ER阳性和ER阴性人乳腺癌细胞株p53,mdm—2及p21^WAF1蛋白表达…

目的 研究ＥＲ阳性和ＥＲ阴性人乳腺癌细胞株ｐ５３、ｍｄｍ－２和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达及其与细胞生物学特性的关系。方法 应用细胞培养、基因转染和免疫组化染色ＬＳＡＢ法等技术，检测ＥＲ阳性、表达野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）蛋白的ＭＣＦ－７细胞和ＥＲ阴性、表达突变型ｐ５３（ｍｔｐ５３）和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞以及ＥＲ转染阳性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞中ｐ５３、ｍｎｍ－２和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达水平     

星形细胞肿瘤中MDM2蛋白与突变型p53蛋白的表达及其相关性研究

目的：探讨ｍｄｍ－２基因表达和ｐ５３基因突变在星形细胞肿瘤发生发展中的作用及两者的相关性。方法：采用ＳＡＢＣ免疫组化法对１２０例星形细胞肿瘤进行检测。结果：在分化不良性星形细胞瘤及多形性胶质母细胞瘤中，ＭＤＭ２蛋白的阳性率分别为３０．００％和３５．２９％，突变型ｐ５３蛋白的阳性率分别为３５．００％和４４．１２％，均明显高于高分化星形细胞瘤（４．３５％和６．５２％）；突变型ｐ５３蛋白染色阴性的星形细胞肿瘤中，ＭＤＭ２蛋白阳性率（２６．１５％）明显高于其染色阳性的肿瘤（９．３８％）。结论：ＭＤＭ２蛋白及突变型ｐ５３蛋白在星形细胞肿瘤中的表达均与该肿瘤的分化程度有关；ｍｄｍ－２基因扩增及产物ＭＤＭ２蛋白过度表达，可能是突变型ｐ５３蛋白染色阴性的星形细胞肿瘤发生的分子基础     

野生型p53基因诱导肝癌细胞凋亡及p21(WAF1/CIP1)蛋白过表达

目的：研究野生型ｐ５３基因对人肝癌细胞系细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染方法将野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）导入ｐ５３缺陷的ＨＣＣ－９２０４细胞系中，并获稳定表达。结果：转染ｗｔ－ｐ５３后细胞生长缓慢，Ｇ１期细胞数量由转基因前的４８．５％增加到７８．０％，并有较多细胞逐渐死亡。电镜观察和ＤＮＡ分析证实细胞死亡方式主要是细胞凋亡。免疫组化结果显示细胞转染ｗｔ－ｐ５３后，ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１的表达显著增加。结论：提示外源性野生型ｐ５３基因可以抑制肝癌细胞生长，并诱导细胞凋亡，这可能是通过ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１途径发挥上述作用的     

p53、p21、p185蛋白表达与横纹肌肉瘤分化及预后的关系

目的研究ｐ５３、ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白产物ｐ２１、ｐ１８５在横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）中的表达及其与ＲＭＳ的分型、分级和预后的关系。方法对确诊的５０例中的４１例有随访的ＲＭＳ用免疫组化ＡＢＣ法标记ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白，结果发现ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５在ＲＭＳ的阳性率分别为７２％、６８％、６０％，其阳性表达与年龄、性别和ＲＭＳ的组织类型差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；但与分化程度有关，其中ｐ５３、ｐ２１在低分化ＲＭＳ的阳性率分别为８５％和８０％，显著高于高分化ＲＭＳ的４２．９％和２８．６％（Ｐ＜０．０５）；ｐ５３蛋白在有转移组ＲＭＳ的阳性率为８６．４％，显著高于无转移组６０．７％（Ｐ＜０．０５）；有随访的４１例病例中。存活１年的ｐ５３蛋白阳性率为８６．７％，显著高于３年的４１．７％（Ｐ＜０．０５）。结论ｐ５３、ｐ２１蛋白表达可作为肿瘤分化及恶性程度的评价指标，而ｐ５３更能反映肿瘤预后，是肿瘤预后差的重要指标之一。     

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响

目的 探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法 体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后,用原位杂交,免疫组织化学及ＲＮＡ,蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果 ８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可减弱ＥＧＦＲ,Ｈ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ,突变型ｐ５３等原表达,增强野生型ｐ５３基因表达和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达。     

