miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的　探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法　（1）分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞。采用荧光定量PCR（qPCR）检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G（PTPRG）的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化。（2）取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组（si-NC组）、PTPRG敲低组（si-PTPRG组）和PTPRG敲低组＋miR-208a干扰组（si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组）,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化。结果　（1）miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组（P＜0.05）;miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组（P＜0.05）。生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合。（2）与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降（P＜0.05）;而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论　miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

血浆外泌体微RNA-21对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞生长和转移的影响

目的 探讨血浆外泌体中微RNA(micro RNA,miR)-21对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞生长和转移的影响及机制。方法 提取并鉴定DLBCL患者血浆外泌体,将U2932细胞分为miR-21模拟阴性对照(mimic negative control,NC)组、miR-21组、miR-21+人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)组、磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)组、DLBCL患者外泌体组、DLBCL患者外泌体+miR-21抑制剂组(A组)以及DLBCL患者外泌体+PTEN组(B组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测U2932细胞中miR-21表达;采用双荧光素酶验证miR-21与PTEN的靶向关系;采用细胞计数试剂盒-8和Transwell检测各组U2932细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 DLBCL患者外泌体为双层膜,且形态呈“茶托”样,粒径3...     

心理应激致血浆外泌体miR-184-3p抑制血管内皮细胞增殖、迁移功能的作用分析

目的 探讨心理应激源性血浆外泌体miR-184-3p在调控血管内皮细胞增殖、迁移功能中的作用。方法 （1）将60只6~8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和心理应激组,每组30只。采用21 d慢性不可预知性心理应激刺激建模。通过行为学实验（旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验）评价建模效果。提取血浆外泌体进行电镜分析,qPCR检测血浆外泌体miR-184-3p表达水平。（2）体外培养小鼠肺微血管内皮细胞（MPVEC）,分别转染对照组小鼠血浆外泌体（C-EXO组）、心理应激组小鼠血浆外泌体（S-EXO组）、NC mimic组和miR-184-3p mimic组。划痕实验分析细胞迁移情况,EdU染色分析细胞增殖情况。结果 （1）心理应激组小鼠探索行为较对照组显著降低,不动时间显著增加（P<0.01）。电镜分析验证血浆外泌体直径为30~200 nm的双层膜囊泡结构,qPCR证实心理应激组小鼠血浆外泌体中miR-184-3p的表达量显著增加（P<0.05）。（2）细胞实验结果显示S-EXO组细胞迁移和增殖能力较C-EXO组下降（P<0.01）;同时miR-184-3p mimic组细胞增殖和迁移能力较NC mimic组下降（P<0.05）。结论 慢性心理应激源性血浆外泌体可以通过介导miR-184-3p抑制血管内皮细胞的增殖和迁移。     

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的　探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞迁移和侵袭作用的影响。方法　qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞（乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D）LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21（实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组）,抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组）,过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组）。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果　TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织（0.48±0.03 vs. 1.03±0.06,t=11.714,P＜0.01）,miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织（2.93±0.17 vs. 1.02±0.04,t=15.593,P＜0.01）。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A（P＜0.01）。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达（P＜0.05）。结论　LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。     

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-c...     

miR-506 对肝癌细胞恶性表型的影响

摘要:目的 探讨微 RNA-506（microRNA-506,miR-506）对肝癌细胞活性、 增殖和侵袭等恶性表型的调控作 用。方法 以肝癌细胞系 HepG2 和 QGY-7703 为模型, 依处理方式不同分别分为细胞常规培养 （细胞对照） 组、 pcD⁃ NA3 空载体对照组、 转染 pcDNA3/pri-506 过表达 miR-506 （过表达 miR-506） 组、 pSIH1 空载体对照组及转染 pSIH1/ TuD-506 抑制 miR-506 （抑制 miR-506） 组。实时定量逆转录 PCR 检测细胞内 miR-506 的表达水平。分别用 CCK- 8 实验、 体外集落形成实验和 Transwell 侵袭实验检测各组细胞的活性、 集落形成能力和侵袭能力。结果 在肝癌细 胞系 HepG2 和 QGY-7703 中, 与对应的空载体对照组相比, 过表达 miR-506 组的细胞内 miR-506 表达水平升高, 而 抑制 miR-506 组的细胞内 miR-506 表达水平降低（P＜0.05）; 过表达 miR-506 组细胞活性降低且形成集落的数量 和穿过 Transwell 微孔的细胞数量均减少, 而抑制 miR-506 组细胞活性升高且形成集落的数量和穿过 Transwell 微孔 的细胞数量均明显增加（P＜0.05）。与细胞对照组相比, pcDNA3 空载体对照组和 pSIH1 空载体对照组均不影响以 上各指标 （P＞0.05）。结论 miR-506 抑制肝癌细胞的活性、 集落形成能力和侵袭能力等恶性表型, 在肝癌细胞中发 挥抑癌基因的作用。     

