miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的　探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法　（1）分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞。采用荧光定量PCR（qPCR）检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G（PTPRG）的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化。（2）取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组（si-NC组）、PTPRG敲低组（si-PTPRG组）和PTPRG敲低组＋miR-208a干扰组（si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组）,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化。结果　（1）miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组（P＜0.05）;miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组（P＜0.05）。生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合。（2）与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降（P＜0.05）;而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论　miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-34a靶向MMP2对TNF-α诱导人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA（miR）-34a靶向基质金属蛋白酶（MMP）2对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导人绒毛膜滋 养层细胞 HTR-8/SVneo 迁移和侵袭的影响。方法 体外培养人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo,利用 0.5 μg/L TNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱导组、NC组、miR-34a mimics组、iNC组、miR-34a inhibitor组;实时荧 光定量PCR（qPCR）检测各组细胞中miR-34a、MMP2 mRNA的表达;CCK-8法、Transwell法和划痕实验分别检测各组 细胞增殖、侵袭和迁移情况;蛋白免疫印迹法检测MMP2蛋白的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-34a和MMP2的 靶向关系。结果 与对照组比较,TNF-α 诱导组细胞 miR-34a 表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）, MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和NC组比较,miR- 34a mimics组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭 数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和iNC组比较,miR-34a inhibitor组细胞miR-34a表达水平、 细胞增殖抑制率显著降低（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著升高（P＜0.05）; miR-34a与MMP2具有靶向关系。结论 miR-34a可能通过负调控MMP2的表达抑制TNF-α诱导的人绒毛膜滋养 层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭。     

miR-132通过靶向KLF7抑制鼻咽癌细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-132靶向负调节Kruppel样因子7（KLF7）表达对鼻咽癌（NPC）细胞增殖和迁移的影响。 方法 将NPC细胞CNE-2Z分组：空白组、NC组、miR-132 mimics组、KLF7-OE组和miR-132 mimics+KLF7-OE组。 荧光定量PCR（qPCR）检测NPC组织和细胞及正常鼻咽组织和细胞中miR-132表达,Western blot检测KLF7蛋白表 达。TargetScan 网站预测及双荧光素酶检测验证KLF7与miR-132的靶向关系。CCK-8实验和Transwell 实验检测 CNE-2Z细胞增殖、迁移和侵袭能力,裸鼠成瘤实验、免疫组化法检测CNE-2Z细胞体内生长、瘤内血管情况。结果 鼻咽癌组织较正常鼻咽组织miR-132表达水平降低,KLF7蛋白表达增加;鼻咽癌CNE-2Z细胞较正常鼻咽上皮细胞 NP69 miR-132表达水平降低,KLF7蛋白表达增加（P＜0.05）。TargetScan预测及双荧光素酶检测显示,KLF7是miR- 132的靶基因。相比空白组、NC组,miR-132 mimics组CNE-2Z细胞中KLF7蛋白表达水平,36、48、60 h细胞增殖活 力,迁移和侵袭数量,肿瘤体积及微血管密度（MVD）显著降低（P＜0.05）,KLF7-OE组结果均相反（P＜0.05）。相比 miR-132 mimics组,miR-132 mimics+KLF7-OE组KLF7蛋白表达水平,36、48、60 h细胞增殖活力,迁移和侵袭数量、 肿瘤体积及MVD显著升高（P＜0.05）。结论 miR-132可通过负调控KLF7表达,影响NPC细胞的增殖、迁移及侵袭。     

EM患者子宫内膜组织的ESCs中miR-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

目的 探究子宫内膜异位症（EM）患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞（ESCs）中miR-539表达水平, 以及miR-539靶向基质金属蛋白酶9（MMP-9）对ESCs侵袭和迁移的影响。方法 收集60例EM患者子宫内膜异位 组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测miR-539和MMP-9 mRNA表达水平, 并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为miR-539 mimics 组、mimics NC组、miR-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移; Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果 EM组miR-539 mRNA水平 显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示miR-539与MMP-9 具有明显的靶向关系（P＜0.05）。与mimics NC组相比,miR-539 mimics组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数 量及MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）;与inhibitors NC组相比,miR-539 inhibitors组ESCs细胞增殖、划痕 愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。结论 miR-539可靶向调节MMP-9表达水 平,影响ESCs的增殖、迁移和侵袭。     

