rolB基因对颠茄表型发育和托品烷生物碱合成的影响

发根农杆菌pRiA4质粒上的rol基因是促进次生代谢的强效基因,可利用rol基因对颠茄进行分子育种以提升颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)含量。本研究将rolB基因在颠茄植株中进行超表达,为了研究rolB基因对颠茄TAs生物合成的影响,分析了转基因颠茄的表型、TAs含量及TAs合成途径中关键酶基因的表达水平。结果表明,转基因颠茄根系发达,叶片增大、叶片鲜重增加、叶片颜色加深,花朵增大、花形改变,雌蕊高度降低,花粉活力下降。转基因颠茄茎中TAs的含量显著高于对照,东莨菪碱、山莨菪碱、莨菪碱的含量分别为对照的2.11～2.91、1.23～2.37、4.88～5.20倍。与对照组相比, TAs合成途径中的关键酶基因N-甲基腐胺转移酶(PMT)、吡咯烷聚酮合酶(PYKS)、托品酮还原酶I (TRI)、芳香族氨基酸氨基转移酶4 (ArAT4)、UDP-糖基转移酶1 (UGT1)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达上调,且托品酮还原酶II (TRII)作为代谢分流基因表达下调。研究表明rolB基因通过增强TAs合成途径代谢流和减弱竞争支路代谢分流,增强了颠茄根中T...     

过表达内源PMT和H6H基因对颠茄发根托品烷类生物碱合成的影响

颠茄是我国药典规定的托品烷类生物碱包括东莨菪碱和莨菪碱最主要的商业栽培的药源植物。本研究采用基于发根的基因表达系统,农杆菌介导遗传转化颠茄,潮霉素筛选获得转颠茄自身PMT和H6H基因发根;基因组PCR鉴定转基因发根;液体摇床培养后,HPLC测量莨菪碱和东莨菪碱含量;qPCR检测颠茄PMT和H6H基因表达水平。基因组PCR检测获得5个双基因共转化颠茄发根系,其中2个发根系(PH2和PH14)的总生物碱含量得到显著提高,最高的PH2总生物碱含量为非转基因发根的2.7倍;另外3个转基因发根系总生物碱含量与对照相比没有显著性差异。4个转基因发根系(PH2、PH32、PH14和PH20)东莨菪含量都有提高,其中PH2东莨菪碱含量比对照提高了8.2倍。基因表达量与生物碱含量结果基本一致,说明颠茄发根中PMT和H6H两者同时维持高水平表达可以极大程度的促进东莨菪碱积累。     

超表达HnCYP82M3和DsTRI基因对颠茄托品烷生物碱合成的影响

托品烷生物碱(TAs)是一类临床上广泛应用的抗胆碱药物,颠茄是提取TAs的主要药源植物,利用代谢工程技术大量获取TAs具有重要的产业价值。本研究基于开源引流代谢工程策略,在颠茄发根中超表达TAs合成途径分支处的细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase, CYP82M3) HnCYP82M3 (来源于天仙子)和托品酮还原酶I(tropinone reductase I, TRI) DsTRI (来源于曼陀罗)两个酶基因,以期通过CYP82M3催化合成托品酮(开源), TRI进而将托品酮引入TAs合成的代谢方向(引流),大量促进3种TAs的积累。从天仙子根中克隆了HnCYP82M3基因,其编码氨基酸与颠茄AbCYP82M3序列一致性高达91.7%。单独超表达HnCYP82M3不影响颠茄发根TAs的含量,说明CYP82M3不是TAs合成的关键酶。同时超表达HnCYP82M3和DsTRI极大促进了3种TAs的积累,莨菪碱、山莨菪和东莨菪碱含量分别是对照的4.97倍、2.83倍和2.19倍,并且提高幅度大于DsTRI单表达。本研究证明分支点处酶基因共表达的开源引流策略是有效提高颠茄T...     

