蟾毒灵抗肿瘤作用及其研究进展

蟾毒灵(bufalin)是中药蟾酥中提取的一种毒性配基之一,属强心甙类物质.近年来许多研究发现,蟾毒灵具有抑制多种肿瘤细胞增殖的作用,如血液系统肿瘤、肝癌、胃癌等.其能抑制肿瘤细胞增殖,并诱导肿瘤细胞分化和凋亡,抑制内皮细胞增生和血管生成等.本文就蟾毒灵在其抗肿瘤作用及其机制方面的研究进展作一综述.     

蟾毒灵通过下调PKM2抑制黑色素瘤细胞增殖、 迁移与侵袭的实验研究

目的：考察蟾毒灵（Bufalin）对黑色素瘤细胞增殖、迁移与侵袭,以及对有氧糖酵解关键酶M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,PKM2）的调控作用。方法：分别使用MTT、划痕及Transwell实验,考察蟾毒灵对A375黑色素瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响;利用试剂盒检测蟾毒灵对A375细胞有氧糖酵解主要指标乳酸、葡萄糖及丙酮酸激酶的影响;蛋白免疫印迹实验探讨蟾毒灵对PKM2蛋白表达的影响,以及对下游肿瘤迁移与侵袭相关蛋白表达的影响。结果：蟾毒灵能显著抑制A375细胞的增殖、迁移与侵袭;还能抑制A375细胞的有氧糖酵解及PKM2的蛋白表达,进而下调肿瘤转移相关蛋白MMP-2、MMP-9、N-cadherin的表达。结论：蟾毒灵对A375黑色素瘤细胞的增殖、迁移与侵袭具有明显的抑制作用,其抑制机制可能与抑制肿瘤有氧糖酵解途径中关键酶PKM2有关。     

蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌的作用和诱导细胞调亡的研究

目的观察蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌的疗效和诱导细胞凋亡作用。方法建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型,随机分为蟾毒灵低剂量组(1.0mg/kg)、蟾毒灵高剂量组(1.5mg/kg)、5-Fu组(24mg/kg)、5-Fu+低剂量蟾毒灵组(24mg/kg+1.0mg/kg),生理盐水(NS)组。腹腔注射给药,1次/d,连续给药6d。各组保留6只荷瘤鼠观察带瘤生存期,其余6只于用药第7天处死,测量鼠重变化、肿瘤生长抑制率;TUNEL法检测瘤体凋亡指数。结果治疗后,与NS相比,蟾毒灵高、低剂量组裸鼠体重无显著差异(P>0.05),5-Fu组、5-Fu+低剂量蟾毒灵组裸鼠体重明显降低差异(P<0.01);各用药组瘤体体积与NS组相比均显著缩小(P<0.05),蟾毒灵高剂量组较低剂量组瘤体体积显著缩小(P<0.05),蟾毒灵+5-Fu组较单纯蟾毒灵组瘤体体积显著缩小(P<0.05);蟾毒灵高、低剂量组平均生存期较NS组显著延长(P<0.05);蟾毒灵高剂量组凋亡指数明显高于其他各组(P<0.01)。结论蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌移植瘤有显著的抑制作用,诱导肿瘤细胞凋亡可能是蟾毒灵的抗肿瘤机理之一。     

蟾毒灵抑制低氧条件下乳腺癌细胞干性机制研究

目的:探究蟾毒灵(bufalin, BUF)对低氧条件下乳腺癌细胞干性的影响以及可能的机制。方法:慢病毒转染构建稳转低氧乳腺癌细胞模型MDA-MB-231/HIF1α^OE细胞株,以CCK-8、平板克隆、Transwell、划痕实验、克隆球悬浮实验检测BUF对低氧模型组乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测BUF对低氧模型组干性指标和PI3K/AKT信号通路的影响。结果:成功构建乳腺癌低氧细胞模型;低氧模型组的增殖率、克隆形成率、侵袭迁移能力以及克隆球形成能力明显高于Ctrl组;BUF干预后,上述干性指标明显降低;Western blot实验结果显示,低氧刺激激活PI3K/AKT信号通路,BUF可抑制低氧模型组PI3K/AKT信号通路的激活。结论:BUF可抑制低氧条件下乳腺癌细胞的干性,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路相关。     

