蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法:人黑色素瘤细胞株A375细胞体外培养,将对数生长期的A375细胞以不同浓度的蛇床子素处理,MTT法检测A375细胞增殖;流式细胞术检测A375细胞凋亡;RTPCR法检测A375细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达水平;Western blotting检测A375细胞IκB-α、p-NF-κB、NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:蛇床子素可降低A375细胞增殖率以及Bcl-2 mRNA、p-NF-κB和Bcl-2蛋白表达水平,呈浓度依赖性;同时增加A375细胞凋亡率以及Bax mRNA、IκB-α、Bax蛋白表达水平,呈浓度依赖性,但对NF-κB表达无明显影响。结论:蛇床子素能诱导A375细胞增殖抑制和凋亡,呈浓度依赖性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

miR-15b在恶性黑色素瘤A375细胞中的表达及其对细胞转移和侵袭的影响

目的 研究微小RNA-15b（microRNA-15b,miR-15b）在恶性黑色素瘤A375细胞中的表达,以及miR-15b对恶性黑色素瘤细胞转移和侵袭能力的影响。方法 应用荧光实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）方法检测恶性黑色素瘤A375细胞与正常黑素细胞HM中miR-15b的表达水平。沉默恶性黑色素瘤A375细胞中miR-15b的表达后,应用划痕实验检测miR-15b对恶性黑色素瘤A375细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-15b对恶性黑色素瘤A375细胞转移和侵袭能力的影响。结果 miR-15b恶性黑色素瘤A375细胞中的表达水平显著高于正常黑素细胞。沉默恶性黑色素瘤细胞中miR-15b的表达后,细胞迁移距离、细胞转移和侵袭能力均受到显著抑制。结论 miR-15b在恶性黑色素瘤A375细胞中表达显著升高并可促进恶性黑色素瘤A375细胞转移和侵袭。     

人黑色素瘤A375细胞中B7-H4表达的实验研究

目的:探讨B7-H4在人黑色素瘤A375细胞中表达及临床意义。方法:体外培养人黑色素瘤A375细胞,倒置显微镜观察细胞形态;采用RT-PCR和Western blot检测B7-H4 mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果:B7-H4 mRNA和蛋白在A375细胞中表达均增高。结论:B7-H4在人黑色素瘤A375细胞中表达升高,可为黑色素瘤的诊断和治疗提供参考。     

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的:探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用.方法:用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A375细胞活力;流式细胞术(FCM)检测A375细胞的凋亡诱导及杀伤作用(P＜0.01).结果:芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系,浓度分别为200 mg/ml、400 mg/ml、600 mg/ml和800 mg/ml时,A375细胞的凋亡率及坏死率分别为2.39%、8.85%、8.71%、5.16%和1.65%、1.51%、22.10%、82.80%.结论:芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,且诱导A375细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系.     

白细胞介素18经toll样受体4/髓样细胞分化因子88/核转录因子-κB通路促进支气管平滑肌细胞增殖与迁移

目的 探讨白细胞介素18 (IL-18)经toll样受体4 (TLR4)/髓样细胞分化因子88 (MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路促进支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖与迁移。方法 采用不同浓度IL-18、不同时间处理BSMC,确定实验条件。细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性,Transwell小室检测细胞迁移,Western blot法检测相关蛋白的表达。抑制剂Eritoran特异性阻断TLR4/MyD88/NF-κB通路,检测TLR4/MyD88/NF-κB通路阻断后对细胞周期、细胞增殖、细胞迁移及TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达的影响。结果 IL-18可促进支气管平滑肌细胞细胞增殖,提高细胞迁移能力,上调TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。Eritoran可抑制IL-18引起的BSMC细胞增殖,上调G1期细胞百分比,下调S期、G2期细胞百分比,抑制细胞迁移,降低TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。结论 IL-18可能通过上调TLR4/MyD88/NF-κB通路中信号分子的表达,促进了平滑肌细胞增殖和迁移。     

