JAK/STAT途径调节瘦素诱导的肝星状细胞Ⅰ型胶原基因的表达

目的研究瘦素对肝星状细胞(HSC)α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达和蛋白合成的影响,探讨Janus激酶/信号传导及活化转录因子(JAK/STAT)信号传导通路在瘦素诱导的HSC胶原基因表达过程中的作用。方法采用RT-PCR法、ELISA法和Western blot法分别检测不同浓度的瘦素对人肝星状细胞株LX-2α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达、蛋白合成以及JAK1、STAT3磷酸化状态的影响;采用Western blot法和RT-PCR法分别观察JAK1抑制剂AG490对瘦素诱导的JAK1磷酸化和α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达的影响;采用Western blot法分别观察AG490、LX-2转染STAT3反义寡核苷酸(STAT3-ASON)对瘦素诱导的STAT3磷酸化状态的影响;应用RT-PCR法检测LX-2转染STAT3-ASON对瘦素诱导的α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达的影响。结果瘦素增加LX-2α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达和蛋白合成,呈剂量效应关系,当瘦素浓度为80μg·L-1时达到最大值;瘦素促进JAK1、STAT3磷酸化,呈时间效应关系;AG490完全阻断瘦素诱导的JAK1、STAT3磷酸化和α1(Ⅰ)型胶原mRNA的表达;LX-2转染STAT3-ASON阻断瘦素诱导的STAT3磷酸化和α1(Ⅰ)型胶原mRNA的表达。结论瘦素通过增加HSCα1(Ⅰ)型胶原mRNA表达和蛋白合成而在肝纤维化发生发展过程中发挥重要的作用,JAK/STAT信号传导通路参与并调节该过程,AG490和LX-2转染STAT3-ASON可有效阻滞此传导途径。在人HSC中,活化的JAK1和STAT3信号可作为肝纤维化治疗新的分子靶点。     

肝星状细胞激活与增殖相关信号转导通路在肝纤维化中的作用及机制

肝星状细胞激活和增殖在肝纤维化的发生过程中占有重要的地位。控制肝星状细胞的激活和增殖并逆肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。本综述以肝星状细胞激活与增殖相关信号转导通路为中心,探讨其在肝纤维化发病作用方面的作用机制。通过干预细胞外信号传导通路,为研究肝纤维化的发病机制和药物治疗提供新的途径。     

GATA6抑制肝星状细胞活化在胆道闭锁肝纤维化中的研究进展

摘要：胆道闭锁（BA）以肝内外胆管进行性炎性阻塞和肝纤维化为特征,是引起婴幼儿梗阻性黄疸的常见原因之一。肝门空肠吻合术（Kasai术）是BA患儿的首选治疗手段。及时有效解除胆管炎性阻塞、遏制肝纤维化是延长或实现BA患儿自体肝生存的关键。GATA结合蛋白6（GATA6）具有调节转录活性的功能,可通过调控细胞增殖分化、协同上调铁调素的表达以及参与丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）依赖的信号通路等途径抑制肝星状细胞（HSCs）的活化,促进HSCs衰老,减轻肝纤维化,在BA肝损伤后肝修复过程中发挥一定的作用。该文就GATA6的功能特点、作用途径及其与BA肝纤维化之间的关系进行综述。     

酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞(HSC)活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠肝星状细胞活化中的作用

目的：探讨酸敏感离子通道1a（ASIC1a）在酸诱导的大鼠肝星状细胞活化中的作用。方法：体外培养肝星状细胞株（HSC-T6）经处理后,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞毒性变化,RT—PCR检测ASIC1a mRNA表达,Western Blot和RT—PCR分别检测Calpain、Calcineurin蛋白和mRNA表达变化,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的变化。结果：细胞酸化处理后ASIC1a含量明显上升;随着胞外pH值的下降,LDH释放量逐渐升高,ASIC1a阻滞剂可抑制酸化诱导的肝星状细胞LDH的释放量;酸化组肝星状细胞Calpain、Calcineurin mRNA和蛋白表达水平均明显增高,ASIC1a阻断剂组Calpain、Calcineurin mRNA和蛋白表达水平较酸化组明显降低;与酸化组相比,阻断ASIC1a可以降低HSC—T6中α—SMA的表达。结论：胞外酸化环境下可诱导肝星状细胞活化,阻断ASIC1a能明显降低酸化诱导的细胞活化。     

