二苯乙烯苷对缺糖缺氧致海马神经元凋亡的影响*

目的观察中药何首乌有效成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydrox-ystilbene-2-O-β-D-glucoside,简称二苯乙烯苷,TSG)对缺糖、缺氧诱导的大鼠海马神经元细胞凋亡的影响.方法采用新生Wistar大鼠进行海马神经元细胞的原代培养,用连二亚硫酸钠合并无糖培养基处理细胞建立体外缺糖、缺氧模型,用酶标仪测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,TUNEL法检测细胞凋亡,并观察TSG对缺糖、缺氧诱导的细胞凋亡的拮抗作用.结果模型组与对照组相比,LDH漏出率明显升高、出现了凋亡细胞,胞核致密并有凋亡小体产生.与模型组相比,TSG 10,50和100μmol·L-1能够明显抑制LDH的漏出,降低神经细胞的凋亡率,凋亡细胞数量、面积及灰度均下降.结论TSG可以抑制缺糖、缺氧诱导的神经元细胞凋亡,对缺血性脑病的治疗具有一定的应用前景.     

高糖诱导HT-22小鼠海马神经元代谢记忆细胞模型的构建及影响

目的 体外构建高糖诱导HT-22小鼠海马神经元“代谢记忆”细胞模型,探究“代谢记忆”对HT-22细胞凋亡和组蛋白乙酰化的影响。方法 以高糖培养基(葡萄糖浓度为55 mmol/L)和常规糖培养基(葡萄糖浓度为25 mmol/L)培养HT-22细胞,分为常糖组(NG 4、6、8组,25 mmol/L葡萄糖分别培养4、6、8 d),高糖组(HG 4、6、8组,高糖培养4、6、8 d),代谢记忆组(HG2NG2、HG2NG4、HG2NG6、HG4NG2、HG4NG4组,即高糖2 d转25 mmol/L葡萄糖培养2、4或6 d,高糖4 d转25 mmol/L葡萄糖培养2 d或4 d)。CCK-8法检测细胞活力变化,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,筛选出建立“代谢记忆”模型的最佳作用时间。后续将细胞分为NG4组、NG8组、HG4组、HG4NG4组和HG8组,光学显微镜观察各组细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测去乙酰化酶(HDAC)和组蛋白乙酰转移酶(HAT)活性;Western blot检测组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、B淋巴细胞瘤-2(...     

吗啡预处理对脑缺血-再灌注后神经元凋亡、Bcl-2及Bax表达的影响

目的探讨吗啡预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤后神经元凋亡、Bel-2及Bax蛋白表达的影响。方法 Wistar大鼠32只随机分成假手术组、模型组、吗啡1mg·kg~(-1)组、吗啡7mg·kg~(-1)组,各8只。四动脉阻断法建立脑缺血模型。缺血前60min腹腔注射给药,假手术组和模型组给予生理盐水。脑缺血8min、再灌注24h后取大鼠的脑组织,HE染色观察海马区脑组织病理学改变、TUNEL法检测神经元凋亡、免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达。结果吗啡预处理使海马神经元病理改变减轻、凋亡细胞数及Bax表达减少(P<0.01),而Bcl-2表达增加(P<0.01);且吗啡7mg·kg~(-1)组减少神经元凋亡及改善神经元病理变化的作用更为显著(P<0.01)。结论吗啡预处理可减少缺血-再灌注损伤后神经元凋亡,其作用机制可能与其影响Bcl-2和Bax蛋白表达有关。吗啡7mg·kg~(-1)预处理的保护作用更为显著。     

