上清液,应用明胶酶谱法测各组MMP-2的表达情况;利用MMT比色实验观察IL-1β对HFL细胞增殖的影响。结果:观察三维胶原立体培养中细胞生长情况,HFL细胞均悬浮生长于胶原中,细胞在胶原内几乎不分裂,呈单细胞生长。各实验组的HFL细胞在不同浓度的IL-1β作用下,细胞表达的MMP-2有差异(P<0.05),且随着IL-1β浓度的增大,表达MMP-2的量增加。IL-1β可促进HFL细胞的增殖(P<0.05),且具有浓度及时间依赖性,随着IL-1β的浓度升高,其对HFL细胞促增殖的作用越明显。结论:IL-1β可能参与调节肺成纤维细胞合成和分泌MMP-2及细胞的增殖,从而促进肺癌的侵袭和转移。     

TNF-α对三维立体培养的肺癌H460细胞MMP-2和MMP-9表达的影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α对三维立体培养中的肺癌H460细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响。方法:在天然活性Ⅰ型胶原中建立肺癌H460细胞三维立体培养模型,分为干预组和空白对照组,干预组加入肿瘤坏死因子-α,明胶酶谱法测定各组培养基中MMP-2、MMP-9的表达,采用Bergman法测定其中的羟脯氨酸含量,计算胶原降解量。结果:在肺癌H460细胞三维立体培养模型中,肿瘤坏死因子-α干预组MMP-2、MMP-9的表达高于空白对照组,胶原降解量高于空白对照组(P<0.05)。结论:肿瘤坏死因子-α能上调MMP-2、MMP-9的表达,从而促进肺癌的侵袭与转移。     

肿瘤和间质细胞相互作用对肺癌MMP-2和MMP-9表达的影响

 目的 研究三维立体培养中肺癌H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞相互作用对MMP-2、MMP-9 表达的影响。 方法 活性胶原三维立体培养分为：H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养组;H460细胞和单核细胞共同培养组;胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养组;H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养组4组。明胶酶谱法测定各组培养基中MMP-2、MMP-9活性。 结果 H460细胞和胚肺成纤维细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养时MMP-2酶原和活化酶活性和表达均增强,H460细胞和单核细胞共同培养时MMP-2酶原和MMP-9活性和表达增强,H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞共同培养MMP-2活化酶和MMP-9活性和表达明显增强。 结论 肺癌H460细胞、胚肺成纤维细胞和单核细胞相互作用能通过上调MMP-2、MMP-9的表达促进肺癌的侵袭和转移。     

肝激酶B1增强肺癌H460细胞放射敏感性的体内研究

目的 研究肝激酶B1(LKB1)对肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性的影响。方法 构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予空载质粒(pEGFP-Ctrl)、照射+空载质粒(IR+pEGFP-Ctrl)、过表达LKB1质粒(pEGFP-LKB1)、照射+过表达LKB1质粒(IR+pEGFP-LKB1)处理;观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率及放射增敏比;并采用免疫组织化学和蛋白印记技术检测各组瘤组织中LKB1表达情况,分析LKB1与放射敏感性的关系。结果 相较于pEGFP-Ctrl组,IR+pEGFP-Ctrl组、pEGFP-LKB1组和IR+pEGFP-LKB1组的肿瘤生长都受到不同程度的抑制,抑瘤率分别为31.30%、14.78%和43.48%,其中IR+pEGFP-LKB1组较其他组最为明显。IR+pEGFP-LKB1组LKB1的放射增敏系数为1.18。转染pEGFP-LKB1组的LKB1在免疫组织化学和蛋白印记水平上表达增高,其余组未见LKB1表达。结论 成功构建肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤模型,LKB1具有增强肺癌H460细胞裸鼠皮下移植瘤放射敏感性作用。     

IL-1β对人肺成纤维细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的：建立人肺成纤维（HFL）细胞三维立体培养模型,探讨IL-1β对HFL细胞MMP-2表达及细胞增殖的影响。方法：采用HFL细胞建立三维立体培养模型,随即分成对照组与实验组,对照组用不含IL-1β的DMEM培养,实验组分别加入含不同浓度的IL-1β（10,20 ng/m l）的DMEM培养液,用倒置显微镜观察细胞的形态,培养24、72h后收集培养上清液,应用明胶酶谱法测各组MMP-2的表达情况;利用MMT比色实验观察IL-1β对HFL细胞增殖的影响。结果：观察三维胶原立体培养中细胞生长情况,HFL细胞均悬浮生长于胶原中,细胞在胶原内几乎不分裂,呈单细胞生长。各实验组的HFL细胞在不同浓度的IL-1β作用下,细胞表达的MMP-2有差异（P〈0.05）,且随着IL-1β浓度的增大,表达MMP-2的量增加。IL-1β可促进HFL细胞的增殖（P〈0.05）,且具有浓度及时间依赖性,随着IL-1β的浓度升高,其对HFL细胞促增殖的作用越明显。结论：IL-1β可能参与调节肺成纤维细胞合成和分泌MMP-2及细胞的增殖,从而促进肺癌的侵袭和转移。