大麻素受体在肝星状细胞活化中的作用及姜黄素干预效应

目的探究大麻素受体在肝星状细胞(HSCs)活化中的作用及姜黄素的干预效应,为阐明肝纤维化发生发展机理及姜黄素抗肝纤维化机制提供依据。方法 MTT法检测CBR1激动剂NADA与拮抗剂AM251,CBR2激动剂JWH015与拮抗剂AM630对HSCs增殖的影响;Western blot实验检测AM251对HSCs中ERK、JNK、p38蛋白表达及磷酸化水平的影响;Western bolt与细胞免疫荧光检测了姜黄素对HSCs中两种类型大麻素受体CBR1与CBR2蛋白表达的影响;Western bolt检测在姜黄素对CBR1激动剂与拮抗剂的刺激下HSCs产生的细胞外基质(ECM)成分α1(I)collagen和Fibronectin的影响。结果激动CBR1可促进HSCs的增殖,相反拮抗CBR1后则可以抑制HSCs的增殖(P<0.05);而激动CBR2也可抑制HSCs的增殖(P<0.05),但抑制CBR2对HSCs的增殖没有明显的影响(P>0.05)。CBR1拮抗剂AM251能够明显抑制ERK与JNK的磷酸化,并呈剂量依赖性的关系(P<0.05,P<0.01),但对p38蛋白表达的影响较小(P>0.05)。姜黄素可抑制HSCs中CBR1的表达(P<0.05),对CBR2蛋白表达的影响则差异没有统计学意义(P>0.05)。姜黄素可呈剂量依赖性的抑制CBR1激动剂导致的ECM成分表达的上升,并可协同CBR1拮抗剂抑制HSCs表达ECM成分的作用(P<0.05,P<0.01)。结论大麻素受体在HSCs的增殖活化过程中具有重要作用,姜黄素可能通过干预大麻素受体信号通路这一途径达到治疗肝纤维化     

莪术醇对肝星状细胞Rho-ROCK信号通路作用的实验研究

目的：研究莪术醇对肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的作用，以此来分析莪术醇抗肝纤维化的作用机制。方法：用莪术醇孵育HSC-T6细胞48 h后用MTT法检测细胞增殖率，用免疫印迹和RT-PCR检测Rho-ROCK信号通路上关键分子RhoA和ROCK2的表达和含量。结果：RT-PCR检测发现莪术醇高、中、低浓度对Rho-ROCK信号通路中的关键分子RhoA和ROCK2mRNA的表达较模型组有抑制作用，而且这种抑制作用有明显的剂量依赖性，差异有显著性（P<0.05）；WB检测发现莪术醇高、中、低浓度对Rho-ROCK信号通路中的关键分子RhoA和ROCK2的表达较模型组有抑制作用，而且这种抑制作用有明显的剂量依赖性，差异有显著性（P<0.05）。结论：莪术醇可以抑制Rho-ROCK信号通路的活动，达到抗肝纤维化的效果。     

以肝星状细胞为靶标的抗肝纤维化治疗进展

任何病因导致的慢性肝损伤,均可发展为肝纤维化。损伤肝脏的纤维化形成过程中,活化肝星状细胞(HSC)是主要细胞类型,并有重要细胞因子参与。目前治疗都以阻止活化HSC在损伤部位聚集和细胞外基质沉积为目标。该文就以HSC为靶标的抗肝纤维化最新治疗方案作一综述。     

肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控

肝纤维化是对慢性肝损伤的愈合反应,为一个可逆的过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝脏分泌细胞外基质(extra cellular matrixc,ECM)的主要细胞,在肝纤维化的发展机制中占有重要的地位。如何控制HSC的活性并逆转肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。在肝纤维化病程中,一系列细胞因子通过旁分泌和自分泌方式作用于邻近的HSC,影响其增殖、趋化、代谢及凋亡。鉴于Kupffers细胞为细胞因子的主要来源,其在肝纤维化病程中对HSC细胞的活化增殖、凋亡发挥着重要的调控作用。HSC、Kupffers细胞及细胞因子与肝纤维化的发生发展关系极为密切,阐明其关系,有助于以HSC为靶点的肝纤维化方面的研究,现就其关系综述如下。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠肝星状细胞中的瘦素与Ⅰ型胶原水平的影响