胶质瘤p53、bcl-2、MDM2表达与细胞增殖和凋亡的关系

目的：研究胶质瘤中ｐ５３ 、ｂｃｌ２ 、ＭＤＭ２ 表达与细胞增殖和凋亡的关系。方法：对４８ 例胶质瘤用免疫组化法检测ｐ５３、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 蛋白表达;以Ｋｉ６７ 标记指数和ＡｇＮＯＲ 计数检测其增殖活性;用ＴＵＮＥＬ 法检测细胞凋亡。结果：ｐ５３、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 蛋白表达阳性率分别为４７－９ ％ 、３５－８ ％ 及１２－５ ％ ,细胞增殖活性随肿瘤ｐ５３ 、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 表达水平增高而增高,细胞凋亡则相反。结论：ｐ５３、ｂｃｌ２、ＭＤＭ２ 蛋白过表达与细胞增殖失控、凋亡抑制关系密切,在胶质瘤恶性进展中起重要作用。     

8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞生长相关基因表达的影响

目的 探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法 体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后,用原位杂交,免疫组织化学及ＲＮＡ,蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果 ８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可减弱ＥＧＦＲ,Ｈ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ,突变型ｐ５３等原表达,增强野生型ｐ５３基因表达和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达。     

p53、c-erbB-2、PCNA和EGFR在膀胱癌中过表达及其意义

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌中异常表达与病理分级、临床分期、复发和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检查１１７例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ的表达水平。结果：１１７例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ阳性表达率分别为４７．０％、２９．９％、５３．８％和４８．７％。ｐ５３和ＰＣＮＡ阳性表达产物定位于肿瘤细胞核内，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达产物定位于细胞膜上，ＥＧＦＲ阳性表达产物定位于细胞膜或细胞浆内。结果表明ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达与膀胱癌的分级、分期、复发及术后生存率等之间有统计学意义。结论：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达有助于评估膀胱癌预后，多基因异常表达作为预后评价指标更有意义。     

bcl-2、p53蛋白及PCNA表达与横纹肌肉瘤临床病理相关性研究

目的：研究横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）中ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ表达与其临床病理的相关性。方法：对５０例（随访４１例）横纹肌肉瘤进行免疫组化ＡＢＣ法标记。结果：ｂｃｌ－２、ｐ５３基因蛋白和ＰＣＮＡ，发现ｂｃｌ－２、ｐ５３、ＰＣＮＡ阳性表达率分别为２８％、７２％、７０％，其阳性表达与年龄、性别及不同组织类型的ＲＭＳ无关（Ｐ＞０．０５）。但与分化程度有关，ｐ５３、ＰＣＮＡ在低分化ＲＭＳ阳性率分别为８５％、９５％，显著高于高分化ＲＭＳ４２．８％和１４．３％（Ｐ＜０．０５），随访存活１年以内的ｐ５３、ＰＣＮＡ阳性率均为８６．７％，亦明显高于存活超过３年以上的阳性率３３．３％和４１．７％（Ｐ＜０．０５）。而ｂｃｌ－２在低分化ＲＭＳ阳性２０％显著低于高分化７１．４％（Ｐ＜０．０５），随访存活１年以内的阳性率１３．４％明显低于存活超过３年以上的４１．４％（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３与ｂｃｌ－２阳性表达呈明显负相关，ｐ５３阳性率越高，而ｂｃｌ－２阳性率越低。结论：ＰＣＮＡ、ｐ５３、ｂｃｌ－２蛋白表达能比较准确地反映ＲＭＳ的生物学特性，ｐ５３、ｂｃｌ－２可作为肿瘤预后显著相关的有效指标。     

肺小细胞癌p53基因分析mdm—2基因蛋白表达的关系

目的：探讨肺小细胞癌（ＳＣＬＣ）的ｐ５３基因改变的ｍｄｍ－２基因的蛋白表达的关系。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法和聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析的方法,对１４例ＳＣＬＣ的石蜡切片组织进行研究。结果：免疫组化染色ｐ５３蛋白阳９例,阳性率为６４．３％（９／１４）;ｍｄｍ－２蛋白阳性４例,阳性率为２８．６％（４／１４）。ｐ５３基因海５、６、７、８外显子,突变率分别为２１．４（３／１４     

伯基特淋巴瘤与EB病毒的关系及其p53和bcl-2蛋白的表达

目的 了解柏基特淋巴瘤和ＥＢ病毒的关系及ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白的表达。方法 采用ＰＣＲ、原位ＰＣＲ及免疫组化ＬＳＡＢ方法,检测了２８例伯基特淋巴瘤石蜡包埋的组织块。结果 发现８例ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性,阳性率为２８．５％,８例阳性病例做了原位杂交,其中３例为阳性。２７例做了ｐ５３和ｂｃｌ－２免疫组化检测,生病例各为１２例（４４．４％）和１３例（４８．１％）。Ⅰ￣Ⅱ期和Ⅲ￣Ⅳ期ｐ５３和ｂｃｌ－２阳性病例     

