褪黑素对帕金森病大鼠Nrf2/HO-1通路及小胶质细胞活化的影响

目的 探讨褪黑素对帕金森病大鼠转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）的调控作用及其对小胶质细胞活化的影响。方法 取SD大鼠72只,按照随机数字表法分为对照组、模型组、褪黑素（5 mg/kg）组、Nrf2抑制剂全反式维甲酸（ATRA,7 mg/kg）组、Nrf2抑制剂阴性对照（Nrf2-NC）（植物油,10 mL/kg）组、褪黑素＋ATRA（5 mg/kg＋7 mg/kg）组,每组12只。除对照组外,其余各组大鼠通过脑黑质区内注射6-羟多巴胺（6-OHDA）建立帕金森病模型。造模成功后各组开始给药,模型组和对照组ip等量生理盐水,各组连续给药8周,2次/d。末次给药后对大鼠进行行为学评分;免疫组化法检测黑质部多巴胺能神经元及小胶质细胞活化阳性染色细胞数目;免疫荧光共定位检测Nrf2、活化小胶质细胞（IBA1标记）重合表达的细胞数目;酶联免疫吸附法（ELISA）检测黑质部代谢产物α-突触核蛋白（α-Syn）和β淀粉样蛋白（Aβ）。采用Western blotting检测黑质部Nrf2、HO-1、肿瘤坏死因子（TNF-α）、环氧化酶2（COX-2）、小胶质细胞活化特异性标记物（OX-42）蛋白相对表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现单侧或双侧后肢部分瘫痪及行走、进食困难现象,行为学评分显著升高（P<0.05）。与模型组相比,褪黑素组大鼠出现行走时转圈,很少有瘫痪及行走困难症状,且行为评分降低（P<0.05）。ATRA组大鼠单侧或双侧后肢部分瘫痪大鼠例数增多,行为学评分最高（P<0.05）。与对照组相比,模型组大鼠黑质区Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、小胶质细胞活化数目、α-Syn和Aβ水平及HO-1、OX-42、TNF-α、COX-2水平和细胞核中Nrf2表达水平升高（P<0.05）,多巴胺能神经元数目减少。与模型组相比,褪黑素组大鼠黑质Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、多巴胺能神经元阳性染色数目、HO-1及细胞核中Nrf2表达升高（P<0.05）,小胶质细胞活化数目、α-Syn及Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表达降低（P<0.05）;ATRA组黑质区Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、多巴胺能神经元数目、HO-1水平及细胞核中Nrf2水平降低（P<0.05）,小胶质细胞活化数目、α-Syn和Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表达水平进一步升高（P<0.05）。褪黑素＋ATRA组大鼠上述指标变化与褪黑素组相反（P<0.05）。褪黑素＋ATRA组及Nrf2-NC组上述指标与模型组相比差异无统计学意义。结论 褪黑素可能通过激活Nrf2/HO-1通路,抑制炎症反应及小胶质细胞活化,减少帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元丢失。     

番石榴叶总黄酮对糖尿病大鼠肾脏Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 探讨番石榴叶总黄酮（TFPGL）对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及机制探讨。方法 雄性SD大 鼠24只,按随机数字表法分成对照组、糖尿病组、TFPGL治疗组,每组8只,后2组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素 （55 mg/kg）诱导糖尿病模型,TFPGL治疗组加用200 mg/kg TFPGL灌胃。12周后收集血、尿及肾组织,检测血糖（BS）、 血尿素氮（BUN）、尿蛋白/尿肌酐比值（ACR）及血清肌酐（SCr）的变化,HE染色检测肾脏病理改变,免疫荧光、免疫组 织化学染色及Western blot检测肾脏核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）表达。结果 与对照 组相比,糖尿病组BS、BUN、ACR及SCr明显升高,Nrf2表达增加,HO-1表达下降（均P＜0.05）;而给予TFPGL治疗 后,BS、BUN、ACR及SCr较糖尿病组明显降低,Nrf2、HO-1表达明显增加（均P＜0.05）。结论 TFPGL对糖尿病大鼠 肾脏病变具有一定的治疗效果,其机制可能与降低血糖和激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

巴曲酶对缺血性眩晕大鼠及其脑组织Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 探讨巴曲酶对缺血性眩晕大鼠眩晕症状、抗氧化指标、炎症因子、血液流变学指标及脑组织NF-E2-相关因子2/血红素氧合酶1(Nrf2/HO-1)信号通路的影响.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、巴曲酶组(尾iv 1 BU/kg)、NRF2抑制剂(ML385)组(ip 30 mg/kg)、巴曲酶+ML385...     

