吡格列酮对过氧化氢诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的观察吡格列酮对乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能作用机制。方法采用培养的新生大鼠乳鼠心肌细胞制备H2O2200μmol·L-1氧化损伤模型。实验分为正常对照组、模型组、吡格列酮组(0.1,1及10μmol·L-1)、吡格列酮(10μmol.L-1)+GW9662(10μmol·L-1)组、维拉帕米1μmol.L-1组。MTT法测心肌细胞的活力;采用硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化。结果H2O2200μmo.lL-1作用于心肌细胞12h能引起心肌细胞凋亡。吡格列酮浓度依赖性地增加受损心肌细胞的活力及SOD活性,降低MDA含量。吡格列酮10μmol·L-1抑制作用最明显,其与维拉帕米1μmol·L-1有相似的抑制作用,二者都可以减少心肌细胞的凋亡率,降低由H2O2诱导的升高的[Ca2+]i静息水平及频率。过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ受体特异性拮抗剂GW966210μmol.L-1能拮抗吡格列酮的部分抑制作用,但不影响吡格列酮对[Ca2+]i的瞬变作用。结论吡格列酮可以抑制H2O2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与其抗脂质氧化和减少细胞内钙超载有关,其抑制作用部分是通过PPARγ受体介导的。     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

目的:研究吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织氧化应激的影响。方法:采用链脲佐菌素诱导糖尿病模型,随机分为正常对照组、正常对照治疗组、糖尿病组、糖尿病治疗组,两治疗组给予吡格列酮10 mg.kg-1.d-1灌胃,1次/d,每组10只。后两组大鼠糖尿病模型构建成功后的第10周末测定血糖、肾重/体重2、4 h尿蛋白定量,并检测肾组织中丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)的含量,及肾组织铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。结果:糖尿病治疗组与糖尿病组比较,血糖无显著差异(P>0.05),但肾重/体重和24 h尿蛋白定量明显降低(P<0.01);与正常对照组相比,糖尿病组肾组织MDA含量、CAT活性明显增加(P<0.01),T-AOC、GSH含量和Cu,Zn-SOD、GSH-Px、GR活性明显降低(P<0.01);与糖尿病组比较,糖尿病治疗组肾组织MDA含量和CAT活性明显降低(P<0.05,P<0.01),T-AOC、GSH含量和Cu,Zn-SOD、GSH-Px、GR活性明显增加(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠肾脏存在明显氧化应激反应,吡格列酮具有不依赖其降糖效果的抗氧化活性,进而起到保护肾脏和延缓糖尿病肾病发生、发展的作用。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的　利用体外培养的乳鼠心肌细胞 ,观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的肥大心肌细胞的影响 ,进一步推测吡格列酮对糖尿病并发心肌肥大的可能作用及作用机制。方法　以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后 ,用Lowrys法测心肌细胞的蛋白质含量 ;用 [3 H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成 ;利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积 ;用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率。结果　 10 μmol·L-1浓度的吡格列酮在对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比维拉帕米更为明显 ;同时观察到吡格列酮同维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论　吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制探讨

目的观察吡格列酮对糖尿病大鼠肾脏的保护作用并探讨其机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型。24只大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)、吡格列酮干预组(3mg·kg-1·d-1,DT组),每组8只。12周末,测定各组相关生化指标。运用比色法检测肾皮质中丙二醛(MDA)的含量、铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性。同时留取肾标本作电镜观察。结果与NC组相比,DM组和DT组血糖、胆固醇、甘油三酯、血清胰岛素、C肽、尿素氮、血肌酐、肾重/体重和24h尿蛋白定量差异有统计学意义。DM组与NC组比较,肾皮质Cu-ZnSOD、CAT活性明显降低(P<0.01),MDA含量明显增加(P<0.01)。DT组与DM组比较,血糖、胆固醇、甘油三酯、血清胰岛素、C肽、尿素氮、血肌酐差异无统计学意义(P>0.05),肾重/体重和24h尿蛋白定量明显降低(P<0.05);肾皮质CAT和Cu-ZnSOD活性增加(P<0.05),肾皮质MDA含量降低(P<0.05)。结论吡格列酮对糖尿病大鼠肾脏有保护作用且此作用不依赖其降糖、降脂机制,可能与吡格列酮的抗氧化机制有关。     

