巴戟天丸防治D-半乳糖损伤成骨细胞骨丢失的作用及机制研究

目的 研究巴戟天丸防治D-半乳糖（D-gal）损伤成骨细胞骨丢失的作用及机制。方法 采用新生24 h Wistar大鼠提取的原代成骨细胞,利用D-gal对细胞进行干预,并给予巴戟天丸提取物行药物治疗。分别采用MTT法和碱性磷酸酶试剂盒评价细胞的增殖和分化水平;采用DCFH-DA荧光探针对成骨细胞内活性氧（ROS）水平进行测定。采用Western blotting法对磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌NADPH脱氢酶1(NQO1)等氧化相关蛋白的表达进行检测,并采用免疫荧光法测定细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)的核内表达水平。结果 巴戟天丸能显著提高D-gal干预细胞的增殖水平和ALP活性,并显著降低细胞内ROS水平。巴戟天丸能够显著促进细胞AKT蛋白的磷酸化,提高HO-1、NQO1的表达水平,进而激活PI3K/AKT信号通路。此外,巴戟天丸提取物还可显著促进成骨细胞核内Nrf2的表达,激活Nrf2信号通路,促进骨形成。结论 本研究首次明确了巴戟天丸可防治D-半乳糖损伤引起的成骨细胞骨丢失,其作用机制可能与调控PI3K/AKT和Nrf...     

BMP调控成骨细胞生物活性的实验研究

目的 探讨骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）对培养的正常人成骨细胞主要生物学行为的影响。方法分别以0．02、0．1、1μg/m3种浓度的BMP作用于成骨细胞,通过MTY法了解BMP的效应。以0．1μg/ml浓度的BMP作用于成骨细胞,测定BMP对成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phospbatase,ALP）活性及骨钙素（bone gla protein,BGP）合成等主要生物学特性的影响。结果BMP作用于成骨细胞,能促进ALP活性及BGP的合成。结论BMP能促进成骨细胞活性,并且其促进成骨增殖的效能具有浓度依赖性。     

芒柄花素对妊娠期糖尿病大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探究芒柄花素调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素单加氧酶-1(HO-1)/磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO1)信号通路对妊娠糖尿病（GDM）大鼠氧化应激损伤的影响。方法 取SD孕鼠于其腹腔内注射链脲佐菌素诱导建立GDM模型，随机分为模型组、芒柄花素低剂量（50 mg/kg）组、芒柄花素高剂量（100 mg/kg）组、ML385(Nrf2抑制剂，20 mg/kg)组、芒柄花素高剂量+ML385组，每组9只，另取9只正常妊娠大鼠设为对照组。以芒柄花素和ML385分组处理后，检测各组大鼠体质量、血清空腹血糖（FSG）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）水平，胚胎存活率、胎鼠体质量、胎盘整体形态及超微结构，血清及胎盘组织丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和总抗氧化能力（TAC），胎盘组织Nrf2/HO-1/NQO1通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较，模型组大鼠胎盘超微结构发生损伤，胚胎存活率下降，血清及胎盘组织GSH、SOD、TAC水平降低，胎盘组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达降低，大鼠体质量、FSG、TG、TC、胎鼠体质量升高...     

藏药三果汤调节Nrf2/HO-1信号通路干预高脂血症大鼠的作用机制研究

目的：基于Nrf2/HO-1信号通路探讨藏药三果汤对高脂血症大鼠保护作用及相关作用机制。方法：雄性SD大鼠48只,随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组（3.5 mg/kg）,藏药三果汤低、中、高剂量组（0.43 g/kg、0.86 g/kg、1.72 g/kg）,每组8只。正常组给予基础饲料喂养,其余各组给予H00016高脂饲料喂养,制备高脂血症大鼠模型,造模的同时,各给药组每天一次给予相应药物灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水（1次/d）,连续灌胃6周。实验期间每周固定时间称取各组大鼠体重一次,6周后试剂盒检测血清中血脂（TC、TG、LDL与HDL）及氧化指标（MAD、SOD与GSH）的水平。Western Blot法测定肝组织中Nrf2、HO-1、Keap1、NQO1蛋白表达,采用person相关性分析分析血脂与氧化指标之间的相关性。结果：与正常对照组比较,模型对照组的体重明显增加,血清中的TC、TG、LDL、MDA含量明显升高,而血清中HDL含量明显减低,SOD、GSH活力明显减低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,各给药组的体重减轻,血清中的TC、TG、LDL、MDA含量明显减低,血清中的HDL含量明显升高,SOD、GSH活力明显升高（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,模型对照组Keap1蛋白水平表达明显上调,Nrf2、HO-1与NQO1蛋白水平表达明显下调（P<0.05或P<0.01）,与模型对照组比较,三果汤低、高剂量肝组织中的Keap1蛋白水平表达明显下调,Nrf2、HO-1与NQO1蛋白水平表达明显上调（P<0.05或P<0.01）。相关性分析可见TG与SOD、HO-1及NQO1呈负相关,与Keap1呈正相关,TC与SOD、HO-1、GSH及Nrf2呈负相关,与Keap1及MDA呈正相关。结论：藏药三果汤可改善高脂血症大鼠体重及血脂水平,其机制可能与调节Nrf2/HO-1信号通路,改善氧化应激有关。     

