5-氨基酮戊酸光动力学疗法抗单纯疱疹病毒的实验研究

目的研究5-氨基酮戊酸光动力学疗法(ALA-PDT)在体内外抗单纯疱疹病毒(HSV)的作用。方法以HSV-Ⅰ感染豚鼠皮肤的动物模型以及HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ感染的Vero细胞为实验系统,观察ALA-PDT抗单纯疱疹病毒的疗效。结果ALA-PDT在体外具有抑制HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ的作用,与阳性药物无环鸟苷作用基本一致。体内实验中,外用ALA对HSV-Ⅰ型豚鼠皮肤感染仅进行一次PDT治疗,对皮肤病变就产生了剂量依赖性的治疗效果,中、高剂量组疗效显著。结论ALA-PDT能够有效地灭活单纯疱疹病毒,治疗该病毒引发的皮肤病变。为该疗法用于病毒性疾病的治疗提供了依据。     

单纯疱疹病毒DNA疫苗的免疫原性和保护效力

单纯疱疹病毒(HSV)感染可分为原发性感染和复发性感染，在临床上表现为多种症候群，如生殖器感染、口面感染、皮肤感染、中枢神经系统感染和新生儿感染等。HSV-1主要引起非生殖器感染，而HSV-2则引起生殖器感染。由HSV-2感染造成的公共卫生问题促使人们对能预防或控制HSV-2感染的疫苗进行研究。     

我国不同人群单纯疱疹病毒2型感染率及危险因素Meta分析

目的 了解我国不同人群单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染率水平及其危险因素.方法 采用Statal2.0对我国不同人群HSV-2感染率及相关危险因素数据进行meta分析、应用SPSS22.0进行亚组间统计学检验.结果 普通人群HSV-2感染率为16.22％ (95％ CI:12.87％ ～ 19.91％),女性高于男性,分别为16.89％(95％ CI:12.91％～21.32％)和11.69％ (95％ CI:9.07％ ～ 14.56％).不同人群既往感染率各不相同,以女性性工作者(FSW) 44.77％ (95％ CI:38.47％ ～ 46.36％)较高.多数高危人群感染率高于普通人群.随着时间推移,普通人群既往和近期感染率呈下降趋势,高危人群既往HSV-2感染率先升后降.影响因素分析提示性别、梅毒感染、HIV阳性等是感染HSV-2的危险因素.结论 我国不同人群HSV-2感染率较高,以女性、高危人群和疑与HSV-2感染相关疾病患者更为突出.建议将HIV干预和包括HSV-2在内的性病相结合、加强HSV-2监测、加强育龄妇女及孕妇HSV-2检测控制HSV-2传播.     

2′-氟-5-甲基-ara-尿嘧啶治疗豚鼠生殖器疱疹感染导致低补体依赖性中和抗体反应

2′-氟-5-甲基-ara-尿嘧啶(FMAU)是近年来由Watanabe等合成的一种新的核苷类似物。许多研究已经证明,FMAU在细胞培养中和在动物体内具有抗单纯疱疹病毒(HSV)的作用。我们先前的研究证明,虽然FMAU对豚鼠生殖器原发性疱疹的疗效甚佳,但不能阻止单纯疱疹病毒2型(HSV-2)在动物神经组织中建立潜伏感染。本文采用动物模型,进一步观察了FMAU在治疗豚鼠生殖器疱疹感染时,对HSV-2补体依赖性中和抗体(CRN抗体)的影响。现报告如下:     

单纯疱疹病毒糖蛋白单克隆抗体对致死性腹腔感染BALB/c幼鼠的被动保护作用

用单纯疤疹病毒(HSV)Ⅰ型SM44株和Ⅱ型SaV株分别腹腔感染BALB/c小鼠,于感染前后不同时间经腹腔注射HSV单克隆抗体(McAb)观察6株McAbs对致死性腹腔感染小鼠的被动保护作用。结果4株McAbs(2C5、1A12、Mad-2、1D10)对HSV-Ⅰ感染的小鼠有保护作用,5株McAbs(2C5、1A12、2A8、1D10、CH-A9)对HSV-Ⅱ感染的小鼠有保护作用。体内保护作用与体外的中和活性相关;并分析了McAbs在中和试验中有无补体参与条件下的保护能力。还证实了HSV糖蛋白在急性感染病程中其型特异性和型共同性抗原决定簇在体内的表达。     