吡格列酮对高脂大鼠内脏肥胖与胰岛素抵抗的影响

目的：探讨环境因素引起的内脏性肥胖与胰岛素抵抗的关系,并观察吡格列酮对其的影响。方法：应用59%高脂饮食喂养大鼠4周制成胰岛素抵抗的动物模型后,给予吡格列酮干预4周,观察内脏肥胖对大鼠胰岛素敏感性的影响以及吡格列酮对其的干预。结果：经59%高脂饮食喂养8周后,模型对照组较正常对照组大鼠空腹血糖及胰岛素均明显增高,血脂、血清游离脂肪酸（FFA）亦明显增高。给予吡格列酮干预后药物干预组较模型对照组大鼠空腹血糖及胰岛素均明显减低,血脂、血清FFA亦明显减低。结论：高脂饮食可诱导内脏肥胖并导致胰岛素抵抗,而吡格列酮可干预此过程。     

吡格列酮和罗格列酮对脂多糖诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察胰岛素增敏剂——噻唑烷二酮类(TZD)药物吡格列酮和罗格列酮对脂多糖(LPS)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增殖的影响。方法:组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞;LPS(0.1,1,10mg·L-1)干预血管平滑肌细胞不同时间(0,12,24,48,72h)后,分别用吡格列酮和罗格列酮与10mg·L-1LPS共同孵育72h,四甲基偶氮咗盐微量酶比色(MTT)法检测血管平滑肌细胞增殖。结果:10mg·L-1LPS孵育72h导致血管平滑肌细胞增殖程度最明显(P<0.01);吡格列酮和罗格列酮可明显抑制LPS诱导的血管平滑肌细胞增殖。结论:噻唑烷二酮类代表药吡格列酮和罗格列酮均对LPS诱导的血管平滑肌细胞异常增殖具有抑制作用,该类药物可能在治疗心血管疾病方面有较好的应用前景。     

胰岛素吡格列酮对胰岛β细胞功能的影响

目的观察胰岛素、吡格列酮对2型糖尿病胰岛β细胞功能的影响。方法将60例2型糖尿病患者分为两组：胰岛素加吡格列酮组和磺脲类降糖药物加吡格列酮组治疗1年，分析对比两组治疗前后空腹及餐后2h血糖、糖化血红蛋白、空腹胰岛素原、空腹真胰岛素和由Homa模型计算的Homa IR．结果治疗后两组患者血糖和糖化血红蛋白均维持良好水平，但组间无差异；治疗后胰岛素原水平和IR两组均明显下降．胰岛素组较磺脲组降低更明显；治疗后胰岛素组的真胰岛素水平较磺脲组明显增高．结论对经饮食和运动后血糖不能获得良好控制的2型糖尿病患者应用胰岛素或磺脲类药物联合吡格列酮治疗均能改善胰岛β细胞功能和IR，且胰岛素治疗比磺脲类药物能使β细胞的负荷进一步减少。     

吡格列酮对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用分析

目的探讨吡格列酮对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用。方法将雄性Wistar大鼠30只随机抽取10只作为空白对照组,其余腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型。将成模大鼠（20只）随机分为糖尿病对照组和吡格列酮组。吡格列酮组给予吡格列酮10mg·kg-1·d-1灌胃,其余2组给予等量生理盐水灌胃。16周后3组大鼠断尾测空腹血糖（FPG）,心包取血测空腹胰岛素水平（FINS）和糖化血红蛋白（HbAlc）。观察3组大鼠FPG、FINS、HbAlc、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）水平并比较。结果与糖尿病对照组相比,吡格列酮组FPG、HbAlc、FINS、HOMA-IR水平降低（P〈0.05）;糖尿病对照组、吡格列酮组FPG、HbAlc、FINS、HOMA-IR水平较空白对照组升高（P〈0.05）。结论吡格列酮对胰岛β细胞有一定的保护作用。     

吡格列酮对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用分析

目的 探讨吡格列酮对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用.方法 将雄性Wistar大鼠30只随机抽取10只作为空白对照组,其余腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.将成模大鼠(20只)随机分为糖尿病对照组和吡格列酮组.吡格列酮组给予吡格列酮10mg·kg-1·d-1灌胃,其余2组给予等量生理盐水灌胃.16周后3组大鼠断尾测空腹血糖(FPG),心包取血测空腹胰岛素水平(FINS)和糖化血红蛋白(HbAlc).观察3组大鼠FPG、FINS、HbAlc、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平并比较.结果 与糖尿病对照组相比,吡格列酮组FPG、HbAlc、FINS、HOMA-IR水平降低(P＜0.05);糖尿病对照组、吡格列酮组FPG、HbAlc、FINS、HOMA-IR水平较空白对照组升高(P＜0.05).结论 吡格列酮对胰岛β细胞有一定的保护作用.     