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcys-teine,NAC)影响大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖,及其对瘦素与Ⅰ型胶原蛋白分泌的变化。方法:HSC以1×105/mL浓度接种于96孔培养板,每孔100μL,进行以下实验分组:NACⅠ、Ⅱ、Ⅲ组,加入NAC使得各组培养液中NAC浓度分别是10、20、40mmol/L;加生理盐水为对照组。培养48h终止后吸取上清液-20℃冰冻保存,ELISA法检测细胞培养上清液瘦素与Ⅰ型胶原蛋白水平;MTT法观察细胞增殖情况。结果:NACⅢ组平均吸光度低于NACⅠ组和对照组(P<0.05);NACⅡ、Ⅲ组其HSC培养上清液瘦素水平均显著低于对照组(P<0.01);NAC各组Ⅰ型胶原蛋白水平均显著低于对照组(P<0.01)。结论:HSC在NAC作用下增殖减少;瘦素与Ⅰ型胶原蛋白分泌受到抑制,这可能是NAC抗纤维化的机理之一。     

肝星状细胞信号转导机制及可能的抗肝纤维化药物作用新靶点

肝纤维化是肝脏对一系列慢性刺激的损伤修复反应,以细胞外基质的过度沉积为主要特征。近年来,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活以及由此产生的一系列复杂生物学效应在肝纤维化发生、发展过程中所处的重要地位已得到普遍共识。各种损伤刺激通过不同或相同的HSC信号转导途径介导了HSC的激活,并使其转化为肌成纤维细胞,合成大量细胞外基质成分。作用于这些信号或其转导过程的药物正成为防治肝纤维化的策略之一。     

Notch信号通路在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤因素的一种修复反应,持续进展的肝纤维化可导致肝硬化,甚至肝癌。目前研究表明肝纤维化是可逆的。众多信号通路参与肝纤维化的发生发展,其中Notch信号通路在肝纤维化的发病机制中发挥重要作用,本文就Notch信号通路在肝纤维化中的研究进展作一综述。     

肝星状细胞凋亡信号途径及其药物治疗的研究进展

各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活是肝纤维化发生发展的中心环节,促进其凋亡被认为是肝纤维化逆转的始动因素。HSC的凋亡机制十分复杂,调控活化HSC凋亡的信号转导途径研究甚少。目前已知的HSC凋亡信号途径主要包括线粒体途径、死亡受体途径和非死亡受体途径。基于这些信号转导途径,研究出选择性诱导HSC凋亡的药物将成为抗肝纤维化治疗的重要手段。该文将对HSC凋亡信号转导通路的最新进展进行综述,并对目前已知的具有促HSC凋亡作用的药物进行总结分类。     

miRNA参与肝星状细胞活化及慢性肝病发展的作用机制研究进展

微小RNA（microRNA.miRNA）为内源性短小（18～25个核苷酸组成）单链非编码RNA,通过与靶基因mRNA序列3＇末端非翻译区（3＇-UTR）结合抑制蛋白翻译过程或干扰mRNA降低靶蛋白水平,miRNA异常表达影响多种器官重构中细胞增殖及分化.近期研究表明miRNA这一转录后水平的调控分子参与各种慢性肝病发生发展,肝星状细胞的激活是导致早期肝损伤的关键因素,本文将就miRNA在肝星状细胞激活及慢性肝病发展中的作用作一系统综述.     

Precision-cut liver slices as a new model to study toxicity-induced hepatic stellate cell activation in a physiologic milieu.