蟾毒灵抗肝细胞癌作用及机制研究

肝细胞癌早期诊治困难,手术切除率低,放化疗疗效差,蟾毒灵是蟾酥中抗肿瘤作用最强蟾毒配基,蟾毒灵对人正常细胞没有作用,而对肝癌细胞具有明显的杀伤,抑制肝癌细胞生长。本文从蟾毒灵抗肝细胞癌生长作用及其相关作用机制进行论述,说明蟾毒灵在肝细胞癌治疗中重要意义和研究前景。     

酯蟾毒配基抑制人肝癌细胞体外增殖和迁移侵袭研究

本文旨在探讨酯蟾毒配基对人肝癌细胞增殖和迁移侵袭的影响及其相关机制。采用MTT比色法测定酯蟾毒配基对4种肝癌细胞的体外生长抑制作用,划痕实验和Transwell实验用来评估酯蟾毒配基对MHCC-97H细胞的迁移和侵袭能力,采用Western blot实验检测经不同浓度酯蟾毒配基处理后, MHCC-97H细胞内迁移侵袭相关蛋白的表达。结果表明,酯蟾毒配基能明显抑制肝癌细胞的体外增殖能力,其对MHCC-97H、HepG2、SK-Hep-1、Huh-7细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC₅₀)值分别为0.55±0.06、2.83±0.24、5.25±0.49、14.89±2.28μmol·L^-1;酯蟾毒配基还能显著抑制MHCC-97H细胞的迁移和侵袭能力,且具有显著的浓度依赖性。MHCC-97H细胞中的整合素α2 (integrin α2)、整合素α6 (integrin α6)、整合素β1 (integrin β1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2 (mat...     

蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对TGF-β1表达的影响

目的研究蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌的疗效及细胞凋亡的作用和机理。方法建立裸鼠人胰腺癌模型,随机分为对照组(NS)、5-氟尿嘧啶组(5-Fu)、蟾毒灵低剂量组(BuL)、蟾毒灵高剂量组(BuH)。分别腹腔注射生理盐水NS,20ml/kg、5-Fu24mg/kg、Bu1mg/kg、Bu1·5mg/kg。用药后第7天处死,计算肿瘤生长抑制率;TUNEL法检测瘤体凋亡指数;免疫组化S-P法检测P38、TGF-β1的表达。结果治疗后与NS组相比,各组瘤体体积均显著缩小(P<0·05)。其中Bu高剂量组瘤体体积明显相似文献   

蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

摘要目的：研究蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其在膀胱癌中的抗肿瘤机制。方法：采用MTT法测定蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测蟾毒灵对癌细胞凋亡和细胞周期的影响;RT—PCR法检测癌细胞周期蛋白D1（CyclinDl）基因表达情况。结果：蟾毒灵可抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,并呈现出时间和浓度依赖性;蟾毒灵能诱导T24细胞凋亡;20nmol／L浓度的蟾毒灵预处理膀胱癌T24细胞后,与对照组（36．42％）进行比较,可分别在12h（69．76%）和24h（88．14%）显著诱导细胞G0／G1期阻滞（P〈0．05）,且可降低膀胱癌T24细胞的CyclinDlmRNA表达水平。结论：蟾毒灵能显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导T24细胞G0／G1周期阻滞,下调人膀胱癌T24细胞CyclinDl基因表达。     

蟾毒灵对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响

摘 要 目的：探讨蟾毒灵(Bufalin)对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响。方法: 采用四甲基偶氮蓝（MTT）比色法检测Bufalin对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响;倒置显微镜观察各组细胞数目、形态及活性的变化;膜联蛋白（AnnexinV）碘化丙啶（PI）标记法检测其对细胞凋亡的影响。结果: 不同浓度Bufalin对U251细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,在0.001～10 μmol·L^-1浓度范围内呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,Bufalin给药组对U251细胞的凋亡率均显著增高（P<0.01）。结论:Bufalin可显著抑制U251细胞的生长增殖,并在一定范围内呈浓度和时间依赖性,诱导其凋亡。     