孕妇单纯疱疹病毒-Ⅱ型感染的检测分析

目的为了解孕妇单纯疱疹病毒-Ⅱ型(HSV-Ⅱ型)近期感染状况.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对7832名孕妇静脉血标本进行了HSV-Ⅱ-IgM检测.结果在上述7832名孕妇中检测出HSV-Ⅱ-IgM阳性标本108例,阳性率为1.38%.结论在孕妇中单纯疱疹病毒-Ⅱ型有一定的近期感染率.     

2049例自然流产和不孕妇女HSV-Ⅱ-IgM的检测

目的为了解自然流产和不孕妇女单纯疱疹病毒-Ⅱ型(HSV-Ⅱ型)的近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对1971例自然流产妇女、78例不孕妇女的静脉血标本进行了HSV-Ⅱ-IgM检测。结果在自然流产和不孕妇女中分别检测出HSV-Ⅱ-IgM阳性标本50例和2例,阳性率分别为2.54%(50/1971)和2.56%(2/78)。结论在自然流产和不孕妇女中单纯疱疹病毒Ⅱ型均有较高的近期感染率。     

T细胞对单纯疱疹病毒1的潜伏和再活化的调节

单纯疱疹病毒1型（HSV-1），像所有的疱疹病毒一样，拥有多种逃逸宿主免疫系统的机制，它可以长期持续存在于宿主体内，说明在多数情况下，机体免疫系统对它是无能为力的。HSV-1感染粘膜或皮肤的上皮细胞，然后进入外周神经末梢，经过神经轴突传导到感觉神经节。HSV-1潜伏在神经元中，并周期性的再活化，逆向沿着神经纤维到达表皮肤，开始新一轮的病毒复制，此为再感染或复发。     

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型，抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较，检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法；实验结果表明：本法特异、敏感，简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查，也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。     

单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1／HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法，鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白，存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上，其编码基因定位于长单一序列(UL)上，在0.490～0．564遗传单位之间，与已报道的HSV-2蛋白编码基因元重叠，因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型感染胎鼠原代神经元细胞模型的建立

目的 建立单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染胎鼠原代皮质神经元细胞模型。方法 取孕14～16d昆明小鼠皮质神经元进行细胞培养并感染HSV-Ⅰ。观察倒置光学显微镜下神经元形态变化，并应用流式细胞仪检测二者的百分比。应用间接免疫荧光方法观察正常及病毒感染组神经元和星形胶质细胞的变化。用特异性HSV-Ⅰ荧光抗体检测神经元受染情况，并利用MTT比色实验检测细胞活性。结果 原代培养神经元数量、形态良好。用阿糖胞苷抑制星形胶质细胞生长后，神经元纯度较高。培养3d时加入HSV-Ⅰ感染神经元，HSV-Ⅰ特异性免疫荧光反应阳性，受染神经元形态变化，活性降低。结论 HSV-Ⅰ可直接感染原代培养神经元细胞，为进一步研究单纯疱疹病毒脑炎的发病机制提供了较好的体外模型。     

宁波地区1220例孕妇TORCH感染状况分析

目的了解宁波地区孕妇TORCH感染状况,为预防TORCH感染、降低新生儿出生缺陷发生率提供参考资料。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对1220例妊娠妇女进行TORCH-IgM及IgG抗体检测,然后采用病例-对照研究分析TORCH感染与不良妊娠的相关性。结果 TORCH的10项检测结果 ,包括TOX、RUV、CMV、HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ的IgM阳性率分别为2.42%,1.89%,4.26%,9.19%,2.54%,IgG阳性率分别为3.01%,65.4%,90.47%,52.86%,13.3%。本地区不良妊娠孕妇群体中TOX、RUV、CMV、HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ的IgM抗体阳性率分别为12.77%,10.20%,14.29%,21.28%,10.64%与对照组比较差异性显著(P0.01)。结论宁波地区妊娠妇女HSV-Ⅰ感染率最高,其次是CMV。TORCH感染是不良妊娠结局的重要危险因素,应重视TORCH病原体感染的早期筛查和诊治。     