吡格列酮对社区初诊2型糖尿病人的疗效探讨

目的：观察社区初诊2型糖尿病患者采用单纯口服二甲双胍治疗及其与吡格列酮联合治疗对患者血糖控制的影响。方法：初诊2型糖尿病患者85例,41例给予口服二甲双胍治疗,44例给予口服二甲双胍与吡格列酮联合治疗,比较两组患者的血糖控制效果。结果：口服二甲双胍与吡格列酮联合治疗组血糖控制效果优于单纯口服二甲双胍治疗组（P〈0.05）,联合治疗组血糖达标平均天数,二甲双胍日均用量均低于单纯二甲双胍治疗组（P〈0.01）。结论：两组对社区初诊2型糖尿病患者血糖均有稳定、良好的控制效果,其中口服二甲双胍与吡格列酮联合治疗具有更好的效果。     

FUNDC1通过调控线粒体分裂影响高糖损伤H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨含FUN14域蛋白1（FUNDC1）在高糖损伤的H9c2心肌细胞中通过调控线粒体分裂影响心肌细胞凋亡的作用机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞并建立高糖损伤模型,分别进行细胞转染,使用腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活剂5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷（AICAR）后,分为正常对照组（CTRL组）、高糖组（HG...     

西格列汀在高糖高脂环境下对H9c2细胞自噬及凋亡的影响

目的：探讨西格列汀在高糖高脂环境下对大鼠H9c2心肌细胞自噬及凋亡的影响。方法：体外培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为正常对照组（Con组）、高糖高脂组（HP组）、西格列汀组（Sit组）和高糖高脂+西格列汀组（HP+Sit组），采用CCK-8检测细胞活力，采用单丹磺酰戊二胺（MDC）荧光染色法检测细胞内自噬体的形成，用Western blot法及流式细胞术检测西格列汀对高糖高脂条件下H9c2细胞自噬及凋亡的影响。结果：Con组H9c2细胞存在着较低水平的自噬表达；给予高糖高脂刺激后，细胞自噬水平明显减弱，凋亡显著增强。给予西格列汀处理，可显著增强H9c2心肌细胞自噬水平的表达，并降低细胞凋亡率。结论：在高糖高脂条件下，西格列汀可通过促进细胞自噬，抑制细胞凋亡，减轻高糖高脂对H9c2心肌细胞的损伤，可能对糖尿病患者的心肌有一定的保护作用。     

吡格列酮对培养的心肌细胞肥大的抑制作用

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响,进一步推测吡格列酮对糖尿病性心肌肥大的可能作用及作用机制。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后,用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率;用Lowry’s法测心肌细胞的蛋白质含量;用[3H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成;利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果吡格列酮在1～10μmol·L-1浓度对25.5mmol·L-1高糖与1μmol·L-1去甲肾上腺素联合诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比1μmol·L-1维拉帕米更为显著;同时观察到10μmol·L-1吡格列酮同1μmol·L-1维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论吡格列酮能有效抑制高糖与去甲肾上腺素联合诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察噻唑烷二酮(TZD)类药物吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响,进一步推测TZD类药物对糖尿病并发心肌肥厚的可能作用机制。方法以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后。利用结晶紫染色法测定细胞的数量;利用[3H]thym id ine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果吡格列酮可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞数量、DNA合成及S+G2+M期细胞的百分比增加,并呈一定的剂量依赖性。结论吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞的增殖,这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

Baicalin protects H9c2 cardiomyocytes against hypoxia/reoxygenation‐induced apoptosis and oxidative stress through activation of mitochondrial aldehyde dehydrogenase 2