中药复骨方对糖皮质激素致骨质疏松骨折大鼠骨代谢及骨密度的影响

目的 观察中药复骨方对糖皮质激素致骨质疏松骨折模型大鼠骨代谢及骨密度的影响.方法 将48只SD大鼠随机分为基础组、模型组及治疗组各16只.基础组仅给予肌内注射生理盐水1 mg/kg,模型组和治疗组予肌内注射地塞米松1 mg/kg,1次/d,3次/周,用药8周建立糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）模型.第8周末对3组大鼠手术造成单侧股骨闭合性骨折,骨折处采用金属内固定,复制GIOP骨折模型.术后第2天开始治疗组中药复骨方药液灌胃,持续8周.检测大鼠血清钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）指标,采用双能X线吸收法（DXA）测量大鼠股骨骨密度.结果 骨折术前,模型组大鼠骨密度值为（0.219±0.013）g/cm2,基础组骨密度值为（0.283±0.015）g/cm2,模型组骨密度值明显低于基础组（t=12.8970,P＜0.05）.实验16周末,治疗组股骨全长骨骨密度为（0.265±0.014）g/cm2,高于模型组（t=9.8403,P＜0.05）.实验12周末,治疗组大鼠血清Ca为（2.35±0.19） mmol/L、P为（2.47±0.23） mmol/L、ALP为（196.74±25.38） U/L及BGP为（1.33±0.25） μg/L,与模型组比较均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 中药复骨方可显著提高GIOP骨折大鼠股骨骨密度,升高GIOP骨折大鼠血清Ca、P、ALP及BGP活性,促进骨形成,有助于GIOP骨折的愈合.     

骨保护素参与高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化调节的机制初探 #br#

摘要：目的 以β-磷酸甘油诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化模型为研究对象，初步探讨骨保护素（OPG）干 预对VSMC钙化的影响及机制。方法 体外分离培养大鼠主动脉VSMC。PBS为对照组，以10 mmol/L β-磷酸甘油诱 导钙化10 d为钙化对照组，β-磷酸甘油诱导钙化同时予以剂量梯度（1、4、8 μg/L）的OPG干预为OPG干预组。茜素红 染色检测各组钙化结节形成情况。邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙沉积含量。比色法测定碱性磷酸酶（ALP）活性。 免疫蛋白印迹（Western blot）检测各组Notch1/RBP-JK通路蛋白的表达。结果 茜素红染色显示，与钙化对照组比较， OPG干预组大鼠VSMC钙化结节明显减少，OPG干预组的钙含量、ALP活性均明显下降（均P＜0.05），且有剂量依赖性。 Western blot结果显示，与钙化对照组比较，OPG干预组的Notch1、RBP-JK、Jagged1、Msx2蛋白表达水平明显下降（均P＜ 0.05）。结论 OPG可能通过下调Notch1/RBP-JK通路蛋白表达，参与大鼠VSMC钙化过程调节。     

Nrf2-ARE信号通路在左乙拉西坦抗癫痫中的作用

目的探讨Nrf2-ARE信号通路在左乙拉西坦抗癫痫中的作用,以及应用左乙拉西坦对认知功能的影响。方法成年♂SD大鼠36只,250~300 g,随机分为生理盐水对照(control)组、戊四唑(1,5-pentamethylene-1H-tetrazole,PTZ)癫痫模型组、左乙拉西坦(levetiracetam,LEV)对照组以及左乙拉西坦治疗组,每组9只。以Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力;用免疫印迹法测定海马组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量。结果与癫痫模型组相比,给予左乙拉西坦治疗的癫痫大鼠在Morris水迷宫测试中潜伏期明显缩短(P<0.05),海马Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达均明显增高(P<0.01)。结论左乙拉西坦能够改善癫痫大鼠的认知功能,其机制可能通过Nrf2-ARE通路,使HO-1、NQO1蛋白表达增多,起到抗癫痫的作用。     