萝卜硫素激活Nrf2/ARE通路对博来霉素致大鼠肺纤维化的作用

目的探讨萝卜硫素(SFN)对肺纤维化的干预作用及其机制。方法 SD雄性大鼠45只,随机分为空白对照组、模型组和萝卜硫素组,每组15只。模型组、萝卜硫素组气管内缓慢注射博来霉素生理盐水溶液0.2~0.3 m L(5 mg·kg~(-1)),空白对照组气管内注射等体积生理盐水。术后次日,萝卜硫素组腹腔注射萝卜硫素溶液5 mg·kg-1,空白对照组、模型组腹腔注射生理盐水,隔日1次。给药7、14、28 d,每组随机处死5只大鼠,取腹主动脉血及肺组织。肺组织切片行HE、Masson染色,对肺组织病理变化进行评估。测定血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和肺组织羟脯氨酸(HYP)含量。Western blot、q RT-PCR法分析肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白及m RNA的表达水平。结果给药7、14、28 d,肺组织HE、Masson染色Szapiel评分及HYP含量、血清MDA水平测定均显示模型组高于空白对照组(P<0.01),萝卜硫素组低于模型组(P<0.01)。血清SOD活力测定显示模型组低于空白对照组(P<0.01),萝卜硫素组高于模型组(P<0.05或P<0.01)。Nrf2、HO-1蛋白及m RNA表达测定,各观察时点模型组均高于空白对照组(P<0.01),萝卜硫素组高于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论萝卜硫素在延缓肺纤维化的形成及发展中起到重要的作用,可能与萝卜硫素激活Nrf2/ARE通路抑制氧化应激有关。     

木犀草素对脊髓损伤大鼠Nrf2/HO-1通路的影响

目的:观察木犀草素对脊髓损伤大鼠的影响,并初步探讨其作用机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、木犀草素低、中、高剂量组和阳性对照组,除假手术组外,其余各组均采用改良的Allen重物打击法制备大鼠脊髓损伤(SCI)模型,建模成功后,分别给予生理盐水、10 mg·kg-1木犀草素、20 mg·kg-1木犀草素、4...     

电针调控Nrf2/HO-1通路对缺血缺氧性脑损伤大鼠小胶质细胞活化的影响

目的 探究电针调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对缺血缺氧性脑损伤（HIBD）大鼠小胶质细胞活化的影响。方法 随机将40只SD大鼠均分为假手术组、模型组、电针组、电针+全反式维甲酸组。除假手术组外其余组均通过颈总动脉结扎及缺氧建立HIBD大鼠模型,假手术组大鼠仅暴露左侧颈总动脉及迷走神经,不进行结扎及缺氧处理。造模结束后,电针组于百会穴进行电针刺激;电针+全反式维甲酸组大鼠经电针刺激后腹腔注射全反式维甲酸（7 mg/kg）。通过Longa评分进行大鼠神经行为学评分;旷场及水迷宫实验检测大鼠自主活动能力和认知功能;TUNEL法检测大鼠神经细胞凋亡情况;免疫组化法检测大鼠脑组织中小胶质细胞标志蛋白离子钙结合衔接分子1(Iba1)表达;试剂盒检测大鼠脑组织中白细胞介素10(IL-10)、IL-1β、活性氧（ROS）及丙二醛（MDA）水平;Western blot检测脑组织CD68、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶（Arginase）及Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分、逃避潜伏期、大脑皮质神经细胞凋亡率...     

