载乳铁蛋白壳聚糖微球/nHA/Co复合材料的制备

目的:制备载乳铁蛋白壳聚糖微球/nHA/Co复合材料作为组织工程材料拟修复骨缺损。方法:通过乳化交联法法制备载乳铁蛋白壳聚糖微球,化学沉淀法制备纳米羟基磷灰石,改良酸酶法提取Ⅰ型胶原,应用京尼平交联制备复合材料,SEM检测材料的微观结构,测定壳聚糖微球对乳铁蛋白的载药率和包封率。结果:复合材料及各组成成份扫描电镜观察均具有较好的微观形态,壳聚糖微球对乳铁蛋白的载药率为(1.06±0.06)%,包封率为(88.2±2.9)%。结论:载乳铁蛋白壳聚糖微球/nHA/Co复合材料具有较好的微观形态。     

3D打印制备不同重量比例的n-HA/PLA/PVA复合膜性能比较

目的:通过3D打印的方法制备的不同重量比例的纳米羟基磷灰石/聚乳酸/聚乙烯醇(n-HA/PLA/PVA)复合膜,并对其相关性能检测。方法:采用3D打印技术制备不同重量比例的n-HA/PLA/PVA复合膜,分别为PLA/PVA复合膜、15%n-HA/PLA/PVA复合膜、50%n-HA/PLA/PVA复合膜、75%n-HA/PLA/PVA复合膜。扫描电镜下观察各组膜形态,对其力学性能、细胞毒性及动物实验相应指标进行检测。结果:扫描电镜下观察,n-HA/PLA/PVA复合膜呈现三维网状结构,各材料间相互结合,孔隙分布不均,大小不一。随着n-HA质量浓度的提高,电镜下见各材料间孔隙逐渐减小,形成结构均匀的复合膜。力学性能及吸水率检测中,随着nHA含量的增加,n-HA/PLA/PVA复合膜的拉伸强度及吸水率呈下降趋势;细胞毒性检测,不同比例复合膜的细胞增殖率无明显差别,无细胞毒性。动物实验测量牙周菌斑指数及龈沟出血指数未发现不同比例n-HA/PLA/PVA复合膜有统计学差异。结论:3D打印不同比例的n-HA/PLA/PVA复合膜具有良好的物理性能和细胞生物相容性,n-HA比例更高的复合膜可能具有更好的物理性能及良好的生物相容性。     

纳米羟基磷灰石-壳聚糖复合材料对细胞粘附的影响

目的：制备纳米羟基磷灰石-壳聚糖（nano hydroxyapatite-chitosan,nHA/CS）复合材料,观察其对成纤维细胞粘附行为的影响.方法：将溶胶-凝胶法制得的纳米羟基磷灰石充分混合于2%壳聚糖乙酸溶液中,冷冻干燥法制备纳米羟基磷灰石-壳聚糖复合材料,并对材料进行X射线衍射分析（XRD）、红外光谱分析（FT-IR）、扫描电镜（SEM）、透射电镜（TEM）检测.将NIH3T3细胞分别接种于复合材料和致密羟基磷灰石（dense hydroxyapatite,HA）表面,细胞计数法计算细胞粘附数量,扫描电镜下观察细胞粘附形态.结果：XRD分析结果表明溶胶-凝胶法制备的HA和nHA的晶体结构符合标准羟基磷灰石的空间6方晶体结构.TEM分析结果显示nHA/CS材料中羟基磷灰石为纳米级粉体.接种5、7、9 d后nHA/CS材料表面的细胞粘附数量高于HA组,差异有显著性（P＜0.05）.扫描电镜下,细胞以多个突起粘附于复合材料表面,并具有良好的伸展状态.结论：与HA相比,nHA/CS材料更有利于成纤维细胞的粘附,生物相容性良好.     