miR-149抑制结直肠癌细胞迁移的分子机制研究

目的 探讨miR-149对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及其作用机制。方法 实时荧 光定量PCR（q-PCR）方法检测miR-149在CRC细胞SW620、LS174T和人结肠上皮细胞FHC中的表达水平;荧光素酶 分析法验证 STAT3 与 miR-149 之间的靶向结合关系;q-PCR 和 Western blot 检测 miR-149 过表达对 CRC 细胞中 STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。将miR-149 mimics与STAT3过表达质粒单独或者共转染至CRC细胞 中,并分为miR-NC组、miR-149 mimics组、miR-149 mimics+pEGFP/STAT3组。采用CCK-8法、Transwell法、细胞划 痕法、流式细胞术分别检测各分组CRC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡情况。结果 与正常结肠上皮细胞FHC相比, CRC 细胞 SW620、LS174T 中 miR-149 表达水平受到抑制（P＜0.01）。荧光素酶实验证实,在 CRC 细胞中 STAT3 是 miR-149的一个直接靶基因。过量表达miR-149抑制STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白的表达,降低CRC细胞增殖能 力、侵袭能力以及迁移能力（P＜0.01）。同时,过量表达 miR-149 也可促进 CRC 细胞的凋亡（P＜0.01）。但过表达 STAT3可解除miR-149对CRC细胞增殖、侵袭以及迁移能力的抑制作用。结论 miR-149通过靶向STAT3抑制结直 肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移,同时促进细胞的凋亡。     

EM患者子宫内膜组织的ESCs中miR-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

目的 探究子宫内膜异位症（EM）患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞（ESCs）中miR-539表达水平, 以及miR-539靶向基质金属蛋白酶9（MMP-9）对ESCs侵袭和迁移的影响。方法 收集60例EM患者子宫内膜异位 组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测miR-539和MMP-9 mRNA表达水平, 并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为miR-539 mimics 组、mimics NC组、miR-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移; Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果 EM组miR-539 mRNA水平 显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示miR-539与MMP-9 具有明显的靶向关系（P＜0.05）。与mimics NC组相比,miR-539 mimics组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数 量及MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）;与inhibitors NC组相比,miR-539 inhibitors组ESCs细胞增殖、划痕 愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。结论 miR-539可靶向调节MMP-9表达水 平,影响ESCs的增殖、迁移和侵袭。     

敲减microRNA-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肾细胞癌增殖和转移

目的探究miR-27a在肾细胞癌(RCC)增殖与转移中的作用及其机制。方法RT-qPCR检测RCC癌组织、癌旁组织、RCC细胞(Caki-1、786-O和ACHN)和正常肾小管上皮细胞(HK2)中miR-27a表达。将miR-27a inhibitor转入786-O和ACHN细胞,CCK-8实验检测细胞增殖;集落形成实验检测细胞集落形成;伤口愈合实验和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭;Western blot和免疫荧光检测β-catenin表达。采用LiCl(Wnt/β-catenin信号激动剂)处理已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞后,检测细胞增殖、侵袭与迁移。结果RCC癌组织中miR-27a表达量明显高于癌旁组织,并随分期进展而增加。与HK2细胞相比,RCC细胞中miR-27a表达均升高。转染miR-27a inhibitor后,786-O和ACHN细胞的集落形成、细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。miR-27a inhibitor降低ACHN细胞中β-catenin的表达,LiCl能促进已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结论miR-27a在RCC癌组织及RCC细胞中高表达,敲减miR-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制RCC细胞增殖和转移。     

微小 RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶 A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用.     

miR-21调控HTN1蛋白对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-21调控HTN1蛋白对胃癌细胞迁移和侵袭能力的作用.方法 定量聚合酶链反应检测胃癌组织和胃癌细胞中miR-21的表达情况,过表达miR-21后蛋白免疫印迹法检测HTN1的表达,双荧光素酶实验检测miR-21和HTN1表达在胃癌细胞中的关系,划痕实验检测过表达miR-21对胃癌细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测过表达miR-21对胃癌细胞侵袭能力的影响.结果 miR-21在胃癌组织及胃癌SGC7901细胞中表达水平均降低(P<0.05).miR-21的表达与病理分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05).过表达miR-21胃癌SGC7901细胞株荧光素酶活性、HTN1基因和蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05).过表达miR-21胃癌SGC7901细胞的迁移速率较对照组减慢,侵袭细胞数目少于对照组(P<0.05).结论 miR-21在胃癌中表达下调,其可以调控HTN1表达影响胃癌细胞迁移和侵袭能力.     