复方二精灵多糖对谷氨酸诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨中药复方二精灵多糖(EJL)预防阿尔茨海默病的机制。方法实验分为正常对照组、模型(100μmol.L-1谷氨酸诱导)组、阳性对照组(50μmol.L-1多奈哌齐)及EJL实验组(0.5,1.0,2.0及3.0g.L-1)。体外培养9d的海马神经元先用各药物预处理一定时间后,加入谷氨酸。采用MTT法、Hoechst 33258荧光染色、流式细胞术和Western蛋白质印迹法等方法检测细胞凋亡。结果MTT检测发现,随着EJL浓度的增加,细胞的存活率也增加;与模型组〔(59.6±4.6)%〕比较,EJL2.0及3.0g.L-1组细胞存活率明显升高〔(82.8±2.8)%和(89.4±4.1)%;n=3,P<0.05〕。荧光染色观察形态学变化发现,EJL预处理组凋亡细胞明显减少。FITC-Annexin Ⅴ和PI双染,在直方图中可以发现,模型组的凋亡率为32.33%,EJL预处理组则分别为24.33%,22.01%及12.12%。Western蛋白质印迹法结果显示,与模型组比,EJL2.0g.L-1预处理可以显著提高Bcl-2蛋白表达量,减少Bax蛋白表达量。结论EJL对海马神经元有一定的保护作用。     

糖尿病结肠动力障碍近端结肠平滑肌细胞相关凋亡基因表达的研究

目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍近端结肠平滑肌细胞的凋亡变化。方法:雄性SD大鼠36只随机分为正常对照6周组、正常对照10周组、DM6周组和DM10周组,每组9只。检测空腹血糖(FBG)、胃肠推进率、血清胰岛素(FINS),HE染色观察近端结肠平滑肌的变化,应用荧光实时定量PCR(Realtime-qPCR)检测大鼠近端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2及caspase-3的mRNA表达情况。结果:(1)DM组大鼠较同时间点正常对照组大鼠空腹血糖增高,胃肠推进率及血清胰岛素降低,近端结肠平滑肌变薄,bax及caspase-3的mRNA表达增强,bcl-2的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)DM10周组大鼠较DM6周组大鼠的空腹血糖增高,胃肠推进率及血清胰岛素降低,近端结肠平滑肌变薄,bax及caspase-3的mRNA表达增强,bcl-2的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DM结肠动力障碍与近端结肠平滑肌细胞的凋亡密切相关,且细胞凋亡随病程发展而加重。     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的作用

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3表达的影响。方法取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h,再复氧复糖。各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、48、72 h和120 h采用免疫组织化学染色法和Western blot检测caspase-3蛋白的表达,采用原位杂交检测海马神经元caspase-3 mRNA的表达。结果免疫组化结果显示:与正常对照组相比,除0 h和0.5h之外,缺氧缺糖/复氧复糖组各时间点海马caspase-3阳性神经元数目占神经元总数的百分率均明显增多(P<0.05),于24 h达到高峰。黄芪注射液溶剂对照组以上指标的变化趋势与缺氧缺糖/复氧复糖组相一致。黄芪注射液组除0 h和0.5 h之外,各时间点以上指标均比缺氧缺糖/复氧复糖组减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示:除0 h和0.5 h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3蛋白的平均灰度值均较正常对照组明显增加(P<0.05),24 h最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3蛋白的平均灰度值无变化(P>0.05),而黄芪注射液组除0 h和0.5 h外,在各个时间点caspase-3蛋白的平均灰度值明显降低(P<0.05)。原位杂交检测结果显示:caspase-3 mRNA阳性神经元形态、数目占神经元总数的百分率的变化趋势与caspase-3蛋白的变化趋势完全一致。结论黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3的表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡。     

黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3表达的影响。方法取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为7组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组(模型组)、黄芪注射液溶剂对照组、黄芪注射液组、DMSO组(二甲基亚砜组,即SP600125溶剂组)、SP600125组、SP600125+黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖。各组于复氧复糖后6、24和72 h采用Western blot方法和RT-PCR方法分别检测caspase-3蛋白和caspase-3 mRNA的表达。结果 Western blot检测显示:各时间点模型组海马神经元caspase-3蛋白平均灰度值均较正常对照组明显增加(P<0.05),复氧复糖24 h平均灰度值最高;与模型组相比,黄芪注射液溶剂对照组和DMSO组caspase-3蛋白平均灰度值无变化(P>0.05),而黄芪注射液组、SP600125组和SP600125+黄芪注射液组caspase-3蛋白平均灰度值均明显降低(P<0.05);与黄芪注射液组相比,SP600125组和SP600125+黄芪注射液组caspase-3蛋白平均灰度值无变化(P>0.05)。RT-PCR结果显示:各时间点模型组海马神经元caspase-3 mRNA平均光密度值均较正常对照组明显增加(P<0.05),复氧复糖24h平均光密度值最高;与模型组相比,黄芪注射液溶剂对照组和DMSO组caspase-3 mRNA平均光密度值无变化(P>0.05),而黄芪注射液组、SP600125组和SP600125+黄芪注射液组caspase-3 mRNA平均光密度值明显降低(P<0.05);与黄芪注射液组相比,SP600125+黄芪注射液组和SP600125组caspase-3 mRNA平均光密度值无变化(P>0.05)。结论黄芪注射液可通过抑制JNK3信号通路而减少caspase-3的表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡。     

长苞凹舌兰提取物对亚急性衰老小鼠学习记忆和凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究长苞凹舌兰提取物(CE)能否改善衰老小鼠的学习记忆能力,及其与神经元凋亡的关系。方法ipD-半乳糖120mg·kg-1·d-1和亚硝酸钠90mg·kg-1·d-1连续60d建立衰老模型,从d47开始igCE2.5,5,10mg·kg-1·d-1,连续14d。跳台实验检测小鼠的学习记忆能力;免疫组化染色测定海马内Bcl-2,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cas-pase-3)和Bax凋亡相关蛋白的阳性细胞数,并用图像分析系统进行灰度扫描。结果CE明显改善衰老小鼠的学习记忆能力,跳台实验的潜伏期明显延长,错误次数显著减少。衰老小鼠脑中Bcl-2阳性神经元减少,caspase-3和Bax阳性神经元增多。CE可抑制这些凋亡相关蛋白的阳性细胞数改变,从而可能阻断凋亡级联反应的发生。结论CE可增强衰老小鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制神经元凋亡有关。     

Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的探讨6价铬(Cr(Ⅵ))在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr(Ⅵ)24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;化学比色法检测SOD,CAT活性与GSH含量;RT-PCR检测p53,caspase3mRNA表达水平;免疫组化检测p53蛋白含量。结果Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加(r=0.997),6~12μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组与对照组比差异有显著性(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带;SOD与CAT活性和GSH含量均下降,Cr(Ⅵ)处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组(P<0.05);3~9μmol·L-1Cr(Ⅵ)处理组细胞p53mRNA,caspase3mRNA,p53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关(r分别为-0.952和-0.885);p53mRNA表达与caspase3mRNA表达正相关(r=0.890);p53蛋白表达与GSH含量呈负相关(r=-0.929)。结论氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡中具有重要作用;在低浓度水平Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡具有p53和caspase3依赖性,但在较高Cr(Ⅵ)处理水平,不排除非p53及caspase3途径的存在。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

大黄素改善高糖条件中人肾小球血管内皮细胞炎症、氧化应激及凋亡作用的研究

目的 研究大黄素对高糖条件中的人肾小球血管内皮细胞(HRGEC)炎症、凋亡和氧化应激水平的影响及其可能的作用机制。方法 将体外培养的HRGEC随机分为对照组、模型组和低、中、高浓度实验组。对照组给予5 mmol·L^-1葡萄糖处置;模型组给予30 mmol·L^-1葡萄糖处置;低、中、高浓度实验组分别给予30 mmol·L^-1葡萄糖+5、10、20μmol·L^-1大黄素处置。用CCK-8法检测细胞存活率,用试剂盒检测氧化应激指标和炎症因子的水平,用蛋白质印迹法检测凋亡及相关通路蛋白的表达水平。结果 中、高浓度实验组和模型组、对照组的HRGEC存活率分别为(83.47±1.71)%、(95.61±2.18)%、(65.83±1.82)%和(100.00±2.34)%,丙二醛分别为(8.54±0.96)、(5.84±0.67)、(15.58±1.67)和(4.32±0.84)μmol·g^-1,活性氧分别为(30.39±3.43)、(24.64±2.15)、(58.48±4.47)和(1...     