番茄红素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对精神分裂大鼠认知障碍和氧化应激反应的影响

目的 探究番茄红素调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件（ARE）通路,影响精神分裂症大鼠的氧化应激反应和认知功能。方法 构建精神分裂症大鼠模型,将大鼠随机分为对照组、氯丙嗪组、模型组以及番茄红素高、低剂量组和番茄红素+Nrf2抑制剂组,每组各10例。Morris水迷宫实验检测各组大鼠认知功能;Tunel染色观察并计算各组大鼠海马组织中神经元凋亡率;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）水平;Western blotting法检测各组大鼠海马组织中Keap1、Nrf2和ARE下游抗氧化蛋白HO-1的表达水平。结果 与模型组相比,番茄红素组大鼠水迷宫实验中逃避潜伏期明显缩短（2～5 d）,海马组织细胞凋亡率显著降低,血清CAT、GSH-Px、SOD水平和海马组织Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量显著升高（P<0.05）;与番茄红素高剂量组相比,番茄红素低剂量组、番茄红素+Nrf2抑制剂组大鼠水迷宫实验中逃避潜伏期明显延长（2～...     

山茶油调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对老年痴呆大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探讨山茶油调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对老年痴呆(AD)大鼠氧化应激损伤的影响。方法 将大鼠随机分为空白组、AD组、山茶油低、中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组。空白组大鼠灌胃大豆油(1 ml/kg),模型组大鼠灌胃AlCl₃(110 mg/kg)+大豆油(1 ml/kg);山茶油低、中、高剂量组大鼠分别灌胃AlCl₃(110 mg/kg)+山茶油(1 ml/kg、2 ml/kg、4 ml/kg);盐酸多奈哌齐组大鼠灌胃AlCl₃(110 mg/kg)+盐酸多奈哌齐(1.75 mg/kg)。Morris水迷宫实验及跳台实验检测大鼠学习和记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化;试剂盒检测大鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性;Western blot检测大鼠脑组织中Keap1、N...     

盐酸川芎嗪注射液通过Nrf2/HO-1通路对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨盐酸川芎嗪注射液对大鼠肝脏缺血再灌注损伤及E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路的影响。方法 按随机数字表法将100只大鼠分为假手术组、模型组、丹参注射液(2mL/kg)组、盐酸川芎嗪注射液(30 mg/kg)组和盐酸川芎嗪注射液(30 mg/kg)+鸦胆子苦醇(Nrf2抑制剂,2 mg/kg)组。除假手术组外,各组大鼠采用阻断肝门静脉和肝动脉1h的方法制备肝脏缺血再灌注损伤大鼠模型,造模前30 min ip相应药物。造模6h后,采用生化分析法检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平;苏木精-伊红(HE)染色法检测肝组织病理学改变;比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量,Western blotting法检测核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路相关蛋白表达水平。结果 与模型组比较,丹参注射液组和盐酸川芎嗪注射液组血清ALT、AST、TBIL水平显著降低(P<0.05),肝组织病理学改变明显改善,病理评分显著降低(P<0.05);肝组织SOD、GSH-Px活性显著升高,且MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05),Nrf2、HO-1表达量显著升高(P<0.05),胞核核因子-κB(NF-κB)p65表达量及胞核NF-κB p65/胞浆NF-κB p65比值降低(P<0.05)。Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇能够明显逆转盐酸川芎嗪注射液对Nrf2/HO-1通路的激活作用以及对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。结论 盐酸川芎嗪注射液可能通过激活Nrf2/HO-1通路、抑制NF-κB核转位减轻肝脏缺血再灌注损伤大鼠氧化应激和炎症损伤,对肝脏缺血再灌注损伤起到保护作用。     

诱导血红素加氧酶-1对肝硬化大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对肝硬化大鼠肠黏膜屏障的保护作用.方法 建立四氯化碳(CCl4)致大鼠肝硬化动物模型,钴原卟啉诱导HO-1表达.FITC-荧光标记法检测大鼠肠黏膜通透性.ELISA法检测血浆TNF-α及IL-6含量.分光光度法检测肠组织HO活性及MDA含量.TUNEL染色法检测肠黏膜细胞凋亡.Western blot检测肠组织Bcl-2蛋白表达.结果 与control组比较,肝硬化(HC)组大鼠肠道通透性显著增高(P＜0.01);HC+HO组大鼠肠道通透性比HC组显著降低(P＜0.05).血浆TNF-α水平在HC组显著高于control组(P＜0.01),而在HC+HO组显著低于HC组(P＜0.05);IL-6水平在HC组显著高于control组(P＜0.01).肠组织匀浆MDA含量在HC组显著高于control组(P＜0.01),而在HC+HO组显著低于HC组(P＜0.01).诱导HO-1可有效抑制肝硬化大鼠肠黏膜细胞凋亡.HC组大鼠Bcl-2蛋白表达量显著低于control组(P＜0.01),诱导HO-1可使Bcl-2蛋白表达量显著高于control组(P＜0.01).结论 诱导HO-1可能通过抑制炎症与细胞凋亡保护肝硬化大鼠肠黏膜屏障.     