微小 RNA-4478下调鼠双微体 -2对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-4478(miR-4478)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用并阐明相关机制.方法 实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-4478在结肠癌组织中的表达.结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics及阴性对照后,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和小室(Transwell)法检测细胞的增殖、迁移及侵袭.预测miR-4478的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证靶基因.结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics或抑制物后,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测细胞靶基因表达.靶基因过表达验证细胞增殖、迁移及侵袭.Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cy-clin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、P21、钙粘附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.结果 相对于癌旁组织,miR-4478在结肠癌组织中的表达显著降低[(0.84±0.07)比(0.26±0.02),t=48.461,P<0.05];转染miR-4478 mimics可显著抑制细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001).miR-4478可负向调控MDM2表达(P<0.001).miR-4478过表达可抑制由MDM2过表达导致的结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001).结论 miR-4478通过抑制MDM2表达而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭.     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

Mechanisms of migration and invasion promoted by NSCLC cells-derived exosomes

OBJECTIVE To explore the function and mechanism of exosomes from non-small cell lung cancer(NSCLC) in promoting the invasion and metastasis of lung cancer cel s. METHODS The exosomes were isolated and identified by differential centrifugation, nanosight,transmission electron microscope and Western blotting.Observation of the exosome uptake was applied by immune fluorescent confocal experiments. Scratch test was used to detect the influence of exosomes to tumor cells migration ability and transwell assay were carried out to investigate the effect of exosomes on migration and invasion. Total RNAs from exosomes were used for miRNA library preparation and sequencing. RT-Q-PCR was employed to detect the miRNA levels. Western blotting was adopted to detect the protein expression levels and dual luciferase reporter assay was used to verify the predict target site of miRNA. RESULTS The extracellular vesicles in the supernatant of NSCLC cells were isolated by the differential centrifugation and confirmed as exosomes by nanosight, transmission electron microscope and Western blotting. Exosomes from NSCLC can promote migration and invasion of non-small cell lung cancer cells showing concentration-and time-dependent manner. By analyzing the differential expression profile of exosomes miRNA of lung epithelial cells and lung cancer cell A549,30 miRNAs were screened out. Then, hsa-miR-34c-3p was selected in combination with clinical specimen detection. The expression level of miR-34c-3p in exosomes from lung cancer was lower than that of the normal one.CONCLUSION Exosomes from NSCLC cells can be uptaken by cells and promote cell migration and invasion in dose-dependent manner. The expression level of miR-34c-3p in exosomes from NSCLC is significantly lower than normal tissues. The level of miR-34c-3p was further declined after incubating with exosomes. Exosomes from NSCLC cells can deliver miR-34c-3p to recepted cells and up-regulate the protein level of integrin α2β1.     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-145-5p调控结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)核受体亚族2F组成员1反义RNA(NR2F1-AS1)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 收集2015年3月至2017年5月青海省第五人民医院外科手术切除并经病理证实为原发性结肠腺癌组织25例,另留取距肿瘤边缘3 cm的癌旁组织(正常结肠组织).实时荧光定量P...     

钙激活的氯离子通道 A4通过抑制 JAK激酶 2/信号转导及转录激活蛋白 3信号通路对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨钙激活的氯离子通道A4(CLCA4)对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3(JAK2/STAT3)信号通路的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测正常人食管鳞状上皮细胞与人食管癌细胞中CLCA4的表达;将合成的CLCA4过表达载体及其对照分别转染至食管癌细胞Eca109,分别记作CLCA4过表达(pcDNA-CLCA4)组、CLCA4阴性对照(pcDNA-NC)组,并将未转染的细胞作为阴性对照(NC)组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;细胞迁移实验(Transwell)检测细胞迁移及侵袭能力.JAK2/STAT3信号通路激活剂p-JAK2多肽对细胞增殖、迁移及侵袭的影响.Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cy-clinD1)、依赖性激酶抑制因子(P21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、JAK2、STAT3、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)的表达水平.结果 与Het-1A相比,人食管癌细胞KYSE170、Eca109、TE10中CLCA4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);与pcDNA-NC组比较,pcDNA-CLCA4组细胞存活率显著降低[(52.16±11.41)％比(99.57±13.49)％,P<0.05],迁移细胞数[(56.47±10.03)％比(112.49±13.52)％]与侵袭细胞数[(63.43±9.87)％比(123.47±16.58)％]减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3的表达水平降低(P<0.05),P21的表达水平升高(P<0.05);激活JAK2/STAT3信号通路可逆转CLCA4过表达对Eca109细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 CL-CA4过表达可抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关.     

Kruppel样因子在人食管癌细胞中的作用研究

目的探讨Kruppel样因子(KLF4)对食管癌细胞生长、侵袭及迁移等生物学行为的影响,揭示其与食管癌发生发展的关系。方法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4的表达,通过siRNA的方法将KLF4高表达的KYSE140细胞敲降KLF4基因,通过MTT试验、软琼脂集落形成实验、Transwell小室侵袭实验检测该细胞生物学行为的变化。结果与转染control siRNA的细胞相比,转染KLF4-siRNA1、KLF4-siRNA2的KYSE140细胞生长速度上升,细胞穿过Transwell微孔膜的细胞数量增加,并且形成的集落明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 KLF4在人食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移过程中起着负性调节的作用,可能成为早期诊断和判断食管癌预后的分子标志物以及临床治疗的分子靶点。