miR-124靶向趋化素样因子超家族成员6对胶质瘤细胞的影响

目的　探究微小RNA（miR）-124靶向调控趋化素样因子超家族成员6（CMTM6）对胶质瘤细胞的侵袭、迁移的影响。方法　实时荧光定量PCR（qPCR）法检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹实验检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中CMTM6蛋白表达水平。miRTarBase预测miR-124与CMTM6的结合位点,实验设mimic NC组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组、miR-124 mimic+CMTM6组,分别转染miR-124 mimic NC、miR-124 mimic、pcDNA、pcDNA+CMTM6于各组细胞中。qPCR法检测各组细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭、迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白免疫印迹实验检测细胞中CMTM6、细胞表面程序性死亡蛋白配体1（PD-L1）蛋白表达水平。结果　与OLN93相比,SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124表达水平降低（P＜0.05）,CMTM6 mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）,选择U251细胞进行后续实验。miRTarBase预测发现miR-124与CMTM6存在结合位点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与mimic NC组和miR-124 mimic+CMTM6组相比,miR-124 mimic组和miR-124 mimic+pcDNA组细胞中miR-124表达水平升高（P＜0.05）,CMTM6 mRNA表达水平降低。培养24、48、72、96 h时细胞OD450降低,侵袭、迁移细胞数量减少,CMTM6、PD-L1蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论　上调miR-124表达可靶向下调CMTM6的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭、迁移。     

长链非编码 RNA LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制。方法收集漯河市中心医院 2015年 10月至 2018年 5月因结直肠癌手术切除的组织标本 20例,以距离结直肠癌边缘 ≥3 cm的癌旁正常组织标本 20例为对照。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419和微小 RNA-132-3p(miR-132-3p)表达。构建干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达的结直肠癌 SW620细胞, MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡, Transwell检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(P21)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)蛋白、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)蛋白表达。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析 lncRNA LINC01419和 miR-132-3p的靶向关系。 si-LINC01419和 anti-miR-123-3p共转染,观察抑制 miR-132-3p表达对干扰 lncRNA LINC01419诱导的 SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果与癌旁组织［(1.00±0.09)、(1.01±0.08)］比较,结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419表达量( 2.74± 0.26)明显增加( P<0.05)miR-132-3p表达量( 0.51±0.05)显著减少( P<0.05)。干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达显著抑制 SW620细胞增殖、,迁移、侵袭、 cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,并促进细胞凋亡、 P21、Bax蛋白表达。 lncRNA LINC01419靶向调控 miR-132-3p的表达。抑制 miR-132-3p表达逆转了干扰 lncRNA LINC01419对结直肠癌细胞 SW620增殖、迁移、侵袭的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA LINC01419通过靶向 miR-132-3p调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR-512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、Ecadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克...     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00...     

miR-422a靶向激肽释放酶-4抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-422a靶向激肽释放酶-4（KLK4）对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧 光定量PCR法（qPCR）检测人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和人正常宫颈上皮细胞H8中miR-422a的表达;将宫颈癌HeLa 细胞分为 blank 组、miR-NC 组、miR-422a 组、mut miR-422a 组、miR-422a+pcDNA 组、miR-422a+pcDNA-KLK4 组。 CCK-8实验和Transwell实验检测各组宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的能力;TargetScan软件预测miR-422a可 能调控结合的靶基因,双荧光素酶活性实验对靶向关系进行验证。Western blot检测各组细胞KLK4蛋白表达水平。 结果 与人正常宫颈上皮细胞H8相比,宫颈癌HeLa、SiHa细胞中miR-422a呈现低表达（P＜0.01）,选择宫颈癌HeLa 细胞进行后续实验;与miR-NC组和blank组相比,miR-422a组培养4、6 d细胞增殖能力降低,培养6、12 h细胞迁移 和侵袭数量减少（P＜0.05）;与miR-422a+pcDNA组相比,miR-422a+pcDNA-KLK4组培养4、6 d细胞增殖能力明显 升高,培养6、12 h细胞迁移和侵袭数量增加（P＜0.01）。TargetScan软件预测发现KLK4基因与miR-422a存在结合位 点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与 miR-NC 组相比,miR-422a 组中 KLK4 蛋白的表达水平降低,与 miR- 422a 组相比,mut miR-422a 组中 KLK4 蛋白的表达水平升高（P＜0.01）,与 miR-422a+pcDNA 组相比,miR-422a+ pcDNA-KLK4组中KLK4蛋白的表达水平升高（P＜0.01）。结论 miR-422a可通过靶向KLK4蛋白的表达抑制宫颈 癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