HPLC法同时检查华蟾素片中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基限量和测定蟾蜍噻咛的含量

目的 采用HPLC法对华蟾素片中有毒成分蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基进行限量检查;并利用HPLC法测定其有效成分蟾蜍噻咛的含量.方法 限量检查:色谱柱为Agela C18柱,流动相为乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液(50∶50)(用磷酸调节pH为3.2),检测波长为296nm.含量测定:色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为乙腈-水(10∶90),检测波长为226nm.结果 在与蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基对照品色谱峰相同的保留时间处,5批样品出现的色谱峰面积之和小于对照品峰面积之和.蟾蜍噻咛在0.1045～1.0448μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9998;平均回收率为98.9％,RSD=1.6％;每片含量不得少于0.15mg.结论 方法快速、准确、重复性好,可用于华蟾素片质量标准的控制.     

静脉注射蟾毒它灵和华蟾毒它灵后大鼠胆汁中代谢产物的UPLC-UV-MS法分析

建立了超高效液相色谱-紫外分光光度-质谱(UPLC-UV-MS)法研究蟾毒它灵和华蟾毒它灵静脉给药后大鼠胆汁中的代谢产物.UPLC的高分辨率能够基线分离胆汁中的原药和代谢物,UV光谱图揭示了各种化合物量的关系,MS进一步对代谢物进行结构表征.结果显示,大鼠胆汁中原药的含量小于5%,主要代谢物是去乙酰基并羟基化蟾毒它灵和去乙酰基华蟾毒它灵.表明蟾毒它灵在大鼠体内代谢途径主要是水解并羟基化,华蟾毒它灵主要是水解反应.     

蟾酥中蟾毒配基类化合物的抗肿瘤研究进展

蟾酥为我国名贵中药,研究发现,其所含的蟾毒配基类化合物对白血病、结肠癌、肝癌、胰腺癌等恶性肿瘤,有明显抗肿瘤作用,且毒副作用较小。目前,蟾毒配基类化合物在肿瘤治疗中有较好的发展前景。笔者对其治疗肿瘤的机理进行综述。     

蟾毒灵通过抑制乏氧状态下的乳酸生成调节M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药

目的 探讨蟾毒灵(Bu)抑制乏氧状态下乳酸生成调节M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药的作用。方法 (1)将HCT116细胞分为常氧组(HCT116_N)、乏氧组(HCT116_H)和乏氧+BU组(HCT116_H+BU),常氧组给予RPMI1640培养基进行培养,乏氧组给予含200μmol·L^-1 CoCl₂的RPMI1640培养基进行培养,乏氧+BU组给予含25 nmol·L^-1 BU的RPMI1640培养基(含200μmol·L^-1 CoCl₂)进行培养。(2)用佛波酯(200 ng·mL^-1)将THP-1诱导48 h后成为M0巨噬细胞;将M0巨噬细胞分为空白组(M0)、常氧对照组(HCT116_N-Mφ)、乏氧模型组(HCT116_H-Mφ)、乏氧+乳酸抑制剂(Lactate inhibitor)实验组(HCT116_H+Lactat...     

