白血病患者骨髓基质细胞中KDR和Sema3基因的表达特点

KDR与其配体血管内皮细胞生长因子(VEGF) 1 6 5介导肿瘤血管形成,参与实体瘤的生长、转移和播散[1 ] 。Sema3与其受体Neuropilin 1 (NP 1 )结合,除可以引导神经轴突生长,在骨髓细胞和血细胞中也有丰富的表达,并可调节血管发生。在内皮细胞中,KDR和Sema3的作用密切相关[2 ] 。推测二者在造血微环境调控中可能发挥一定作用。我们采用PCR ELISA检测两者在白血病和非血液病患者骨髓基质细胞(BMSC)中的表达,为探讨其在白血病异常造血调控中的作用提供理论依据。病例和方法1　研究对象及骨髓单个核细胞(BMMNC)的分离　细胞形态学和组…     

SCL基因在白血病患者骨髓基质细胞中的表达

为了解白血病干细胞 (stemcellleukemia ,SCL)基因在白血病骨髓基质细胞 (BMSC)及骨髓细胞中的表达情况 ,收集 18例急性髓系白血病 (AML)、17例慢性粒细胞白血病 (CML)、7例急性淋巴细胞白血病 (ALL)和 33例正常骨髓标本的单个核细胞 (MNC)进行体外长期培养 ,分别收集悬浮细胞 (造血细胞 )和扩增后的贴壁细胞 (BMSC)。运用RT PCR ELISA检测SCL基因的表达 ,分析表达率 ,并以管家基因 β2 微球蛋白 (β2 M)为内参照进行半定量分析。结果发现 ,SCL基因在AML(2 7.8% )和CML(11.8% )的BMSC中的表达率均低于正常对照组 (6 9 7% ,P <0 .0 5 )。SCL基因在CML骨髓造血细胞中的表达率 (6 4 .3% )高于其对应的BMSC(P <0 .0 5 )。半定量分析SCL基因在AML骨髓造血细胞中的表达水平显著高于其对应的BMSC(P <0 .0 5 )。结论 :SCL基因在AML和CML的BMSC中的相对低表达状态可能与血液病造血调控的异常有关。     

血管细胞粘附分子—1与骨髓基质细胞

血管细胞粘附分子－1（vascular cell adhesion molecule1,VCAM-1）是一种重要的细胞粘附分子,VCAM－1与VLA－4结合后导致构型改变,都成为高亲和力的粘附分子,处于活化状态,能使造血干细胞的迁移、归巢、定居和分化等功能。在病理条件或受辐射的VCAM－1无论是表达还是功能都有很大的变化。     

白血病患者骨髓基质细胞上清TNF—α含量的测定

近年来 ,人们对白血病细胞自分泌造血细胞因子进行了广泛的研究 ,对于揭示白血病细胞的生物学特性及造血调控提供了实验依据。为研究白血病骨髓基质细胞对造血调控的影响 ,我们对 13例白血病骨髓基质细胞集落培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF α)含量进行了测定。材料与方法病例选择AL 10例 (AML 7例 ,ALL 3例 ) ,CML 3例。男 8例 ,女5例 ,年龄 2 1- 6 9岁 ,中位年龄 38岁 ,均为初治患者。健康骨髓 10例为正常对照 ,年龄 2 0 - 45岁 ,中位年龄 34岁。骨髓基质细胞集落培养按文献 [1,2 ]的方法。将培养体系接种于 2 5ml培养瓶中 ,置于 37…     

骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡相关研究进展

骨髓基质细胞与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在机体造血发育、血液病发生、恶性血液病细胞凋亡等生理病理过程中发挥着重要作用。本文综述了骨髓基质细胞保护白血病细胞抑制药物诱导的凋亡及其机制的相关研究进展。     

急性白血病骨髓基质细胞Connexin 43的表达及细胞间通讯功能研究

本研究探讨急性白血病和正常骨髓基质细胞中连接蛋白43（connexin 43, Cx43）的表达及细胞间隙连接通讯（gap junction intercellular communication, GJIC）功能的变化及二者细胞通讯功能之间的差异。体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞,采用细胞免疫组织化学方法及计算机灰度检测观察二者之间Cx43表达的变化,采用细胞划痕染料传输技术比较两者之间GJIC功能的差异。结果显示,体外培养的急性白血病骨髓基质细胞Cx43的表达较正常骨髓基质细胞Cx43的表达明显减低,GJIC功能减弱。结论：急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减低。     

血管细胞粘附分子-1与骨髓基质细胞

血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)是一种重要的细胞粘附分子,VCAM-1与VLA-4结合后导致构型改变,都成为高亲和力的粘附分子,处于活化状态,能使造血干细胞在骨髓基质细胞上形成聚集体,并参与造血干细胞的迁移、归巢、定居和分化等功能。在病理条件或受辐射时的VCAM-1无论是表达还是功能都有很大的变化。     