紫草素对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的抑制作用及机制

目的 研究紫草素抑制荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的作用及其机制。方法 通过皮下注射肝癌细胞制备荷肝癌裸小鼠模型;设模型组,紫草素低、中、高剂量组和顺铂组,每组12只,分别隔天一次给予0.9%氯化钠溶液,紫草素0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg和顺铂2 mg/kg,共给药6次。观察动物生存状态和移植瘤组织生长状态,称量瘤重并计算抑瘤率;HE染色法进行肿瘤组织形态检查,TUNEL法进行细胞凋亡检查,免疫组织化学法观察肿瘤组织凋亡相关蛋白表达。结果 与模型组比较,紫草素各组裸小鼠食欲和精神状态都明显好转,瘤体积小、活动度低、硬度低,移植瘤组织出现片状坏死病变、移植瘤组织细胞凋亡数量明显增多,凋亡指数显著升高［(22.93±5.40)、(39.86±8.25)、(60.74±9.61)比(2.64±1.09),P＜0.05］;瘤体质量显著减轻［(1.32±0.21) g、(1.18±0.17) g、(0.83±0.12) g比(1.69±0.14) g,P＜0.05］、抑瘤率显著升高［(21.89±3.75)%、(30.18±4.92)%、(50.89±6.43)%比(0.00±0.00)%,P＜0.01］;肿瘤组织中凋亡相关蛋白［半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase?3)、bcl?2相关X蛋白质(Bax、bcl?2)］中的caspase?3表达显著上调［(0.16±0.05)、(0.21±0.04)、(0.27±0.06)比(0.05±0.02),P＜0.05］、Bax表达显著上调［(0.54±0.10)、(0.63±0.15)、(0.81±0.21)比(0.29±0.05),P＜0.01］,其中紫草素中、高剂量组bcl?2显著下调［(0.37±0.05)、(0.30±0.05)比(0.50±0.07),P＜0.05］,Bax/bcl?2比值显著升高［(1.17±0.25)、(1.70±0.39)、(2.71±0.68)比(0.59±0.20),P＜0.05］。结论 紫草素具有抑制荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的作用,可能与其调节凋亡相关蛋白表达而促进细胞凋亡、诱导肿瘤组织坏死有关。     

Notch1干扰调控肺血管内皮细胞凋亡作用机制研究

目的探讨缺口受体1(Notch1)干扰调控肺血管内皮细胞凋亡的作用机制。方法 2022年1-12月利用Notch1干扰siRNA转染人肺微血管内皮细胞(HPMEC);利用Cell Counting Kit-8(CCK8)检测各组细胞活力;采用流式细胞术测定活性氧(ROS)水平;采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;采用Western blot检测Notch1 siRNA对HPMEC细胞中Notch1、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果与空白对照组、siNC组比较, si-Notch1组HPMEC细胞中Notch1 mRNA的表达水平均显著降低, 差异均有统计学意义(t=11.25、9.47, 均P < 0.05)。脂多糖(LPS)+Notch1 siRNA组HPMEC细胞OD值和Bcl-2蛋白表达水平显著高于LPS组和LPS+siRNA对照组(t=11.26、11.68, 均P < 0.05), 而ROS生成量、细胞的凋亡率(t=11.68、11.87, 均P < 0.05), Notch1、Caspase-3蛋白表达水平...     

三七总皂苷对缺氧诱导下视网膜神经节细胞凋亡的作用机制研究

目的 探究三七总皂苷对缺氧状态下视网膜神经节细胞凋亡的作用机制.方法 将细胞分为5组:对照组(细胞未处理组)、模型组(400μmol·L-1氯化钴作用24 h建立缺氧模型)和低、中、高3个剂量实验组(2,10,50μg·mL-1三七总皂苷预处理6 h后,加入400μmol·L-1氯化钴作用24 h).实时荧光定量聚合酶...     

