miR-145-3p靶向HDAC4调控人牙周膜成纤维细胞的自噬机制研究

目的 研究miR-145-3p能否调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的自噬及其可能存在的作用机制.方法 收集12～18岁因正畸需要减数而拔除的健康前磨牙,采集和培养HPDLFs,并进行鉴定.将miR-145-3p类似物(miR-145-3p-mimics组)、miR-145-3p抑制物(miR-145-3p-inh...     

circ＿PITX1/miR-129-5p对食管癌细胞增殖凋亡及放射敏感性的影响

目的 探讨circ＿PITX1对食管癌细胞增殖凋亡及放射敏感性的影响及分子机制。方法 选取2018年1月至2021年1月51例食管癌患者癌组织及癌旁组织,运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定circ＿PITX1和miR-129-5p的表达;将食管癌细胞EC109分为对照组、干扰circ＿PITX1组、miR-129-5p Inhibitor组、干扰circ＿PITX1+miR-129-5p Inhibitor组、2 Gy组、2 Gy+干扰circ＿PITX1组、2Gy+干扰circ＿PITX1+miR-129-5p Inhibitor组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞克隆数;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;circ＿PITX1和miR-129-5p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验分析。结果 食管癌组织中circ＿PITX1表达比癌旁组织增加,miR-129-5p表达比癌旁组织减少(P<0.05)。单独沉默circ＿PITX1或沉默circ＿PITX1后用射线照射,EC109细胞抑制率和...     

circ＿0072083靶向miR-142-3p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨结直肠癌组织中circ＿0072083和miR-142-3p的表达情况,分析circ＿0072083靶向miR-142-3p在结直肠癌进展中的作用。方法 选取2018年3月至2019年12月行手术切除的52例结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁组织。RT-qPCR检测circ＿0072083和miR-142-3p在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达。将si-circ＿0072083、si-NC、miR-142-3p mimic、miR-NC、si-circ＿0072083+anti-miR-NC、si-circ＿0072083+miR-142-3p Inhibitor分别转染结直肠癌LoVo细胞,运用平板克隆实验、Transwell法、CCK-8法评估细胞克隆、迁移侵袭和增殖能力。circ＿0072083和miR-142-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果 结直肠癌组织中circ＿0072083表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-142-3p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。沉默circ＿0072083显著增加细胞增殖抑制率和miR-14...     

MicroRNA-30a-5p靶向Beclin1抑制自噬减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤

目的探究微小型RNA-30a-5p(MicroRNA-30a-5p,miR-30a-5p)对胰腺泡细胞损伤的影响及作用机制。方法不同浓度牛胆酸钠诱导AR42J细胞损伤,取最佳用药浓度,建立胰腺泡损伤模型。细胞分为Control组、Model组、mimic mock组及miR-30a-5p mimic组,牛胆酸钠及miR-30a-5p mimic处理细胞后,RT-PCR检测miR-30a-5p mRNA水平,MTT检测细胞存活,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测脂肪酶及淀粉酶活性,ELISA检测多种炎症因子的浓度,免疫印记检测自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。生物信息预测miR-30a-5p和Beclin1的靶向关系,通过荧光素酶报告实验验证。pcDNA Beclin1(pc-Beclin1)及miR-30a-5p mimic转染经牛胆酸钠处理的AR42J细胞,检测细胞存活、凋亡、脂肪酶淀粉酶活性、自噬相关蛋白表达及炎症因子浓度。结果 500μmol/L牛胆酸钠处理AR42J细胞。miR-30a-5p mimic可显著提高Model组AR42J细胞中miR-30a-5p的mRNA水平及细胞存活率,降低凋亡细胞百分比、脂肪酶淀粉酶活性及细胞培养上清中炎症因子的浓度。同时,miR-30a-5p mimic可显著降低Model组AR42J细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1表达,提高p62、p-P13K、p-Akt及p-mTOR表达。miR-30a-5p mimic显著降低Beclin1wt的荧光酶活性。pc-Beclin1显著上调Beclin1,提高LC3表达,并显著减弱miR-30a-5p mimic对AR42J细胞的促增殖抗凋亡作用及对炎症反应的抑制作用。结论 miR-30a-5p通过靶向下调Beclin1,减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤。     