TLR4与NF-κB在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的检测TLR4与NF-κB在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和正常肺组织中的表达情况,探讨其临床意义。方法采用免疫组化方法检测TLR4与NF-κB在49例非小细胞肺癌组织和20例癌旁正常肺组织中的表达,分析TLR4和NF-κB与非小细胞肺癌病理分级、临床分期、淋巴结转移等的相关性以及TLR4和NF-κB之间的相关性。结果TLR4和NF-κB在NSCLC组织中的表达阳性率分别为55.1%和69.4%,均显著高于正常肺组织中的15%和10%(P<0.05)。同时还发现TLR4的表达与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.05),NF-κB在腺癌中的表达明显高于鳞癌(P<0.05),TLR4和NF-κB的表达呈正相关(P<0.05)。结论TLR4与NF-κB可能在NSCLC的发生、发展过程中起重要作用。     

黄连素抑制肺腺癌核转录因子-κB活性的影响及其与顺铂耐药关系研究

目的:观察黄连素对肺癌细胞中顺铂细胞毒性的影响并探讨其机制.方法:选用肺癌顺铂(CDDP)耐药细胞株A549/CDDP,四甲基偶氮唑蓝法测定药物对细胞存活率的影响,蛋白免疫印记法测定IκBα、p65的表达水平.并用p65 siRNA转染A549/CDDP细胞沉默p65的表达,而降低核转录因子(NF)-κB的活性.结果:CDDP耐药肺癌细胞A549/CDDP与敏感细胞A549相比,p65的表达水平显著升高,而IκBα的表达水平显著降低,p65 siRNA沉默A549/CDDP细胞p65的表达降低NF-κB的活性后能显著逆转CDDP耐药(P<0.01);20 μmol/L的黄连素能显著增加A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性,且5~20 μmol/L的黄连素能浓度依赖性地降低A549/CDDP细胞中p65的表达,但增加IκBα的表达(P<0.01).结论:黄连素通过抑制NF-κB的活性逆转肺腺癌细胞中CDDP耐药.     

青蒿琥酯对高糖诱导的肾小管上皮细胞TLR4、NF-κB表达及合成的影响

目的：探讨青蒿琥酯( Art)对高糖诱导下的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB( NF-κB)表达及合成的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为6组：正常对照组、高糖组、Art小剂量组、Art中剂量组、Art高剂量组、依那普利组。培养48 h后收集各组细胞,采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA 含量;采用 Western blot 法检测细胞TLR4、NF-κB蛋白表达水平。结果①与正常对照组比较,高糖组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高( P <0．05);②与高糖组比较, Art 小、中、高剂量组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低,且呈剂量依赖性(P<0．05);③与依那普利组比较,Art小、中、高剂量组细胞TLR4水平表达均升高,且Art高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。与依那普利组比较,Art小、中剂量组细胞NF-κB水平表达升高,Art高剂量组细胞NF-κB水平表达降低,且Art中、高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。结论 Art可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下NRK-52E细胞TLR4、NF-κB的高表达及合成。     

蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、 迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)的增殖、迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响和机制研究。方法 CCK-8检测蒲公英甾醇的毒性;ELISA法检测MH7A细胞中炎性介质的分泌水平;EDU检测MH7A细胞的增殖能力;Transwell法检测MH7A细胞的迁移能力;细胞流式术检测MH7A细胞的凋亡能力;Western blot法检测MH7A细胞中TLR4、p-NF-κB p65和NF-κB p65蛋白的表达情况。结果 蒲公英甾醇的最佳作用浓度为5、10、15μg/ml;经LPS诱导后,蒲公英甾醇对MH7A细胞炎性因子的分泌量有抑制作用(P<0.05);与LPS组比较,不同浓度的蒲公英甾醇使MH7A细胞的增殖能力和迁移能力下降,凋亡率提高(P均<0.05);Western blot法检测结果显示,与LPS组比较,不同浓度蒲公甾醇使TLR4蛋白表达降低,NF-κB p65的磷酸化程度降低(P均<0.05)。结论 蒲公英甾醇能降低MH7A细胞的增殖能力、迁移能力并诱导其凋亡,可能与其降低TLR4和NF-κB p65的磷酸化程度有关。     