人乳头瘤病毒、沙眼衣原体和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染与宫颈疾病的相关性研究

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)、沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-Ⅱ)感染与宫颈疾病的关系.方法 采用核酸分子快速杂交基因分型技术对598例宫颈脱落细胞进行HPV感染基因型分型测定,同时应用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测CT和HSV-Ⅱ两种病原体的感染情况.结果 HPV、CT和HSV-Ⅱ的阳性检出率分别为24.9％、9.2％和8.9％,且随着宫颈病变程度加重而逐渐增高,宫颈炎组和宫颈癌病变组三种病原体的感染率差异均有统计学意义.HPV感染以高危型为主(占77.9％),低危型为22.1％.HPV高危型和阴性组比较两种病毒的感染率有统计学差异(CT:x2=26.97,P＜0.05;HSV-Ⅱ∶x2=65.93,P＜0.05).各宫颈病变组均有多病毒混合感染情况出现,其中宫颈癌组混合感染率为22.2％.结论 HPV、CT和HSV-Ⅱ感染与宫颈癌的发生密切相关,多病原体混合感染会促进宫颈癌的发生.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA聚合酶的纯化与鉴定

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)可以在受染细胞中诱导许多病毒特异性多肽的合成,其中少数具有特异性酶活性,例如HSV-2诱导的DNA聚合酶等。我们从HSV-2感染的Vero细胞中分离纯化了DNA聚合酶,并且对其特性进行了比较研究。     

T细胞对单纯疱疹病毒1的潜伏和再活化的调节

单纯疱疹病毒1型(HSV-1),像所有的疱疹病毒一样,拥有多种逃逸宿主免疫系统的机制,它可以长期持续存在于宿主体内,说明在多数情况下,机体免疫系统对它是无能为力的。HSV-1感染粘膜或皮肤的上皮细胞,然后进入外周神经末梢,经过神经轴突传导到感觉神经节。HSV-1潜伏在神经元中,并周期性的再活化,逆向沿着神经纤维到达表皮肤,开始新一轮的病毒复制,此为再感染或复发。     

国产化学发光法评估围孕期妇女TORCH感染情况及其IgM假阳性结果的分析

目的 探讨苏州地区围孕期女性TORCH感染情况及流行特点,并对TORCH-IgM假阳性检测结果进行分析,为本地区围孕期女性保健提供参考依据.方法 回顾性分析、统计2018年6月至2020年9月在南京医科大学附属苏州医院就诊的17984例围孕期女性TORCH检查结果,利用国产化学发光免疫分析法(CLIA)对TORCH的IgG以及IgM抗体进行检测,分析感染率.利用ELISA法对129例TORCH-IgM和IgG抗体双阳性血清进行IgG亲和力检测,分析IgM抗体假阳性结果.结果 17984例TORCH检测结果中,IgG抗体阳性率由高到低依次为CMV(97.58％)、HSV-1(89.54％)、RV(78.81％)、HSV-2(10.88％)和TOX(2.83％).IgM抗体阳性率由高到低依次为CMV(1.22％)、HSV-1(1.18％)、HSV-2(0.77％)、RV(0.57％)和TOX(0.36％),TOX感染阳性率最低,CMV感染阳性率最高.RV、CMV和HSV-1感染模式以IgM-/IgG+为主,TOX和HSV-2主要表现为IgM-/IgG-模式.按照季节统计,HSV-1-IgM在冬季阳性率最高(χ2值8.36,P值0.04),TOX-IgM、RV-IgM、CMV-IgM和HSV-2-IgM各季节阳性率差异无统计学意义(χ2值分别为2.51、4.16、1.84和5.12,P值分别为0.48、0.25、0.61和0.16).TORCH-IgG抗体阳性率四季差异均无统计学意义.按照年龄分组统计,<35岁组CMV-IgG、HSV-1-IgG和HSV-2-IgG阳性率明显低于≥35岁组(χ2值分别为12.34、15.04和238.36,均P<0.01),低年龄组TOX-IgG感染率明显高于高年龄组(χ2值为10.01,P<0.01),两年龄组间RV-IgG和TORCH-IgM抗体阳性率差异无统计学意义.化学发光免疫分析法检测129例TORCH-IgM和IgG抗体双阳性标本中,仅19例(14.73％)检测结果为IgG低亲和力.结论 苏州地区围孕期女性TORCH感染普遍,建议育龄女性孕前进行常规筛查,防止TORCH近期感染,预防出生缺陷.对于TORCH-IgM和IgG抗体双阳性结果可进一步联合IgG亲和力检测,排除TORCH感染假阳性.     