纳米羟基磷灰石-壳聚糖复合材料对NIH3T3细胞粘附增殖的影响

目的制备纳米羟基磷灰石-壳聚糖(nano hydroxyapatite-chitosan,nHA/CS)复合膜和三维立体支架,观察复合材料的两种状态对成纤维细胞粘附形态的影响。方法制备nHA/CS复合膜和HA/CS复合膜,然后将两组膜分别与NIH3T3细胞共培养,倒置显微镜下观察细胞在材料表面粘附形态同时进行粘附细胞数量的测定;冷冻干燥法制备nHA/CS三维支架,将HA制成同样大小的圆盘状,然后将NIH3T3细胞分别与两组材料共培养,扫描电镜观察细胞在两种材料表面的粘附形态同时进行细胞粘附数量的测定和能谱分析。结果与NIH3T3细胞共培养5、7d后nHA/CS组细胞粘附数量高于HA/CS组和HA组,差异有显著性。结论nHA/CS复合材料有促进细胞粘附增殖作用。     

纳米羟基磷灰石表面阿伦膦酸钠和I型胶原蛋白复合膜的制备

目的:在纳米羟基磷灰石(nHA)涂层表面制备稳定可重复的阿伦膦酸钠(ALN)和I型胶原蛋白(COL I)复合膜。方法:在纯钛(PT)表面电化学沉积nHA涂层,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)为偶联剂,在涂层表面结合ALN和COL I,制备nHA/ALN/COL I和nHA/COL I/ALN复合膜。通过扫描电子显微镜(SEM),X射线能谱分析仪(EDS)和X射线衍射仪(XRD)表征nHA涂层,通过X射线光电子能谱仪(XPS)和傅里叶红外光谱仪(FTIR)表征复合膜。结果:ALN和COL I可通过偶联剂结合于nHA涂层,改变其结合次序,可分别形成nHA/ALN/COL I和nHA/COL I/ALN复合膜。结论:通过化学结合法形成的nHA/ALN/COL I和nHA/COL I/ALN复合膜具有不同的ALN缓释潜力。     

PLA微球持续释放rrIGF-1对2型糖尿病大鼠种植体骨结合的影响

目的:通过可降解生物聚合物PLA包裹rrIGF-1制备局部持续释放系统,促进2型糖尿痛大鼠种植体骨结合率.方法:将建模成功的20只2型糖尿病大鼠(血糖值>300me/ml的GK大鼠)分为2组PLA微球组(MS group)和对照组(con-trol group),采用W/O/W双层乳液法制备负载rrIGF-1的PLA微球,做SEM、CLSM分析及释放动力学曲线,证实其持续释放能力后作用于MSgroup,然后分别于种植体植入4周和8周后作组织形态学分析,比较两组之间的差异.结果:用此法制备的PLA微球包裹率较高,有持续释放rrIGF-1的作用.PLA微球组(MS group)较对照组(control group)在种植术后4w和8w的BIC(骨-种植体结合率)和TVB(骨小梁容量)均较高(P相似文献   

骨形态发生蛋白2壳聚糖纳米缓释载体的制备及性能测定

目的 制备负载骨形态发生蛋白2（BMP-2）的壳聚糖纳米球,测定纳米球粒径、zeta电位、形态、体外降解和体外释放性能,探讨负载BMP-2的壳聚糖纳米球作为缓释载体的可行性。方法以壳聚糖（chitosan）和三聚磷酸钠(tripolyphosphate )为原料,采用离子交联法制备壳聚糖纳米球。应用纳米粒度分析仪及zeta电位测定仪检测微球粒径、分布及zeta电位,透视电镜下测定其表面形态。Elisa法测定包封率、载药率及体外释放率。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果离子交联法制备的BMP-2壳聚糖纳米球成球形好,球形较规则,分散较均匀,无团聚,表面较光滑;平均粒径为150.85 nm,分散指数PI=0.37,Zeta电位为+35.42 mV,包封率为(68.24±3.83)%,载药率为(56.83±2.26)%。体外释药试验显示,BMP-2可从壳聚糖纳米微球中缓慢释放,释放行为符合双相动力学规律,释放过程可达30 d。结论以壳聚糖和三聚磷酸钠为原料,可成功制备具有良好缓释能力的BMP-2纳米球,为组织工程骨的进一步应用提供依据。     

纳米羟磷灰石/聚酰胺66糊剂根管充填疗效观察

目的:观察纳米羟磷灰石/聚酰胺66(nHA/PA66)作为根管充填材料的近期临床疗效.方法:慢性根尖周炎患牙183个,随机分3组,分别行nHA/PA66糊剂、Vitapex糊剂、氧化锌糊剂+牙胶尖根管充填.术后3 m、6 m复查,评价其临床疗效.结果:3 m、6 m有效率分别为:nHA/PA66组95.83%、97.78%,Vitapex组93.75%、98.28%,氧化锌组81.69%、83.87%.nHA/PA66组和Vitapex组与氧化锌组之间有显著性差异(p<0.05).nHA/PA66组和Vitapex组之间无显著性差异.各观察组3 m、6 m之间疗效差异无显著性.结论:nHA/PA66组和Vitapex组近期临床疗效优于氧化锌组.nHA/PA66糊剂根管充填的近期临床疗效较好.     