沉默hnRNP A2/B1基因后通过Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡

目的 探索沉默核内不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）基因后对宫颈癌CaSki细胞的增殖、凋亡的 影响及其相关作用机制。方法 建立稳定沉默 hnRNP A2/B1 的 CaSki 细胞株,分为未沉默 hnRNP A2/B1 的空白组 （CaSki 组）、转染阴性序列的阴性对照组（CaSki-NC 组）、转染阳性 hnRNP A2/B1 干扰序列的实验组（CaSki-shRNA 组）。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）对各组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达 水平进行验证,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖能力,细胞克隆实验检测各组细胞克隆形成能力,流式细 胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化。结果 与CaSki组、 CaSki-NC相比较,CaSki-shRNA组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达水平均明显减低,细胞的增殖能力在48 h 降低,克隆形成能力下降,凋亡率增加,Bcl-2蛋白的表达减低,Bax表达升高（P＜0.01）,而CaSki组与CaSki-NC组之 间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 沉默hnRNP A2/B1基因后能抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖能力,且可能通过 Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡。     

霞草苷对人结肠癌HT－29细胞生长和凋亡的影响

目的：观察霞草苷对人结肠癌HT－29细胞凋亡的影响及其可能机制。方法用MTT法和流式细胞技术检测浓度为5,10,20,40μmol· L－1霞草苷对HT－29细胞生长、凋亡的影响;用实时荧光定量RT－PCR检测细胞Caspase－3、Bax的mRNA水平。结果霞草苷对HT－29细胞的生长有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率明显增高。 Caspase－3和Bax的mRNA表达量逐渐增加,呈明显的浓度依赖性。结论霞草苷能诱导体外培养的人结肠癌HT－29细胞凋亡,上调Bax表达,活化Caspase－3可能是霞草苷诱导HT－29细胞凋亡的机制之一。     

白消安对U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响

目的探究白消安对 U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响。方法培养 U87胶质瘤干细胞,分为四组, A组加入 200 μL含 5%胎牛血清的 DMEM/F12培养基, B、C、D三组分别加入 200 μL含 20、50、100 μmol/L白消安的 DMEM/F12培养基。比较四组细胞增殖情况［四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)］、细胞凋亡情况［即 B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)表达水平］,以及细胞周期。结果培养 24 h后,四组 U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义( P＞0.05);培养 48 h、72 h后, B、C、D组 U87胶质瘤干细胞吸光度低于 A组( P＜0.05);培养 48 h、72 h后, B、C、D组 U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义( P＞0.05)。 C组 U87胶质瘤干细胞 Bax、Caspase-3、 Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于 A、B组,比较差异有统计学意义［吸光度值: CBax(0.38±0.01)比 ABax(0.46±0.04)、 BBax(0.41±0.01); CCaspase-3(0.45±0.02)比 ACaspase-3(0.54±0.01)、 BCaspase-3(0.47±0.02); CBax/Bcl-2(1.19±0.04)比 ABax/Bcl-2(1.36±0.01)、 BBax/Bcl-2(1.22±0.04);阳性细胞表达率: CBax(47.53±1.34)%比 ABax(39.81±4.02)%、BBax(39.51±1.37)%;CCaspase-3(65.17±2.34)%比 ACaspase-3(54.42±1.34)%、BCaspase-3(49.16±2.31)%;CBax/Bcl-2(60.24±4.10)%比 ABax/Bcl-2(35.47±1.20)%、BBax/Bcl-2(37.41±4.12)%;P＜0.05］; D组 U87胶质瘤干细胞 Caspase-3、Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于 A、B组,比较差异有统计学意义［吸光度值: DBax(0.37±0.01)比 ABax(0.46±0.04)、 BBax(0.41±0.01); DCaspase-3(0.28±0.01)比 ACaspase-3(0.54±0.01)、 BCaspase-3(0.47±0.02); DBax/Bcl-2(0.97±0.02)比 ABax/Bcl-2(1.36±0.01)、 BBax/Bcl-2(1.22±0.04);阳性细胞表达率: DCaspase-3(68.06±1.09)%比 ACaspase-3(54.42±1.34)%、BCaspase-3(49.16±2.31)%;DBax/Bcl-2(65.10±2.15)%比 ABax/Bcl-2(35.47±1.20)%、BBax/Bcl-2(37.41±4.12)%;P＜0.05］。 A组、 D组处于 G1期细胞分别占8.20%、3.22%,处于 G2 /M期细胞分别占 16.07%、12.18%,两组比较差异有统计学意义( P＜0.05); A组、 D组处于 G0/G1期细胞分别占 52.27%、58.85%,处于 S期细胞分别占 23.36%、35.75%,两组比较差异无统计学意义( P＞0.05)。结论白消安可抑制 U87胶质瘤干细胞的增殖,促进其凋亡,并且呈现一定量效关系;机制可能与白消安上调 Bcl-2、Bax、Caspase-3表达有关。     