miR-891a-5p通过CPEB1调控结肠癌细胞生物过程的机制研究

目的 探讨miR-891a-5p通过细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)调控结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的机制。方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测结肠癌组织、癌旁组织、人正常结肠上皮细胞和人结肠癌细胞中miR-891a-5p的表达;将LOVO细胞分为A组（不做任何处理）、B组（转染anti-miRcon）、C组（转染anti-miR-891a-5p）、D组（共转染anti-miR-891a-5p和si-con）、E组（共转染anti-miR-891a-5p和siCPEB1）、F组（转染miR-con）、G组（转染miR-891a-5p）;CCK-8法检测细胞增殖率、Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹实验检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、胱天蛋白酶-3酶原（Pro-caspase-3）、裂解的胱天蛋白酶-3(C-caspase-3)、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因检...     

miR-27a-3p通过Wnt3a/β-catenin信号通路抑制肺成纤维细胞I、III型胶原合成

目的探讨microRNA-27a-3p(miR-27a-3p)对肺成纤维细胞I型胶原(ColⅠ)和III型胶原(ColⅢ)合成的影响及分子机制。方法培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,转染miR-27a-3p模拟物/抑制物,实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-27a-3p水平;qPCR和Western blot测定ColⅠ、ColⅢ、Wnt3a表达;Western blot分析细胞核内β-catenin水平。生物信息学预测miR-27a-3p与Wnt3a 3′-非翻译区(3′-UTR)靶向结合情况,并用双荧光素酶报告基因检测miR-27a-3p模拟物对Wnt3a 3′-UTR野生型和突变型荧光素酶活性的影响。给予Wnt3a/β-catenin信号通路抑制剂Dkk1预处理MRC-5细胞6 h,再用miR-27a-3p抑制物转染细胞48 h,qPCR和Western blot检测ColⅠ、ColⅢ表达。结果 miR-27a-3p模拟物明显增加miR-27a-3p水平,降低ColⅠ、ColⅢ、Wnt3a和β-catenin表达,其抑制物的作用则相反,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。Wnt3a 3′-UTR存在1个miR-27a-3p的结合位点,miR-27a-3p过表达减少野生型Wnt3a 3′-UTR荧光素酶活性(P<0.01),但对其突变型荧光素酶活性无影响(P>0.05)。Dkk1预处理几乎完全逆转miR-27a-3p抑制物对ColⅠ、ColⅢ合成的诱导作用(P<0.05)。结论 miR-27a-3p抑制肺成纤维细胞ColⅠ、ColⅢ生物合成,其机制与拮抗Wnt3a/β-catenin信号通路有关。     

lncRNA HOXB-AS3靶向miR-379-5p调节类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒蛋白B8基因反义RNA3(HOXB-AS3)对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响和分子机制.方法 实时定量 PCR( RT-qPCR)检测 HOXB-AS3 和miR-379-5p在健康对照者、RA患者滑膜组织中的表达.双荧光素酶报告实验和RT-q...     

miR-30a-5p调控USP22对MPP+诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-30a-5p对1甲基4苯基吡啶(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 体外培养SK-N-SH细胞,分为对照组(NC组)、MPP+组(1 mmol/L MPP+作用细胞24 h)、MPP++miR-30a-5p组(1 mmol/L MPP+作用转染miR-...     

miR-30a-5p调控HDAC9对心肌细胞氧化应激损伤保护作用的机制研究

目的 探讨miR-30a-5p通过调控组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激的影响及作用机制.方法 本研究通过体外培养心肌细胞H9 c2,建立缺氧复氧损伤细胞模型,细胞分组为:Control组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-30a-5p组、H/R+si-NC组、H/R...     