电纺聚己内酯/Ⅰ型胶原蛋白/纳米锆酸钙复合支架的制备及其生物相容性的研究

目的:制备聚己内酯(PCL)/Ⅰ型胶原(COLI)/纳米锆酸钙(nCZ)复合支架用于骨组织再生,评价其性能及对人牙周膜细胞(PDLCs)生物相容性及成骨分化的影响.方法:用静电纺丝法制备PCL/COLI、PCL/COLI/纳米羟基磷灰石(nHA)和PCL/COLI/nCZ复合支架,通过扫描电子显微镜表征支架形貌,能量色...     

3D打印聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架与丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架的性能比较

目的　采用3D打印技术制备3D打印聚乙烯醇 /纳米羟基磷灰石支架与丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架,并对其进行表征。方法　采用3D打印技术制作聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架以及丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石复合支架。进行孔隙率、扫描电镜、压缩力学性能及细胞毒性检测。 结果　①扫描电镜观察：丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架结构规则,网状结构清晰,交通支连续,层层之间搭接良好,支架空隙均一。相同倍数下,聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架网状结构连续性较差。②压缩力学性能：相同应力情况下（10 MPa）,3D打印丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架的应变大于3D打印聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架。③孔隙率：3D打印丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架的孔隙率大于3D打印聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架。④细胞毒性检测：不同时间点两组支架的细胞增殖率无明显差别。结论　结果表明：3D打印聚乙烯醇 /纳米羟基磷灰石支架与丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架具有良好的理化性能和细胞相容性。     

嵌入BMP-2蛋白微球双重缓释纳米纤维支架对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响

目的: 利用静电纺丝技术构建骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)缓释纳米微球(nanospheres,NPs）的聚己内酯（polycaprolactone,PCL）复合纳米纤维支架材料,评价其对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响。方法: 采用去溶剂法和静电自组装技术制备载BMP-2的壳聚糖纳米微球,检测其形貌、粒径及成分,BMP-2蛋白包封率及体外缓释情况。利用静电纺丝技术制备含BMP-2纳米微球的PCL复合支架材料,检测其形貌、亲水性能及BMP-2蛋白的缓释情况。进行体外细胞学实验,观察细胞在材料中的生长情况,检测材料促细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、相关基因和矿化结节的形成情况。采用SPSS 21.0软件包进行统计学分析。结果: 成功制备出结构稳定的纳米微球结构,微球载药率高并可实现BMP-2的持续释放。PCL/BNPs支架材料组有着良好的亲水性能并有利于细胞增殖、分化。体外细胞实验结果显示,细胞在支架上铺展良好,黏附数量增加。ALP和相关成骨基因COL1、OPN和RUNX2均表达增高,钙结节大小和数量明显增加。结论: BMP-2缓释纳米微球的聚己内酯复合纤维支架材料可为骨组织工程的发展提供新的材料选择。     

PLA-PEG复合支架材料体外细胞相容性的实验研究

目的:探索新型PLA-PEG(polylactic acid-polyethylene glycol block copolymers)复合支架材料体外细胞相容性。方法:支架材料分为实验组A(PEG/PLA为16∶0)、实验组B(PEG/PLA为13∶0)、对照组C,单纯聚乳酸(polylacticacid,PLA)。贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),诱导生成成骨细胞,接种于支架材料上。通过观察种子细胞在支架材料上的吸附迁移、生长增殖情况,验证各组细胞材料复合体的成骨活性,比较分析不同支架材料之间的差异。结果:兔成骨细胞在新型PLA-PEG三维支架材料表面分布较为均匀,生物学行为活跃。实验组A与B的细胞粘附及增殖能力均强于对照组(P<0.05)。结论:三种支架均具有较好的细胞相容性,但实验组A与B的细胞相容性更好,更适宜作为支架材料与成骨细胞共同培养,以获得具有成骨能力的三维立体结构组织工程骨。     