内皮抑素重组腺相关病毒对宫颈癌裸鼠Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨内皮抑素重组腺相关病毒(rAAV-ES)对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法:采用左腋皮下接种法,建立人宫颈癌裸鼠模型共60只。造模1周后,随机分为rAAV-ES实验组、空病毒组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组20只。观察裸鼠皮下移植瘤的生长情况,计算肿瘤体积。治疗3周后颈椎脱臼处死裸鼠,完整剥离肿瘤,称瘤质量并计算抑瘤率。HE染色观察肿瘤细胞形态,免疫组织化学技术检测各组肿瘤组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况。结果:成功建立宫颈癌裸鼠模型。实验组治疗后肿瘤生长速度较对照组和空病毒组明显减慢(P<0.01),抑瘤率为62.55%。Bcl-2在实验组的阳性率低于空病毒组和PBS对照组(均P<0.01);各组Bax阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);Caspase-3在实验组的阳性率高于空病毒组和PBS对照组(均P<0.01)。Bcl-2与Caspase-3的表达呈负相关(rs=-0.653,P<0.01)。结论:rAAV-ES可抑制宫颈癌移植瘤的生长,其机制可能与通过下调Bcl-2蛋白、激活下游的Caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

穿心莲内酯对食管癌细胞的放射增敏作用

目的研究穿心莲内酯对食管癌细胞的放射增敏作用。方法培养食管癌 ECA?109细胞,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测穿心莲内酯对细胞生长的抑制;克隆集落形成实验观察穿心莲内酯的放射增敏作用;通过免疫荧光实验观察促凋亡蛋白 Bax的表达情况;流式细胞仪检测细胞的凋亡和周期情况;蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞内核因子 κB(NF?κB)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(caspase3)Bax,B淋巴细胞瘤 ?2基因(Bcl?2)的表达;磷酸化组蛋白 H2AX(γ? H2AX)焦点形成检,测 DNA分钟损伤情况。细胞划痕实验,检测细胞增殖、迁移的情况。结果穿心莲内酯抑制食管癌 ECA? 109细胞的生长,并且有明显的时间和剂量依赖性;通过单击靶模型拟合曲线,可见低浓度穿心莲内酯预处理 6h,相对比单纯照射组可以增加 ECA?109细胞的放射敏感性(t＝4.59,P＝0.02)放射增敏比为 1.28;与单纯照射组(26.5±2.2)%相比,加入穿心莲内酯联合 X射线照射组中的细胞凋亡率(32.5±0.9)%明显增加,(P＜0.05);穿心莲内酯作用于食管癌细胞,可以使凋亡相关蛋白 caspase3,Bax的表达升高,并且呈明显的量效关系, NF?κB表达趋势与 Bcl?2一致;相对于单纯照射组,穿心莲内酯与 X射线联合作用,能够增加双链 DNA断裂(DSB)数目;药物联合放射可以明显影响食管癌细胞的增殖迁移能力。结论穿心莲内酯能够提高食管癌细胞的放射敏感性,机制可能与其增加食管癌细胞的凋亡率和调节细胞内的 NF?κB的表达有关。