Hepatic stellate cell (HSC) activation is a key event in the natural process of wound healing as well as in fibrosis development in liver. Current in vitro models for HSC activation contribute significantly to the understanding of HSC biology and fibrogenesis but still fall far short of recapitulating in vivo intercellular functional and anatomic relationships. In addition, when cultured on uncoated plastic, HSC spontaneously activate, which makes HSC activation difficult to regulate or analyze. We have examined whether the use of precision-cut liver slices might overcome these limitations. Liver slices (8 mm diameter, 250 microm thickness) were generated from normal rat liver and incubated for 3 or 16 h with increasing doses of carbon tetrachloride (CCl4). Rat liver slices remained viable during incubation, as shown by minimal enzyme leakage. Expression of markers for HSC activation and the onset of fibrogenesis in the liver slices was studied using real-time PCR and Western blotting. In unstimulated liver slices, mRNA and protein levels of desmin, heat shock protein 47, and alpha B-crystallin remained constant, indicating quiescence of HSC, whereas Krüppel-like factor 6 expression was increased. In contrast, incubation with CCl4 led to a time- and dose-dependent increase in mRNA expression of all markers and an increased alpha B-crystallin protein expression. In conclusion, we have developed a technique to induce activation of quiescent HSC in rat liver slices. This model permits the study of toxicity-induced HSC activation within a physiological milieu, not only in animal but ultimately also in human tissue, and could contribute to the reduction of animal experiments.     

Pirfenidone inhibits carbon tetrachloride- and albumin complex-induced liver fibrosis in rodents by preventing activation of hepatic stellate cells

• 1 Pirfenidone (PFD; 5‐methyl‐1‐phenyl‐2(1H)‐pyridone) is an effective and novel agent with antifibrotic and anti‐inflammatory properties. In the present study, we investigated the antifibrotic effects of PFD on experimental liver fibrosis models in rodents and the possible underlying molecular mechanisms.
• 2 Liver fibrosis was induced by carbon tetrachloride (CCl₄) in BALB/c mice. Pirfenidone (250 mg/kg) and silymarin (50 mg/kg) were given to different groups of rats by gastric gavage for 4 weeks. Pirfenidone significantly attenuated fibrosis severity, as determined by histopathological scores and hydroxyproline levels in liver tissue, by 49.8 and 44.9%, respectively, compared with the CCl₄‐treated group. The antifibrotic effects of PFD were significantly greater than those of silymarin, as indicated by a decrease of 23.5 and 24.8% in histopathological scores and hydroxyproline levels, respectively.
• 3 Liver fibrosis was also induced by albumin antigen–antibody complex in Wistar rats, which were then treated with the same doses of PFD and silymarin for 8 weeks. Pirfenidone significantly reduced the degree of fibrosis compared with CCl₄‐treated rats (by 45.0 and 51.0% as determined by histopathological scores and hydroxyproline levels in liver tissue, respectively). The antifibrotic effects of PFD were comparable to those of silymarin.
• 4 The effects of PFD on the expression of extracellular matrix‐associated genes in human hepatic stellate cells (the LX‐2 cell line) were measured by real‐time quantitative polymerase chain reaction. LX‐2 cells were treated with or without 100 μmol/L or 1 mmol/L PFD for 24 h. Pirfenidone significantly inhibited the expression of a‐smooth muscle actin and Type I collagen in 8 ng/mL transforming growth factor‐β1‐ or 5% fetal bovine serum‐activated LX‐2 cells in a dose‐dependent manner.
• 5 In conclusion, the results of the present study demonstrate that PFD is effective in ameliorating fibrogenesis induced by CCl₄ in mice and by the albumin complex in rats. These effects were mediated mainly via inhibition of the activation of hepatic stellate cells, as well as antifibrotic actions (i.e. inhibition of collagen synthesis) of PFD.

     

肝纤维化中星状细胞促血管生成分子机制的研究

肝纤维化进程中存在明显的病理性血管生成与重构,阻碍了肝纤维化的逆转与恢复。血管生成及其信号调控系统已成为肝纤维化治疗的潜在靶标,血管生成抑制剂在一些实验研究中已显示出较好的抗肝纤维化疗效。肝星状细胞是肝脏中的周细胞,可以表达血管内皮生长因子、血小板衍生生长因子、瘦素、血管生成素-1等多种血管生成因子,多途径地促进病理性血管生成过程。该文对近年来肝星状细胞促进肝纤维化血管生成分子机制的研究作一综述,可以为抗肝纤维化研究提供新的视角,有助于发现新的治疗靶标。