白芍总苷调控舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

探讨白芍总苷(TGP)对舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。TGP作用HSC3细胞或抑制LINC00319表达后,MTT检测HSC3细胞增殖,Transwell检测HSC3细胞的迁移和侵袭,蛋白印迹(Western Blot)检测细胞中CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白水平,qRT-PCR检测细胞中LINC00319和miR-608水平,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00319和miR-608调控关系。TGP或抑制LINC00319表达后,HSC3细胞抑制率、p21蛋白及miR-608水平升高(P<0.05),细胞迁移和侵袭数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平及LINC00319水平降低(P<0.05)。LINC00319靶向负调控miR-608表达,LINC00319过表达逆转TGP对HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。TGP可能通过调控LINC00319/miR-608轴抑制舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA LINC00858靶向微小 RNA-363-3p促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨LINC00858通过靶向miR-363-3p对肝癌HCCLM3细胞生物学行为的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月青海省第五人民医院收治的肝癌病人30例,获取其肝癌组织及其癌旁组织.设置si-NC组、si-LINC00858组、si-LINC00858+anti-miR-NC组和si-LINC00858+anti-miR-363-3p组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测LINC00858和miR-363-3p表达水平;双荧光素酶报告实验验证LINC00858和miR-363-3p的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测相关蛋白表达.结果 肝癌组织中LINC00858高表达(2.85±0.27),miR-363-3p低表达(0.58±0.05).LINC00858靶向调控miR-363-3p;抑制LINC00858能够上调p21表达,下调细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,降低细胞活力、迁移数、侵袭数(P<0.05).干扰miR-363-3p表达逆转了抑制LINC00858表达对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 抑制LINC00858通过靶向上调miR-363-3p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

miR-130b-3p靶向肝细胞生长因子调控妊娠滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 研究miR-130b-3p靶向肝细胞生长因子(HGF)调控妊娠滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制.方法 以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测正常妊娠妇女胎盘组织和妊娠期子痫前期患者胎盘组织中miR-130b-3p的表达.分别建立抑制miR-130b-3p表达和过表达HGF的JEG-3细胞株,用噻唑蓝法检测细胞活...     

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的　探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞迁移和侵袭作用的影响。方法　qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞（乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D）LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21（实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组）,抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组）,过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组）。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果　TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织（0.48±0.03 vs. 1.03±0.06,t=11.714,P＜0.01）,miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织（2.93±0.17 vs. 1.02±0.04,t=15.593,P＜0.01）。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A（P＜0.01）。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达（P＜0.05）。结论　LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。     

miR-149抑制结直肠癌细胞迁移的分子机制研究

目的 探讨miR-149对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及其作用机制。方法 实时荧 光定量PCR（q-PCR）方法检测miR-149在CRC细胞SW620、LS174T和人结肠上皮细胞FHC中的表达水平;荧光素酶 分析法验证 STAT3 与 miR-149 之间的靶向结合关系;q-PCR 和 Western blot 检测 miR-149 过表达对 CRC 细胞中 STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。将miR-149 mimics与STAT3过表达质粒单独或者共转染至CRC细胞 中,并分为miR-NC组、miR-149 mimics组、miR-149 mimics+pEGFP/STAT3组。采用CCK-8法、Transwell法、细胞划 痕法、流式细胞术分别检测各分组CRC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡情况。结果 与正常结肠上皮细胞FHC相比, CRC 细胞 SW620、LS174T 中 miR-149 表达水平受到抑制（P＜0.01）。荧光素酶实验证实,在 CRC 细胞中 STAT3 是 miR-149的一个直接靶基因。过量表达miR-149抑制STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白的表达,降低CRC细胞增殖能 力、侵袭能力以及迁移能力（P＜0.01）。同时,过量表达 miR-149 也可促进 CRC 细胞的凋亡（P＜0.01）。但过表达 STAT3可解除miR-149对CRC细胞增殖、侵袭以及迁移能力的抑制作用。结论 miR-149通过靶向STAT3抑制结直 肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移,同时促进细胞的凋亡。