基于Nrf2/HO-1通路探讨二十五味鬼臼丸对宫颈炎大鼠的治疗作用及机制

目的 研究藏药二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆致宫颈炎模型大鼠的治疗作用及机制。方法 将雌性SD大鼠48只随机分为对照组、模型组及二十五味鬼臼丸低、中、高剂量（0.2、0.4、0.8 g·^kg-1）组和抗宫炎片（0.47 g·^kg-1）组,每组8只。除对照组外,其余5组建立25%苯酚胶浆致宫颈炎大鼠模型,各药物组分别以相应药物ig给药,每日1次,连续给药12 d后取材。观察大鼠外阴炎症程度评分、子宫指数、子宫解剖形态学改变;采用苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠子宫组织病理学改变;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测子宫组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量变化;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测子宫组织中核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、NADPH氧化酶4（Nox4）的mRNA和蛋白表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠外阴炎症评分、子宫指数、子宫组织中MDA水平、Nox4的mRNA和蛋白表达均显著升高（P＜0.01）,体质量、SOD活性、Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.01）,子宫组织出现不同程度的病理变化;与模型组比较,二十五味鬼臼丸能明显降低外阴炎症评分、子宫指数、子宫组织中MDA水平、Nox4的mRNA和蛋白表达（P＜0.05、0.01）,升高体质量及子宫组织中SOD活性和Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达（P＜0.05、0.01）,减轻子宫颈炎症损伤程度。结论 二十五味鬼臼丸可能通过抑制Nox4的表达,激活Nrf2/HO-1通路,发挥抗氧化作用,减轻炎症反应,从而抑制宫颈炎发展。     

Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白

机体在应对活性氧(reactive oxygen species,ROS)损害时形成了一套复杂的氧化应激应答系统,当暴露于ROS时,机体自身能诱导出一系列保护性蛋白,以缓解细胞所受的损害。这一协调反应是由这些保护性基因上游调节区的抗氧化反应元件(antioxidant responsive element,ARE)来调控的。而近年来的研究发现,核因子NF-E2相关因子(nuclear fac-tor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)是ARE的激活因子。Nrf2是外源性有毒物质和氧化应激的感受器,在参与细胞抗氧化应激和外源性有毒物质诱导的主要防御机制中发挥重要的作用。Nrf2-ARE通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。     

Gastrodin protects against glutamate-induced ferroptosis in HT-22 cells through Nrf2/HO-1 signaling pathway

Gastrodin (GAS) is a component of Gastrodia elata Blume, with strong antioxidant activity in neurodegenerative diseases. Ferroptosis is similar to glutamate-induced cell death. This study was designed to explore the protective effects of GAS against glutamate-induced neurotoxicity in mice hippocampal neurons (HT-22) cells. HT-22 cells were cultured with glutamate in the presence or absence of GAS (1, 5, 25 μM). Results showed that GAS inhibited glutamate-induced ferroptosis via Nrf2/HO-1 signaling pathway. Pretreatment of HT-22 cells with GAS significantly decreased glutamate-induced cell death and release of LDH. Ferrostatin-1, liproxstatin-1, and DFO treatments canceled these effect. GAS decreased glutamate-treatment ROS production in HT-22 cells. The concentration of iron ion was analyzed using ICP-MS. Metal analysis showed that GAS pretreatment normalized iron ion concentration in HT-22 cells. We found that GAS increased the nuclear translocation of Nrf2, up-regulated the downstream HO-1 protein expression in HT-22 cells following treatment with glutamate. Nrf2 knockdown greatly decreased glutamate-induced ferroptosis through HO-1. In conclusion, these results show that GAS protects HT-22 cells from the ferroptosis induced by glutamate through a new mechanism of Nrf2/HO-1 signaling pathway.