FLT3配基基因在人骨髓基质细胞中的表达

目的 构建人FLT3配基（FL）逆转录病毒载体，并观察其在人骨髓基质细胞中的表达。方法 用基因重组技术，将FLcDNA插入逆转录病毒载体pLXIN，获得重组载体pLFIN。采用脂质体法将重组质粒pLFIN转染包装细胞PA317，G418筛选抗性克隆，用抗性克隆上清液感染人骨髓基质细胞，RT-PCR和基因组DNA-PCR检测外源基因mRNA的转录及染色体的整合，ELISA法和小鼠CFU-GM集落形成法检测FL蛋白表达量和生物学活性。结果 酶切鉴定表明成功构重组逆转录病毒载体pLFIN；染色体基因组中整合有外源基因FL和Neo；在mRNA和蛋白质水平均可检测到FL表达；24hFL蛋白表达量为4.35ng/ml，活性测试结果显示转染的骨髓基质细胞分泌FL。结论 逆转录病毒介导的FL在骨髓基质细胞中获得表达，并具有良好的生物学活性，为进一步研究转基因骨髓基质细胞对造血调控的影响提供了实验依据。     

CML中转录因子GATA-3的表达和突变分析

应用RT-PCR分析转录因子GATA-3基因在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况。表达GATA-3基因的标本进一步应用单链构象多态性(SSCP)分析GATA-3基因的锌指结构区,发现异常电泳迁移带的标本进行序列分析。结果显示:18/28例CML外用血单个核细胞有GATA-3基因表达,SSCP分析发现一例CML出现异常迁移带,序列分析显示为基因点突变引起精氨酸改变为赖氨酸。结果提示,GATA-3表达于大多数GML中,并存在突变情况。     

急性非淋巴细胞白血病中转录因子GATA—2基因插入突变

采用ＲＴ－ＰＣＲ,单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和核苷序列分析检测８５例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）病人外周血单个核细胞中ＧＡＴＡ－２基因的表达和突变情况。结果发现绝大多数ＡＮＬＬ都表达了ＧＡＴＡ－２基因（８９．４％）,并发现１例Ｍ１病人的ＰＣＲ产物较正常产物大,序列分析显示在ＧＡＴＡ－２基因等二锌指区出现１８个核苷酸的插突变,使其ＧＡＴＡ－２因子的第二锌指增加６个氨基酸,其中含有１个能与锌离子结合的半胱氨酸,该插入突变可能引起ＧＡＴＡ－２的功能改变,该结果为首次发现ＡＮＬＬ中的ＧＡＴＡ－２基因的插入突变。     

急性白血病患者骨髓基质造血微环境的某些异常

为了探索人白血病骨髓造血微环境的异常所在,本实验采用胶体金标记及银增染的免疫电镜方法,检测了急性白血病患者及正常人骨髓长期培养的基质细胞某些生长因子、粘附分子及细胞外基质的表迭情况。结果表明,急性白血病患者长期培养的基质细胞表迭的GM-CSF(粒-巨噬系集落刺激因子)较对照组高,淋巴细胞扫巢相关粘附分子(HCAM),血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)较对照组低,纤连蛋白(Fn)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)与对照组无差别。结论 提示急性白血病患者骨髓长期培养的基质细胞某些生长因子和粘附分子表达异常。     

自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病骨髓的净化

为考察慢性粒细胞白血病(CML)患者自体树突状细胞(DCs)活化骨髓细胞、净化骨髓的作用,采用免疫磁珠从2例血液学缓解的CML骨髓单个核细胞(BMMNCs)分离DCs,另取BMMNCs置T-25塑料培养瓶建立Dexter培养体系,分为3份,第1份为对照,第2份加rhIL-2,第3份加自体DCs.每周取半量非贴壁细胞、计数、行CFU-GM检测,然后加等量新鲜培养基继续培养.当非贴壁细胞总数＜2×105时终止培养,收集贴壁细胞做CFU-GM集落形成试验并检测CD34和P210表达.取贴壁细胞形成的CFU-GM集落,抽提RNA,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测BCR/ABL的表达.结果发现,在DCs加入CML骨髓Dexter培养体系培养后1-2周,非贴壁细胞的CFU-GM产量明显下降,与rhIL-2的体系基本平行,同时体系中的P210阳性细胞显著减少.不过,培养3周后含DCs的体系CFU-GM产量下降减缓,而含rh-IL-2的体系CFU-GM产量持续下降.在含自体DCs的Dexter体系,贴壁细胞中CD34+细胞和P210+细胞比例最低,只是贴壁细胞产生的CFU-GM集落中,BCR/ABL(+)的集落比例与不合DCs的体系比较无明显差别.这些结果说明自体DCs加入CML骨髓Dexter培养体系能减少白血病的祖细胞,包括成熟的祖细胞和原始的祖细胞,自体DCs有可能用于CML骨髓的体外净化.     