细胞内钙离子螯合剂抑制HSV-1诱导Hela细胞的凋亡作用

目的：探讨HSV-1在诱导Hela细胞凋亡中，细胞内游离钙浓度的变化及钙离子螯合剂对HSV-1诱导Hela细胞凋亡的抑制作用。方法：HSV-1感染Hela细胞后，用扫描电镜及透射电镜观察凋亡情况。用荧光探针标记细胞内游离Ca^2 ，在不同时间观察细胞内游离Ca^2 浓度的变化。结果：HSV-1感染Hela细胞后，出现了典型的凋亡形态学变化。细胞内游离Ca^2 浓度在HSV-1感染Hela细胞后12h达高峰；典型的凋亡形态学变化出现在HSV-1感染Hela细胞后24h。细胞内Ca^2 螯合剂能显著抑制HSV-1诱导的Hela细胞凋亡。结论：细胞内游离Ca^2 在HSV-1诱导的Hela细胞凋亡过程中，具有重要作用，此实验结果为临床治疗相关疾病提供了有用的线索。     

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。     

生殖器疱疹患者治疗前后血清IL-2/IFN-γ水平及NK/LAK细胞活性的变化

生殖器疱疹(genital herpes，GH)是有Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染引起的一种疾病，由于HSV-2在人体内不产生永久性免疫力，故本病较易复发我们通过测定治疗前后GH患者血清IL-2和IFN-γ的水平及NK细胞和LAK细胞活性的变化，来探讨其免疫功能的变化，并揭示GH发病的免疫学机制。     

单纯疱疹病毒2型潜伏感染激活模型的建立及潜伏相关转录子开放读码框架抑制后对潜伏相关转录子基因表达的影响

目的 研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏感染激活中潜伏相关转录子(LAT)开放读码框架(ORF)抑制后对LAT基因表达的影响。方法 建立HSV-2潜伏感染复发的神经细胞(SHSY5Y)模型。运用相差显微镜观察HSV-2潜伏及激活后SH-SY5Y细胞形态的变化。对病毒在细胞中的潜伏及激发进行PCR验证并测序。设计3对siRNA,激活诱导后转染SH-SYSY细胞,相差显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR半定量检测转染前后LAT ORF表达的改变。结果在存在60 μmol/L阿昔洛韦(ACV)的环境,HSV-2在SH-SY5Y细胞中建立潜伏状态。病毒在SH-SY5Y细胞中最长可潜伏14d。43℃ 1.5 h诱导病毒潜伏激发,而相差显微镜观察发现,病毒激发后细胞病变从24h到72 h,细胞变性、坏死的程度、数量随感染时间延长而增加。HSV-2 LAT、糖蛋白G(gG)基因PCR扩增及电泳结果证实病毒在细胞中的潜伏及激活。LAT ORF-siRNA转染细胞后,LAT ORF mRNA的表达水平在转染后24、36和48 h分别减少了39％、51％和60％。结论 抑制LAT ORF后能够抑制HSV-2 LAT基因的表达,为进一步研究LAT ORF在病毒潜伏感染复发中的作用提供了依据。