Baicalin, a flavonoid glycoside separated from Scutellaria baicalensis, has cardioprotection against ischaemia/reperfusion (I/R) injury. Mitochondrial aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) is considered as an endogenous protective mechanism against I/R injury depending on its anti‐oxidant and anti‐apoptotic characteristics. The present study demonstrates whether ALDH2 contributes to the cardioprotection of baicalin against hypoxia/reoxygenation (H/R)‐inudced H9c2 cardiomyocytes injury. Our results observed that H/R treatment resulted in a significant decrease in cells viability and obvious increases in caspase‐3 activity and apoptosis rate in H9c2 cells, while these alterations were evidently reversed by baicalin pretreatment. Simultaneously, baicalin mitigated H/R‐induced the decreases in the levels of ALDH2 mRNA and protein as well as the activity of ALDH2 in H9c2 cells. However, we found that daidzin, an ALDH2 antagonist, remarkably attenuated baicalin‐elicited inhibitory action on H/R‐induced the downregulation of cells viability and Bcl‐2 protein expression, and the upregulations of caspase‐3 activity, apoptosis rate, cytochrome c and Bax proteins expressions in H9c2 cells. In addition, baicalin reversed H/R‐induced oxidative stress as evidenced by the downregulation of malondialdehyde (MAD) and 4‐hydroxy aldehydes (4‐HNE) levels, the inhibition of endogenous reactive oxygen species (ROS) generation, and the downregulation of superoxide dismutase (SOD) activity induced by H/R treatment, while these effects were also blocked by daidzin. Furthermore, we found that Alda‐1, an ALDH2 agonist, also abolished H/R‐induced cytotoxicity, apoptosis, and oxidative stress, indicating that ALDH2 mediated H/R‐induced H9c2 cell injury. Overall, these results suggested that baicalin prevents H/R‐induced apoptosis and oxidative stress through enhancing ALDH activity and expression in H9c2 cardiomyocytes.     

Up-regulation of miR-135b expression induced by oxidative stress promotes the apoptosis of renal tubular epithelial cells under high glucose condition

This study aimed to investigate the role and underlying mechanism of miR-135b in high glucose-induced oxidative stress of renal tubular epithelial cells. Here, in vivo experiments found that compared to the control group, miR-135b expression was significantly up-regulated in the diabetes group, whereas BMP7 mRNA and protein levels were down-regulated. In high glucose-treated renal tubular epithelial cells (HK-2) in vitro, oxidative stress was induced, which up-regulated miR-135b expression. In addition, the regulation of miR-135b on BMP7 expression was confirmed in HK-2 cells. Under high glucose conditions, oxidative stress promoted the apoptosis of HK-2 cells through the up-regulation of miR-135b expression. In vivo experiments indicated that interference with miR-135b improved renal function in mice with diabetic nephropathy. In conclusion, these results indicated that the up-regulation of miR-135b expression induced by oxidative stress promotes the apoptosis of HK-2 cells under high glucose conditions.     

丹酚酸A激活AKT/mTOR/4EBP1通路缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激

目的探究丹酚酸A(Sal A)对脂多糖(LPS)诱导的氧化应激性损伤H9c2心肌细胞增殖、凋亡,以及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/起始因子4E结合蛋白(4EBP1)通路相关蛋白表达的影响。方法用LPS诱导制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含Sal A 5,10和20 mg·L^-1的DMEM培养基培养细胞24 h,加LPS 1 mg·L^-1继续孵育24 h。用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色观察H9c2心肌细胞存活;采用流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡和线粒体膜电位;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、存活蛋白、Bax/Bcl-2,AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、mTOR、p-mTOR、4EBP1和p-4EBP1蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,模型组EdU红色标记的细胞减少(P<0.05);与模型组比较,Sal A 5,10和20 mg·L^-1处理组EdU红色标记的细胞增多(P<0.05)。Sal A能降低培养液中LDH活性及细胞内MDA和GSH含量,增加胞内SOD活性(P<0.05),减少心肌细胞的凋亡率(P<0.05),降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度(P<0.05)。Sal A 10和20 mg·L^-1处理后,活化胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶9和Bax/Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05),存活蛋白水平显著上调(P<0.05);与细胞对照组比较,模型组AKT/mTOR/4EBP1磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Sal A 10和20 mg·L^-1组AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。结论Sal A通过激活AKT/mTOR/4EBP1通路、减少心肌细胞凋亡并降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度,减缓了LPS诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激,表明Sal A对LPS造成的氧化应激损伤心肌细胞具有保护作用。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

吡格列酮对波动性高糖处理的人脐静脉内皮细胞脂联素受体表达的影响

目的探讨吡格列酮对波动性高糖处理的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)脂联素受体(AdipoR1和AdipoR2)表达的影响。方法将HUVEC在波动性高糖培养液(5.5、20mmol.L-1每隔8h轮换1次)中培养5d后,随机分为阴性对照组、吡格列酮处理组(10、1与0.1μmol.L-1)和阳性对照组。应用实时定量PCR方法检测脂联素受体mRNA表达的改变。结果与波动性高糖组比较,吡格列酮处理后HU-VECAdipoR1表达增高。当吡格列酮浓度增至1μmol.L-1以上时,AdipoR1mRNA表达增加呈现差异。各组细胞Adi-poR2表达量间差别无显著性。结论AdipoR1很可能是胰岛素增敏剂吡格列酮改善内皮胰岛素敏感性的作用机制之