反相高效液相色谱法测定利咽灵气雾剂中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基的含量

目的建立同时测定利咽灵气雾剂中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基含量的方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱Agilent ZORBAX-C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（55∶45）（磷酸调pH 3.2）,流速为0.8 mL.min-1,柱温：30℃,检测波长为296 nm。结果脂蟾毒配基和华蟾酥毒基分别在5.15-103.00μg.mL-1（r=0.999 4）和2.70-54.00μg.mL-1（r=0.999 8）均有良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.7%、99.0%;RSD分别为1.36%、1.92%。结论本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

二甲双胍抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及其机制

目的 体外实验研究二甲双胍(Met)对前列腺癌DU145增殖、迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法 0、5、20、50 mmol·L^-1 Met处理细胞后,CCK8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR和Western Blot实验在mRNA和蛋白水平检测人抗原R(HuR)的表达变化;分别过表达和敲低HuR后,用上述相同实验方法检测DU145的增殖、迁移、侵袭的能力;Western Blot法检测Met处理,过表达HuR或敲低HuR后对AKT/mTOR通路的影响。结果 Met处理细胞后,DU145的增殖、迁移、侵袭能力降低,并呈现出浓度依赖性,同时在mRNA和蛋白水平降低了HuR的表达;敲低HuR对细胞增殖、迁移、侵袭有一定抑制作用,而过表达HuR对细胞则有相反的作用;Met和低表达HuR组抑制了细胞中AKT、mTOR的磷酸化,而过表达HuR则促进了AKT、mTOR的磷酸化。结论 Met可抑制前列腺癌细胞DU145的增殖、迁移、侵袭;其作用机制可能是Met通过降低HuR表达进而抑制AKT/mTOR通路的异常激活,从而抑制...     

蟾皮中蟾毒配基类成分的分离与鉴定

目的研究中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizansCantor)皮中的蟾毒配基类成分。方法利用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱、重结晶等手段分离纯化蟾皮中的蟾毒配基类成分,根据化合物的理化性质和各种波谱学数据鉴定其化学结构。结果分离得到11个蟾毒配基类化合物,分别鉴定为脂蟾毒配基(resibufogenin,1)、华蟾毒精(cinobufagin,2)、蟾毒灵(bufalin,3)、远华蟾毒精(telocinobufagin,4)、蟾毒它灵(bufotalin,5)、去乙酰华蟾毒它灵(desace-tylcinobufotalin,6)、嚏根草苷元(hellebrigenin,7)、沙蟾毒精(arenobufagin,8)、日蟾毒它灵(gam-abufotalin,9)、11β-羟基脂蟾毒配基(11β-hydroxylresibufogenin,10)、华蟾毒它灵(cinobufotalin,11)。结论化合物10和11为首次从中华大蟾蜍皮中分离得到。     

HPLC法测定蟾皮中蟾毒配基类成分的含量

目的用HPLC法测定蟾皮中蟾蜍灵、脂蟾毒配基、华蟾蜍精等成分的含量。方法样品经乙醇室温浸渍提取,采用HPLC法测定。色谱柱为DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(体积比为4∶1∶5),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为296 nm,柱温为40℃。结果蟾蜍灵、脂蟾毒配基和华蟾蜍精分别在0.0848~0.5088、0.0884~0.5304和0.2000~1.2000μg内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数r分别为0.9999、0.9992和1.0000。蟾蜍灵、脂蟾毒配基和华蟾蜍精的平均回收率分别为99.3%、99.6%和99.0%,RSD分别为0.5%、0.2%和0.6%(n=9)。结论HPLC法可用于蟾皮中蟾蜍灵、脂蟾毒配基和华蟾蜍精的含量测定。     

烟管头草水提物对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:研究烟管头草水提物(AECC)对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移与侵袭的影响.方法:将细胞分为对照组和AECC不同质量浓度组(5、10、20、40、80μg/L),加入相应药物或培养基培养不同时间(24、48、72 h)后,检测细胞存活率.将细胞分为对照组和AECC低、中、高质量浓度组(20、40、80μg/L),同...     

HPLC法测定鹤蟾胶囊中脂蟾毒配基的含量

目的：采用HPLC法测定鹤蟾胶囊中干蟾皮的有效成分脂蟾毒配基的含量,以控制该制剂的质量。方法：色谱柱：0DS柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相：甲醇-水（3：2）,流速：1．0ml·min^-1,检测波长：298nm。结果：脂蟾毒配基的线性范围为0．1032～1．0320μg,加样回收率在95％-105％之间。结论：方法简便,灵敏,可用于制剂的质量控制。