急性白血病病人骨髓细胞胞苷脱氨酶基因表达的研究

本研究的目的是测定胞苷脱氨酶 (cytidinedeaminase ,CDD)在正常骨髓细胞和不同病期急性白血病 (AL)病人细胞内mRNA的表达水平 ,并探讨该酶与临床的关系。研究采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测83例AL病人 (初治 31例、复发难治 2 9例、缓解 2 3例 )和 15例正常人的骨髓细胞CDD表达 ,以CDD/ β actin大于或等于 0 5定为高表达。结果显示 ,CDD基因表达量在初治和难治复发病例中分别为 0 .4 90 5± 0 .2 85 11和 0 .4 96 9± 0 3180 2 ,高表达率分别为 4 8.3%和 5 1.7%;在完全缓解病例和正常人中分别为 0 .3338± 0 .2 3838和 0 .3193±0 15 390 ,高表达率分别为 13.3%和 15 .4 %;初治和难治复发病例的CDD基因表达量显著高于完全缓解病例和正常人 (P <0 .0 5 ) ,但初治与难治复发病例之间、完全缓解病例与正常人之间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;难治复发病例中ALL的CDD表达量显著高于AML(0 .75 0 4± 0 .10 939vs 0 .4 336± 0 .3372 5 ;P <0 .0 5 ) ;初治 3例高表达中 2例缓解 ,1例未缓解 ,5例低表达全部缓解 ;难治复发 8例高表达中 3例缓解 ,5例未缓解 ,10例低表达中 4例缓解 ,6例未缓解 ,但未发现缓解率存在有显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :CDD在AL的不同病期表达水平不同 ,但CDD高表达可     

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞nm23—H1mRNA表达及临床意义

nm2 3基因在人类肿瘤发生、发展的作用日益受到重视。近年来发现该基因与白血病和恶性细胞的增殖有关 ,参与白血病的发生、发展过程 ,在骨髓增生异常综合征 (MDS)中的表达 ,则国内尚无报道。我们应用RT PCR技术 ,检测MDS患者骨髓细胞nm2 3 H1 基因的表达 ,探讨其与临床的关系。材料与方法研究对象MDS患者 2 8例 ,其中难治性贫血 (RA) 6例 ,环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RAS) 6例 ,难治性贫血伴有原始细胞增多 (RAEB) 10例 ,转化中的RAEB(RAEB t) 6例。MDS转化成的急性白血病 (MDS AL) 4例 (M4 2例 ,M52例 )。以上患者均经…     

逆转录病毒介导的GM-CSF在骨髓基质细胞中基因转移与表达

为了探索逆转录病毒介导的GM-CSF在骨髓基质细胞(BMSC)中的基因转移与表达,采用电穿孔法将重组质粒pLXSN/GM和空载体pLXSN转染PA317细胞,经G418筛选,用抗性克隆培养上清液成功地感染了BMSC。经PCR和Southern blot分析证实BMSC基因组中整合有外源NeoR和GM-CSF cDNA,原位杂交显示有较强的GM-CSFmRNA的表达,经增殖法和集落形成法表明转染的BMSC分泌较多的GM-CSF。据此表明,转染的BMSC较未转染BMSC具有更强的支持造血功能,提示BMSC可作为造血功能障碍基因治疗的靶细胞,为GM-CSF基因治疗血液病奠定基础。     

转录因子GATA—2在早期造身过程中的作用

转录因子ＧＡＴＡ－２是ＧＡＴＡ家族的一成员,以其锌指结构结合于「（Ｔ／Ａ（ＧＡＴＡ）Ａ／Ｇ」的共同ＤＮＡ序列结构。近期,通过敲除小鼠ＧＡＴＡ－２基因的实验证明了ＧＡＴＡ－２在造血细胞发育中的重要地位。ＧＡＴＡ－２基因断裂导致全部造血祖细胞的减少;相反,强制表达ＧＡＴＡ－２则阻止正常造血。ＧＡＴＡ－２的调节作用发挥于早期胚胎时期并与其它的ＧＡＴＡ转录因子共同作用于粒系、红系、巨核系和肥大细胞系等的增     

白血病骨髓基质增强HL-60细胞抵抗IDA化疗药物研究

为了研究造血微环境异常在残留白血病发生中的作用和机制 ,采用Dexter型骨髓培养体系形成白血病骨髓基质细胞贴壁层 ,接种HL 6 0细胞共培养 ,用去甲氧基柔红霉素 (IDA)处理 ,观察HL 6 0细胞的活性变化。结果表明 :随着IDA剂量的增加及培养时间的延长 ,HL 6 0细胞活性逐渐减弱 ,与白血病骨髓基质共培养的HL 6 0细胞数明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,骨髓基质细胞层或单纯基质细胞条件培养液体外使IDA对HL 6 0细胞杀伤能力减弱。结论 :白血病骨髓基质有助于HL 6 0细胞抵抗化疗药物 ,对残留白血病的发展具有一定作用。