人胰腺癌中MDM2癌基因的表达和对野生型p53的拮抗作用

为研究ＭＤＭ２癌基因和ｐ５３在胰腺癌中的相互关系和作用，我们用基因重组、基因转移和分子杂交技术探讨了ＭＤＭ２在胰腺癌细胞系中的表达和扩增情况，并研究了ＭＤＭ２对野生型（ｗｔ）ｐ５３的拮抗作用。结果显示，５株人胰腺癌细胞系均有ＭＤＭ２基因不同程度的表达。ＭＤＭ２表达载体转染转化的胰腺癌细胞系ＰＣ－２／ｓ－ｗｔｐ５３细胞（已转染有野生型ｐ５３的胰腺癌细胞）后，ＭＤＭ２可以部分地解除野生型ｐ５３对胰腺癌细胞生长的抑制作用，证实ＭＤＭ２基因对野生型ｐ５３的功能有拮抗作用。     

星形细胞肿瘤中MDM2蛋白与突变型p53蛋白的表达及其？…

目的：探讨ｍｄｍ－２基因表达和ｐ５３基因突变在星形细胞肿瘤发生发展中的作用及两者的相关性。方法：采用ＳＡＢＣ免疫组化法对１２０例星形细胞肿瘤进行检测。结果：在分化不良性星形细胞瘤及多形性胶质母细胞瘤中，ＭＤＭ２蛋白的阳性率分别为３０．００％和３５．２９％，突变型ｐ５３蛋白的阳性率分别为３５．００％和４４．１２％，均明于高于高分化星形细胞瘤（４．３５％和６．５２％）；突变型ｐ５３蛋白染色阴性的星形细     

p53、EGFR和Ki-67抗原在子宫恶性中胚叶混合瘤中的表达

目的：研究子宫恶性中胚叶混合瘤ｐ５３、ＥＧＦＲ和Ｋｉ－６７抗原的表达及与肿瘤临床分期、组织学分级和预后的关系。方法：用免疫组化Ｓ－Ｐ法对２１例子宫恶性中胚叶混合瘤的存档资料作染色观察。结果：ｐ５３、ＥＧＦＲ和Ｋｉ－６７抗原的阳性表达率分别为６１．９％、６１．９％和７１．４％。临床分期Ⅱ～Ⅳ期肿瘤（１０／１２）的ｐ５３阳性表达率明显高于Ⅰ期肿瘤（３／９）（Ｐ＜０．０５）、肿瘤癌性成分Ⅱ级的ｐ５３阳性表达高于Ⅰ期（Ｐ＜０．０５）。６例在１年内死亡的病例，其中５例ｐ５３阳性染色，而５例生存２年以上的肿瘤ｐ５３免疫染色全部阴性，两组比较（Ｐ＜０．０５）。肉瘤成分Ⅲ级的ＥＧＦＲ阳性率高于Ⅱ级（Ｐ＜０．０５），除此而外，ＥＧＦＲ和Ｋｉ－６７的表达和肿瘤分期、预后均无相关性。结论：肿瘤的ｐ５３表达具有预后意义     

横纹肌肉瘤中MDM2及p53基因表达的原位杂交检测

目的观察ＭＤＭ２、ｐ５３癌基因在横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）发病中的作用及其与临床病理、预后间的关系。方法对确诊并有随访的３１例ＲＭＳ标本,用原位杂交技术进行ＭＤＭ２、ｐ５３定位观察。结果发现ＭＤＭ２及ｐ５３癌基因表达阳性率分别为７７４％（２４／３１例）和６６７％（２１／３１例）,其阳性率与年龄、性别和ＲＭＳ组织类型无明显关联（Ｐ＞０．０５）,但阳性率及其强度与ＲＭＳ分化程度（Ⅰ级与Ⅲ级）,转移与否及存活率差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论ＭＤＭ２、ｐ５３阳性检出率有助于判断ＲＭＳ恶性程度及预测肿瘤的转移和预后。     

野生型p53基因诱导肝癌细胞凋亡及p21（WAF1／CIP …

目的：研究野生型ｐ５３基因对人肝癌细胞系细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染方法将野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）导入ｐ５３缺陷的ＨＣＣ－９２０４细胞系中，并获稳定表达。结果：转染ｗｔ－ｐ５３后细胞生长缓慢，Ｇ１期细胞数量由转基因前的４８．５％增加到７８．０％，并有较多细胞逐渐死亡。电镜观察和ＤＮＡ分析证实细胞死亡方式主要是细胞凋亡。免疫组化结果显示细胞转染ｗｔ－ｐ５３后，ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１     