颠茄合剂中生物碱的含量测定

目的：建立颠茄合剂中莨菪碱的含量测定方法。方法利用莨菪碱在一定 pH条件下能与酸性染料（溴甲酚绿）定量结合成有色离子对,经氯仿提取后,以硫酸阿托品为对照,在波长416nm 下测定吸收度。结果在7．84～27．44μg· mL －1浓度范围内呈良好线性关系,r ＝0．9998。平均回收率93．85％,RSD＝2．56％。结论本法准确度好,灵敏方便实用,可用于该制剂的含量测定,控制制剂质量。     

复方颠茄合剂的工艺改进

目的 改进复方颠茄合剂的配制工艺,解决其出现絮状沉淀的问题.方法 复方颠茄合剂中的絮状沉淀主要来源于颠茄酊中的醇溶性的树脂类等杂质,由于溶稍系统的改变在水溶液中慢慢析出而形成的.针对这个主要原因,先将颠茄酊中有效成分莨菪类生物碱成盐,再加适量的蒸馏水,加热除去乙醇,使有效成分溶于水,杂质不溶于水而析出,滤除杂质后再加复方樟脑酊配制成复方颠茄合荆.结果 新工艺配制的复方颠茄合剂,不仅外观清澈透明,3个月内无任何沉淀,而且主药成分莨菪碱稳定,药品质量和稳定性得到大大提高.结论 新工艺制法简单、实用,有效的解决了复方颠茄合剂絮状沉淀的问题.     

莨菪烷类生物碱分析提取工艺研究进展

对中药材或中成药制剂中莨菪烷类生物碱成分的定性鉴别和提取工艺条件进行综述，为莨菪烷类生物碱成分的定性鉴别和提取分离提供参考。     

分光光度法测定颠茄合剂中莨菪碱的含量

目的建立颠茄合剂中莨菪碱的含量测定方法.方法用分光光度法,以原料颠茄酊为对照,在418 nm处测定莨菪碱的含量.结果莨菪碱在0.9%～2.1%(mg·L-1)浓度范围内,浓度和吸收度线性关系良好;样品回收率及RSD良好.结论该方法可以准确测定颠茄合剂中莨菪碱的含量.     

颠茄类生物碱的毛细管气相色谱和色—质联用分析

本文用毛细管气相色谱和气相色谱-质量选择检测器分析颠茄生物碱类(莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱和樟柳碱)的研究。对颠茄生物碱与不同硅烷化试剂、反应能力、反应时间以及反应温度作了探索。结果表明,MSTFA是最好的硅烷化试剂。文内给出了这些生物碱的原型和硅烷化衍生物的保留值和它们的特征性碎片离子。这些数据有助于该类生物碱的鉴定。方法已初步应用于这些生物碱在生物合成中的转化研究。此外,还讨论了颠茄生物碱类TMS衍生化的优点。     

酸性染料比色法测定复方颠茄合剂中莨菪碱含量

目的:研究复方颠茄合剂中莨菪碱的含量测定方法.方法:采用酸性染料比色法在pH 6.6磷酸盐缓冲液条件下测定莨菪碱的含量,检测波长(589±1)nm.结果:莨菪碱在1.2～7.2μg/mL浓度范围内呈线性,r=0.999 1,平均回收率为100.02%,(RSD=0.69%,n=4).结论:该法准确、方便、灵敏,可供该制剂的含量测定.该法关键在于调准pH,以免处方中其它组分干扰测定结果.     

反相离子对HPLC法测定天仙子中的生物碱及TLC法鉴别天仙子和…

本文用离子对ＨＰＬＣ法测定了天仙子中莨菪碱和东莨菪碱的含量。莨菪碱和东莨菪碱的样品量与峰面积积分值的线性范围分别为０．２４４５￣０．７３３２μｇ，ｒ＝０．９９９５和０．１８６４￣０．５５９２μｇ，ｒ＝０．９９９９；平均回收率分别为：９８．８２％，ＲＳＤ＝３．４１％（ｎ＝５）和９７．８６％，ＲＳＤ＝１．８５％（ｎ＝５）。样品被处理后，所得色谱图分离度好，无干扰。并用ＴＬＣ法对天仙子（含中亚天仙子）和     

对维U颠茄铝制剂中不同颠茄料源性质的分析判定与监管

<正>为了加强药品生产的质量监管,确保药品质量稳定,我们从原料来源的技术层面进行日常监管。由于同一品种的处方在国家相关部门与地方标准中常有不统一,处方投料出现不同的情形较为多见,对此,我们针对其标准进行标准归纳分析、工艺与药学分析、药理与应用分析得出监管判定、生产     