PRP对纳米HA/PLGA复合支架上鼠骨骼肌卫星细胞增殖和成骨活性的影响

目的:研究富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nHA)/聚乳酸乙醇酸(poly lactic acid-co-glycolic acid,PLGA)(nHA/PLGA)支架上SD大鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)黏附、增殖和成骨活性的影响。方法:将体外培养、扩增的鼠MSCs与同一供体来源的PRP混合,滴加到nHA/PLGA支架上,形成MSCs/PRP/nHA/PLGA复合物(实验组),继续在体外培养,以MSCs/nHA/PLGA复合物作为对照组。通过扫描电镜观察MSCs在支架上黏附、生长和增殖情况;水溶性四氮唑法(WST-1)法测定MSCs增殖情况;碘化丙啶(PI)与钙黄绿素-AM(Calcein-AM)检测MSCs的荧光活性;组织化学方法检测培养液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OC)含量;RT-PCR检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达。结果:扫描电镜观察显示,实验组大量MSCs黏附在支架表面及其洞壁上,并大量增殖和分泌骨基质,而对照组复合材料表面细胞附着较少;WST-1测定实验组吸光度值明显大于对照组(P<0.05);PI荧光染色二组的死细胞数量均较少;实验组ALP活性和OC含量均较对照组增高明显(P<0.05);RT-PCR结果显示OPN在实验组中表达明显增强。结论:PRP促进了nHA/PLGA支架上鼠MSCs黏附、增殖和成骨分化。     

Fabrication and release behavior of a novel freeze-gelled chitosan/gamma-PGA scaffold as a carrier for rhBMP-2.

OBJECTIVE: The aim of this study was to fabricate a novel composite porous scaffold by blending chitosan and gamma-poly(glutamic acid) (gamma-PGA) for the sustained delivery of rhBMP-2. METHODS: Chitosan and gamma-PGA were blended to fabricate a novel porous scaffold by the freeze-gelation method. For comparison, scaffolds made of freeze-dried chitosan, freeze-dried PLLA, and freeze-gelled chitosan were also prepared. The scaffolds were loaded with rhBMP-2, and then the controlled release of rhBMP-2 from the scaffolds was assessed by ELISA. RESULTS: The freeze-gelled chitosan/gamma-PGA scaffold (M0=318.29 ng, k=0.32 d(-1)) gave the most satisfactory release curve, followed by the freeze-gelled chitosan (M0=392.76 ng, k=0.59 d(-1)), freeze-dried chitosan (M0=229.21 ng, k=2.28 d(-1)), and freeze-dried PLLA (M0=8.4 ng, k=482.54 d(-1)) scaffolds. In the stability test, p-dioxane (the solvent for PLLA) seriously deteriorated rhBMP-2, whereas acetic acid (the solvent for chitosan) did not. SIGNIFICANCE: A novel chitosan/gamma-PGA composite scaffold for the controlled release of rhBMP-2 was established, with an enhanced release amount and sustained release behavior. This scaffold has many potential applications in bone regenerative therapies.     

PLGA微囊支架材料的制备及对成骨细胞粘附和增殖的影响

[摘要]目的：制备一种新型结构的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly（1actic—co—glycolicacid,PLGA]微囊支架,对其进行表征,并检测其对成骨细胞增殖与粘附的影响。方法：采用复乳法制备PLGA微囊,以激光粒度仪分析其粒径分布,筛选出合适的粒径大小,通过二氯甲烷蒸汽熏蒸使微囊结合,再经过烧结最终形成三维支架,通过扫描电子显微镜观察微囊及微囊支架形态。将MC3T3-E1成骨细胞接种到该支架上,通过扫描电镜观察细胞在支架上的粘附形态,通过CCK-8法检测细胞增殖的情况,并与无支架对照组进行比较。结果：制备的PLGA微囊支架具有一定孔径和孔隙率,具有三维连通的多孔结构,且孔隙结构均匀。细胞可在支架表面粘附生长。微囊支架上的细胞增殖活性高于对照组。结论：本方法制备的PLGA微囊支架具有一定的孔隙率和内部连通性,有利于细胞的粘附和增殖,在骨修复中有应用前景。