miR-18b-5p在肝癌早期筛查中的临床应用价值研究

目的 观察miR-18b-5p在肝癌早期筛查中的临床应用价值。方法 随机选择2021年1月～2021年12月确诊的肝癌患者90例,乙型肝炎患者90例,丙型肝炎50例,健康体检者90例作为研究对象。所有纳入研究患者均给予miR-18b-5p水平测定。冻存于-80℃的血液样本提取总RNA,qRT-PCR法检测miR-18b-5p表达,计算PCR的扩增的Ct,比较四组纳入研究人员的miR-18b-5p水平,肝癌组患者不同性别、年龄、分期、淋巴结转移、有无腹水患者的miR-18b-5p水平。通过ROC曲线评价PCR检测miR-18b-5p的在肝癌中诊断效能。结果 肝脏组患者miR-18b-5p水平高于乙型肝炎、丙型肝炎和对照组,乙型肝炎和丙型肝炎患者miR-18b-5p水平高于对照组,差异均具有统计学意义（P <0.05）,但乙型肝炎和丙型肝炎组患者miR-18b-5p水平无明显差异（P> 0.05）。肝癌组患者根据不同病理特征分组,肿瘤大小超过5 cm患者的miR-18b-5p水平高于肿瘤大小<5 cm,TNM分期为Ⅲ期患者的miR-18b-5p水平高于Ⅰ+Ⅱ期水平,差异均...     

结核潜伏感染患者全血miR618、miR-146a-5p的表达

目的探讨全血miR618、miR-146a-5p的表达对结核潜伏感染患者的诊断意义。方法选择2012年1月—2014年1月44例肺结核潜伏感染者做为观察组,并选择同期44例活动性肺结核患者做为对照组,采集两组患者的静脉全血,检测两组患者全血中miR618、miR-146a-5p表达,比较两组患者的表达差异。结果肺结核潜伏感染患者miR618的表达为（2.014±0.154）,活动性肺结核的miR618的表达为（1.056±0.746）,肺结核潜伏感染患者的miR618的表达明显较活动性肺结核的高（P〈0.01）,有统计学意义;肺结核潜伏感染患者的miR-146a-5p为（2.237±1.084）,活动性肺结核的miR-146a-5p为（1.764±0.789）,肺结核潜伏患者的miR-146a-5p的表达明显较活动性肺结核的高（P〈0.01）,有统计学意义。结论结核潜伏感染者的miR618、miR-146a-5p的表达与活动性结核差异明显,可能成为肺结核潜伏感染患者诊断的标志物。     

肺成纤维细胞在肺纤维化进程中的作用

肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是一种严重的肺间质疾病,主要病理特点是早期的弥漫性肺泡炎,后期大量成纤维细胞病理性增殖转型及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)进行性异常积聚并取代正常的肺组织结构。其发病原因很多,如病原微生物、粉尘、药物、化学制剂等多种因素均可诱导产生肺纤维化,但发病机制尚不清楚。在其发生过程中,肺成纤维细胞(fibroblast,FB)起着重要的促进作用,主要通过自身的异常增殖与转型,大量分泌细胞外基质直接触发PF和作用于上皮细胞及一些炎症细胞间接参与PF进程。该文通过整理成纤维细胞在PF中的作用,进一步了解肺纤维化的发病机制。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-149-5p对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的研究

目的 探究miR-149-5p在氧化低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)中的功能及其分子机制.方法 用不同浓度的ox-LDL(0,25,50,100μg·mL-1)处理VSMCs 24h,或用100 mg·mL-1的ox-LDL分别处理VSMCs 0,6,12,24 h,以实时荧光定量逆...     