消旋山莨菪碱及其片剂中托烷生物碱的鉴别

目的对中国药典收载的消旋山莨菪碱片的托烷生物碱基团的鉴别试验提出修改建议。方法将消旋山莨菪碱片剂及其原料药的鉴别试验与药典附录Ⅲ(一般鉴别试验)中有关托烷生物碱类的鉴别试验进行比较、分析。结果消旋山莨菪碱片剂与原料药及附录中有关托烷生物碱基团的鉴别试验方法存在不一致之处。结论应对消旋山莨菪碱片剂鉴别方法进行修订。     

反相离子对HPLC法测定天仙子中的生物碱及TLC法鉴别天仙子和南天仙子

本文用离子对ＨＰＬＣ法测定了天仙子中莨菪碱和东莨菪碱的含量。莨菪碱和东莨菪碱的样品量与峰面积积分值的线性范围分别为０．２４４５～０．７３３２μｇ，ｒ＝０．９９９５和０．１８６４～０．５５９２μｇ，ｒ＝０．９９９９；平均回收率分别为：９８．８２％，ＲＳＤ＝３．４１％（ｎ＝５）和９７．８６％，ＲＳＤ＝１．８５％（ｎ＝５）。样品被处理后，所得色谱图分离度好，无干扰。并用ＴＬＣ法对天仙子（含中亚天仙子）和南天仙子进行了鉴别。为评价天仙子的真伪优劣提供了科学依据。     

莨菪类生物碱对18,28及38日龄小鼠的行为和记忆障碍作用

比较阿托品（Ａｔｒ），东莨菪碱（Ｓｃｏ），樟柳碱（ＡＴ３）和山莨菪碱（Ａｎｉ）对小鼠行为及记忆损伤作用。方法：行为和记忆实验用开阔和回避反应法。脑Ｍ受体用［＾３Ｈ］ＱＮＢ测定。结果：Ａｔｒ，Ｓｃｏ和ＡＴ３增加小鼠走动行为２６％－４２％，降低站忆。４个药物均能妨碍回避反应。小鼠１８日龄额叶皮层和海马［＾３Ｈ］ＱＮＢ结合位点数少于３８日龄７％－２３％。结论：１）莨菪类生物碱对小鼠行为和记忆障碍的作用随     

正交试验法对复方颠茄合剂生产工艺的改进

复方颠茄合剂按传统工艺生产后,放置约1个月后易出现絮状沉淀现象,影响外观质量及产品疗效。采用L9(34)正交试验法,以茛菪碱的含量及溶液的澄清度为考核指标,对复方颠茄合剂的配制工艺进行了改进研究。结果表明:以吐温-80作为助溶剂,用量为1%,并调pH至4.0为最佳配制工艺。改进后经常温放置一年,结果仍为澄清透明溶液。     

影响维U颠茄铝胶囊稳定性的因素分析

目的探讨维U颠茄铝胶囊制备工艺对其稳定性的影响.方法以颠茄浸膏中阿托品的含量为评价指标,筛选满足产品质量要求的制备工艺.结果用正交试验设计法在β-环糊精用量、包合时间和包衣材料用量中优化出最佳制备工艺,产品稳定性得到很大提高.结论该工艺简便可行,适用于实际生产.     

6,7—去氢托品的一种新合成法

用６β－羟基托品酮为起始原料，经８步反应合成了东莨菪碱全合成关键中间体－－６，７－去氢托品，总产率达３５．８％。     

他克林优先拮抗4种莨菪类生物碱引起的小鼠学习障碍(英文)

目的:比较他克林(tacrine,50μmol·kg~(-1),sc)拮抗莨菪类生物碱(0.05-50μmol·kg~(-1),ip)所致学习记忆障碍。方法:用两次性开阔和回避反应研究,小鼠于第一次实验前30min给药。结果:他克林对东莨菪碱(Sco)0.05-50μmol·kg~(-1)或阿托品(Atr)5-50μmol·kg~(-1)引起的学习和记忆障碍均有拮抗作用,以拮抗学习障碍最明显。他克林能改善樟柳碱(AT_3)和山莨菪碱(Ani)5-50μmol·kg~(-1)所致学习损伤,但不能拮抗其记忆损伤。Sco 0.5-50μmol·kg~(-1),AT_3和Atr5-50μmol·kg~(-1)完全拮抗,Ani 50μmol·kg~(-1)部分拮抗他克林引起的自主活动减少。结论:他克林优先改善莨菪类药物引起的被动回避反应学习障碍。