何杰金病中EB病毒感染和bcl—2蛋白的表达

目的探讨Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒与ｂｃｌ－２基因的关系。方法利用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测了６４例何杰金病ＥＢ病毒的潜在膜蛋白－１（ＬＭＰ－１）和ｂｃｌ－２蛋白的表达。用原位杂交方法检测了４１例何杰金病组织中的ＥＢＥＲ。又用双重染色的方法检测了７例ＥＢＥＲ和ｂｃｌ－２蛋白双阳性的何杰金病例。结果ＬＭＰ－１和ＥＢＥＲ的阳性率分别为３９％和４４％,所有ＥＢＥＲ阳性的病例ＬＭＰ－１均为阳性。ｂｃｌ－２蛋白的阳性率为２３％,其中仅有７例ＬＭＰ－１和ｂｃｌ－２蛋白同时阳性。双重染色结果为,在７例双阳性病例中ｂｃｌ－２阳性的细胞只有约５０％ＥＢＥＲ阳性,约４０％ＥＢＥＲ阳性的肿瘤细胞ｂｃｌ－２阳性。结论研究结果提示,在本组研究的病例中Ｒ－Ｓ细胞的ｂｃｌ－２蛋白的表达与ＥＢ病毒的存在与否无明显相关性。     

通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV蛋白表达的初步研究

应用半乳糖末端糖蛋白受体（ＡＳＧＰ－Ｒ）介导的内吞作用，将外源基因导入真核细胞，与脂质体介导的转染和细胞表面转铁蛋白受体（Ｔｆ－Ｒ）介导的内吞作用相比，虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移，但ＡＳＧＰ－Ｒ法具有肝细胞特异性，而脂质体法和Ｔｆ－Ｒ法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｍＲＮＡＰｒｅＣ／Ｃ区的核酶质粒ｐＣＭＶ－Ｒｉｐｃ特异性导入肝细胞并发挥作用，通过酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测细胞培养液中的乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ），评价核酶在细胞水平对ＨＢＶ抗原表达的阻断作用。结果表明当核酶质粒ｐＣＭＶ－Ｒｉｐｃ与ＨＢＶ抗原表达质粒ｐＵＣ－２ＨＢＶ共转染ＨｅｐＧ２细胞时，核酶对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ表达的抑制率分别为５５．２９％和６８．７３％。     

p53基因结构与功能研究的新进展

ｐ５３蛋白的信号区有１个ＳＨ－３区结合部位,非专一ＤＮＡ结合区可促进顺序专一的ＤＮＡ结合区与ＤＮＡ损伤部位结合。ｐ５３蛋白可整合细胞对各种危急情况的反应,其信息传递途径上游是各种危急状况,有ＡＴＭ类的基因起作用。ｐ５３蛋白通过靶基因ｐ２１ＷＡＦ－１及ＧＡＤＤ４５调控Ｇ１关卡,也参加了Ｇ２／Ｍ关卡的调控;通过上调靶基因Ｂａｘ、ＩＧＦ－ＢＰ－３,抑制ＢｃＬ－２基因表达,调控凋亡;维持基因组的遗传学稳定性,行使抑瘤基因功能。     

重组腺病毒介导的野生型p53对人胰腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的研究恢复外源性野生型（ｗｔｐ）ｐ５３的表达对人胰腺癌细胞生长和凋亡的作用。方法构建了一个复制缺陷型５型腺病毒ｗｔｐ５３表达载体Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３，含有人ＣＭＶ启动子，人野生型ｐ５３和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号，经腺病毒包装细胞２９３细胞包装、扩增后，转染胰腺癌ＰＣ２细胞。ＰＣＲ和免疫沉淀技术证实转染的细胞有外源ｗｔｐ５３基因的存在和表达。结果转染的ＰＣ２细胞的生长率和３Ｈ掺入率降低。原位凋亡检测、流式细胞术和ＤＮＡ凝胶电泳显示转染细胞凋亡明显增多。而ＰＣ２细胞和用Ａｄ５ｐＸＪ转染的细胞没有这些改变。结论复制缺陷型腺病毒是一种安全高效的基因转移载体，恢复ｗｔｐ５３的表达可以有效地诱导凋亡和抑制胰腺癌细胞生长