miR-199a-5p和miR-206靶向调控SULF1并抑制卵巢上皮细胞对顺铂的敏感性

目的 SULF1是硫酸酯酶家族成员之一,主要发挥肿瘤抑制因子的作用,在多种肿瘤中低表达,本研究旨在筛选直接靶向SULF1的microRNAs,并验证候选microRNAs对SULF1表达的负调控作用。方法 利用TargetScanHuman 7.2、miRDB、DIANA和RNAhybrid数据库预测调控SULF1的microRNAs。利用实时荧光定量PCR和Western blotting实验探索microRNAs对SULF1表达的影响。双荧光素酶报告基因实验探究microRNAs和SULF1基因的直接结合能力。CCK-8实验验证microRNAs对铂类药物敏感性的影响。结果 利用数据库预测到两个microRNAs：miR-199a-5p和miR-206,二者均可靶向SULF1的3''-UTR区域。实时荧光定量PCR结果显示,与IOSE80细胞中的阴性对照相比,miR-199a-5p和miR-206对应的模拟物（mimics）分别使SULF1的mRNA表达水平降低至23.07%和20.11%,而它们的抑制剂（inhibitors）则分别使SULF1的mRNA表达水平升高3.62倍和3.09倍。Western blotting结果表明,miR-199a-5p和miR-206也可降低SULF1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-206和miR-199a-5p均可直接结合SULF1的3''-UTR,且miR-206具有更强的调控作用。CCK-8实验结果表明,降低miR-199a-5p和miR-206的表达水平可显著增强IOSE80细胞对顺铂的敏感性（IC₅₀： 9.287 μmol·L^-1/11.32 μmol·L^-1 vs. 16.75 μmol·L^-1）,相反,二者过表达可显著降低IOSE80细胞对顺铂的敏感性。结论 miR-199a-5p和miR-206均可直接与SULF1的3''-UTR结合,下调SULF1表达,降低卵巢细胞对顺铂的敏感性。     

乏氧诱导的miR-210表达通过BDNF/NF-κB/自噬信号途径促进成纤维细胞存活

目的 乏氧环境可以引起细胞损伤,microRNA-210 (miR-210)在乏氧环境下反应增强,保护细胞免受损伤.本研究我们探讨miR-210对乏氧条件下人皮肤成纤维细胞GM0639存活的影响.方法 用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)和ROS清除剂N乙酰半胱氨酸(NAC)研究乏氧条件下的自噬、ROS产生和凋亡.通过...     

miR-30a-5p在人乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬耐药性中的作用研究

目的 探究miR-30a-5p在人乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)耐药性中的作用,并阐明相关作用机制。方法 通过短时间高浓度TAM刺激MCF-7细胞诱导耐药株,MTT法检测细胞耐药性的改变;qRT-PCR法检测MCF-7细胞及其耐药细胞株MCF-7/TAM中miR-30a-5p的表达情况;吖啶橙染色及Western blotting检测MCF-7/TAM细胞相对于MCF-7细胞自噬的变化;转染miR-30a-5p模拟物后,采用MTT法检测MCF-7/TAM细胞对TAM敏感性的变化,并通过吖啶橙染色和Western blotting观察miR-30a-5p对MCF-7/TAM细胞自噬的影响;采用生物信息学方法对miR-30a-5p进行靶基因预测,荧光素酶报告基因试验验证miR-30a-5p对ATG5的靶向调控作用;Western blotting检测miR-30a-5p对ATG5表达的影响。结果 TAM对MCF-7/TAM细胞的抑制作用明显弱于对MCF-7细胞;miR-30a-5p在MCF-7/TAM细胞中的表达水平明显低于在MCF-7细胞中;相对于MCF-7细胞,MCF-7/TAM细胞的自噬水平明显升高;过表达miR-30a-5p后,MCF-7/TAM细胞对TAM敏感性显著增加,自噬水平显著降低;Targetscan软件分析表明ATG5是miR-30a-5p的下游靶基因,通过荧光素酶报告基因试验进一步证明miR-30a-5p靶向调控ATG5;MCF-7/TAM细胞中上调miR-30a-5p能够抑制ATG5的表达。结论 miR-30a-5p靶向调控ATG5,并能够抑制细胞的自噬,进而增强乳腺癌细胞对TAM的敏感性。