咪达唑仑对低氧/复氧诱导的HK-2细胞凋亡及Nrf2/HO-1通路的影响

摘要：目的:探讨咪达唑仑对低氧/复氧诱导HK-2细胞凋亡的作用,及对核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）通路的影响。方法:HK-2细胞分为正常对照组、低氧/复氧组、不同浓度(2,4,8μmol·L-1)咪达唑仑组,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,试剂盒检测细胞活性氧簇（ROS）和丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性,蛋白质免疫印迹技术（WB）检测HK-2细胞Nrf2和HO-1表达水平。结果:相较于正常对照组,低氧/复氧组细胞活性及SOD活性明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率、ROS和MDA含量明显升高（P<0.05）。相较于低氧/复氧组,咪达唑仑各浓度组细胞活性、SOD活性及Nrf2和HO-1表达明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率、ROS和MDA含量明显降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性。结论:咪达唑仑可促进Nrf2/HO-1信号通路,提高细胞抗氧化能力,抑制低氧/复氧诱导的HK-2细胞凋亡。     

巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用及基于网络药理学的机制研究

目的 探讨巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的骨形成作用及其机制。方法 以新生24 h Wistar大鼠所分离的成骨细胞为研究对象,用 Aβ1-42 寡聚体对成骨细胞进行损伤,并用巴戟天丸组方水提物进行药物干预。分别采用MTT法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、过氧化氢酶（CAT）活性检测、超氧化物歧化酶（SOD）活性检测、谷胱甘肽（GSH）活性检测以及丙二醛（MDA）活性检测。采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨形态发生蛋白2（BMP2）、成骨特异性转录因子（RUNX-2）、骨保护蛋白（OPG）的表达水平;明确巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用后,采用网络药理学方法对潜在的作用机制进行预测。结果 巴戟天丸组方可显著促进Aβ损伤成骨细胞的增殖,提高 ALP、SOD、GSH 活性,抑制MDA活性,并促进骨形成相关蛋白BMP2、RUNX-2、OPG的表达。网络药理学分析显示,巴戟天丸组方发挥改善Aβ损伤成骨细胞的作用主要与AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路以及神经活性配体与受体的相互作用通路等有关。结论 明确巴戟天丸组方具有改善Aβ损伤成骨细胞的作用,并通过网络药理学方法探究其相关作用通路,为传统方剂巴戟天丸抗骨质疏松的临床应用提供借鉴。     

番石榴叶总黄酮对糖尿病大鼠肾脏Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 探讨番石榴叶总黄酮（TFPGL）对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及机制探讨。方法 雄性SD大 鼠24只,按随机数字表法分成对照组、糖尿病组、TFPGL治疗组,每组8只,后2组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素 （55 mg/kg）诱导糖尿病模型,TFPGL治疗组加用200 mg/kg TFPGL灌胃。12周后收集血、尿及肾组织,检测血糖（BS）、 血尿素氮（BUN）、尿蛋白/尿肌酐比值（ACR）及血清肌酐（SCr）的变化,HE染色检测肾脏病理改变,免疫荧光、免疫组 织化学染色及Western blot检测肾脏核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）表达。结果 与对照 组相比,糖尿病组BS、BUN、ACR及SCr明显升高,Nrf2表达增加,HO-1表达下降（均P＜0.05）;而给予TFPGL治疗 后,BS、BUN、ACR及SCr较糖尿病组明显降低,Nrf2、HO-1表达明显增加（均P＜0.05）。结论 TFPGL对糖尿病大鼠 肾脏病变具有一定的治疗效果,其机制可能与降低血糖和激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

藏药三果汤调节Nrf2/HO-1信号通路干预高脂血症大鼠的作用机制

目的 基于Nrf2/HO-1信号通路探讨藏药三果汤对高脂血症大鼠保护作用及相关作用机制。方法 雄性SD大鼠48只,随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组(3.5 mg·kg^-1),藏药三果汤低、中、高剂量组(0.43,0.86,1.72 g·kg^-1),每组8只。正常对照组给予基础饲料喂养,其余各组给予H10060高脂饲料喂养,制备高脂血症大鼠模型,造模的同时,各给药组每天1次给予相应药物灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水(1次·d-1),连续灌胃6周。实验期间每周固定时间称取各组大鼠体质量1次,6周后试剂盒检测血清中血脂[总胆固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)]及氧化指标[丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathio...     

运动训练对去势后雌鼠骨密度及血清生化指标的影响

目的探讨运动训练对于预防绝经后骨质疏松的生物学作用。方法选取雌性SD大鼠45只,随机分为正常对照组、单纯去势组以及去势+运动训练组3组,正常对照组行假手术,剩余2组行卵巢切除术。正常对照组、单纯去势组自由活动,去势+运动训练组术后每日行跑步训练。术后12周分别做所有动物的骨组织病理学检测,测量腰椎骨密度以及血清中钙磷离子、碱性磷酸酶和骨钙素水平。结果腰椎骨密度测定显示正常对照组及去势+运动训练组明显高于单纯去势组;血清中生化指标检测显示正常对照组及去势+运动训练组钙离子、碱性磷酸酶和骨钙素水平均明显低于单纯去势组;腰椎椎体组织病理学检测显示去势+运动训练组骨小梁质量优于单纯去势组。结论运动对于预防和治疗绝经后骨质疏松有着很好的效果。     

美洲大蠊提取物通过介导Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激的抗肝纤维化作用

目的:探究美洲大蠊提取物(PA-B)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化Nrf2/HO-1通路及氧化应激指标的影响.方法:采用腹腔注射40％ CCl4橄榄油溶液建立大鼠肝纤维化模型,48只大鼠随机分成正常对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱组、PA-B低剂量组、PA-B中剂量组、PA-B高剂量组,每组8只.治疗第4周末...     

核因子2相关因子2激动剂dh404对异氟醚诱导认知功能障碍大鼠脑海马组织的影响

目的 探讨核因子2相关因子2(Nrf2)激动剂激活Nrf2信号通路后对异氟醚诱导认知功能障碍大鼠脑海马组织的影响。方法 该研究起止时间为2018年12月至2019年8月。选择清洁级SD雄性大鼠24只，按照随机数字表法分为三组：对照组、异氟醚组、Nrf2激动剂dh404+异氟醚组（dh404组），每组8只。dh404组在吸入异氟醚前30 min腹腔注射Nrf2激动剂dh404(1.5 mg/kg)，对照组和异氟醚组注射等量的生理盐水。麻醉结束后24 h后各组大鼠进行Morris水迷宫测试；测试结束后立即处死大鼠，取脑海马组织。采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑海马组织Nrf2表达情况；采用蛋白质印迹法检测各组大鼠脑组织中血氧合酶1(HO-1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的蛋白表达；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组大鼠Nrf2、HO-1、Keap1的mRNA表达水平；采用TBA法检测丙二醛；采用WST-1法检测超氧化物歧化酶（SOD）；采用分光光度法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的表达水平。结果 与对照组相比，异氟醚组大鼠逃避潜伏期长，...     

葡萄籽原花青素联合亚低温通过ERK/Nrf2/HO-1通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的基于ERK/Nrf2/HO-1通路探讨葡萄籽原花青素(GSP)联合亚低温(MHT)对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、MHT组、GSP组、MHT+GSP组。采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型。评估各组大鼠神经功能缺损评分(NDS),TTC法观察并计算脑梗死面积,尼氏染色观察脑组织病理学变化,TUNEL法计算细胞凋亡指数,酶联免疫吸附法检测脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Westernblotting检测Bax、Bcl-2、p-ERK1/2、Nrf2和HO-1蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠NDS、脑梗死面积、AI、脑组织MDA水平、Bax、p-ERK1/2、胞质和胞核Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活力和Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,MHT组、GSP组和MHT+GSP组大鼠NDS、脑梗死面积、AI、脑组织MDA水平、Bax和胞质Nrf2蛋白显著降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活力、Bcl-2、p-ERK1/2、胞核Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。且MHT+GSP组的治疗疗效高于MHT组和GSP组。结论 MHT和GSP联合作用可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1通路,上调p-ERK1/2、胞核Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制氧化应激,发挥脑保护作用。     

穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法分析穿心莲内酯对RAW264.7细胞活力的影响。通过脂多糖处理RAW264.7细胞24 h建立细胞炎症模型,造模前1 h用穿心莲内酯2.5、5、10、20μmol/L预处理。荧光定量PCR法检测RAW264.7细胞内相关抗氧化应激酶基因和i NOS水平。穿心莲内酯单独处理RAW264.7细胞24 h,Western blotting法检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和Keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平。免疫荧光检测转录因子Nrf2在胞质及核内的分布情况。结果与对照组比较,穿心莲内酯剂量相关性地抑制RAW264.7细胞活力,差异具有统计学意义(P0.05、0.01、0.001)。穿心莲内酯显著抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的i NOS水平(P0.001),增加相关抗氧化酶基因HO-1、NQO1 m RNA水平。穿心莲内酯抑制Keap1表达,增加Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论穿心莲内酯可抑制脂多糖诱导的炎症反应,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路从而调控抗氧化酶HO-1、NQO1 m RNA表达水平相关。