TLR4 mAb对人正常肝内胆管上皮细胞LPS-TLR4-NF-κB通路的影响

目的对脂多糖( LPS)及Toll样受体4单克隆抗体( TLR4 mAb)作用于体外培养的人肝内胆管细胞( HiBEC)后其TLR4 mRNA和核转录因子-κB( NF-κB) mRNA的表达情况进行了研究。方法体外培养HiBEC,采用 RT-PCR 法检测经LPS和不同浓度的TLR4 mAb作用后,HiBEC细胞株中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达情况。结果 LPS可以上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达( P<0．05);而 LPS 作用于 TLR4 mAb 处理后的 HiBEC 中其TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达下调;高质量浓度TLR4 mAb使NF-κB mRNA的表达下调更明显( P<0．05)。结论LPS 能上调HiBEC中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达;而 TLR4 mAb 则能拮抗 LPS 对 HiBEC 的刺激作用,下调TLR4 mRNA和NF-κB mRNA 的表达。     

n-3多不饱和脂肪酸对大鼠酒精性脂肪肝炎性反应及肝纤维化的影响

目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)对大鼠酒精性脂肪肝炎性反应、肝纤维化的影响及机制。方法选择40只雄性SD大鼠,编号后采用随机数字表法分为对照组、模型组、n-3PUFA组、n-3PUFA+内毒素(LPS)组,每组各10只,对照组给予正常饲料及每日生理盐水灌胃,另外3组大鼠采用酒精灌胃的方式建立酒精性脂肪肝模型,n-3PUFA组给予n-3PUFA干预、n-3PUFA+LPS组给予n-3PUFA及Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS干预。8周后,处死大鼠取肝和血清标本,观察各组大鼠肝组织病理变化,测定4组大鼠肝脏中TLR4、核因子-κB (NF-KB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素1(IL-1)的表达水平,以及血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)、透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)的含量。结果对照组大鼠肝组织结构正常,模型组可见弥漫性肝细胞脂肪变性,n-3PUFA组肝细胞脂肪变性减轻,而n-3PUFA+LPS组肝组织脂肪变性较n-3PUFA组加重。模型组大鼠肝脏中TLR4、NF-κB、TNF-α、MCP-1和IL-1的mRNA表达水平及血清中TGF-β1、HA和C-Ⅳ的含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);n-3PUFA组肝脏中TLR4、NF-κB、TNF-α、MCP-1和IL-1的mRNA表达水平及血清中TGF-β1、HA和C-Ⅳ的含量低于模型组,差异有统计学意义(P <0.05);n-3PUFA+LPS组肝脏中TLR4、NF-κB、TNF-α、MCP-1和IL-1的mRNA表达水平及血清中TGF-β1、HA和C-Ⅳ的含量高于n-3PUFA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 n-3PUFA对大鼠酒精性脂肪肝炎性反应及肝纤维化具有抑制作用,且该作用与TLR4/NF-κB信号通路阻断有关。     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

孟鲁司特钠通过抑制TLR4/NF-κB信号通路影响哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡

目的：探讨孟鲁司特钠（Mon）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响,阐明哮喘大鼠气道重塑及炎症反应的分子机制。方法：采用卵清蛋白致敏和激发构建急性哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞,取第5代细胞用于实验。实验分为对照组（正常气道平滑肌细胞）、模型组（哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞）和治疗组（哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞+Mon干预）。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测各组细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）和转化生长因子β1（TGF-β1）水平,Western blotting法检测各组细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Toll样受体4（TLR4）和核因子κB（NF-κB）p65蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平。结果：与对照组比较,模型组和治疗组细胞活性明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,IL-6和TGF-β1水平升高（P<0.05）,PCNA、CyclinD1、Bcl-2、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平及TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,治疗组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,IL-6和TGF-β1水平降低（P<0.05）,PCNA、CyclinD1、Bcl-2、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平及TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05）,而Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：Mon可抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡,减轻哮喘气道炎症反应,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

TLR4表达水平与COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌功能的关系

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)表达水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)合成分泌功能的关系.方法 建立大鼠COPD模型,HE染色判定模型建立,免疫组织化学染色观察对照组与COPD模型组肺组织动脉平滑肌层TLR4的表达.分离培养鉴定原代PASMCs,脂多糖(LPS)、TLR4的特异性抑制剂TAK-242干预细胞,实验分组:空白组、LPS组、TAK-242组、LPS+ TAK-242组,Western blot检测各组PASMCs中TLR4的表达,ELISA法检测各组细胞培养上清液中Th1细胞因子干扰素(IFN)-γ、Th2细胞因子白介素(IL)-6及血小板衍化生长因子(PDGF)的浓度;并将TLR4的表达水平与上清液中炎性因子的分泌水平进行相关性分析.结果 COPD模型组大鼠肺组织动脉平滑肌层TLR4的表达明显高于正常大鼠;与空白组比较,LPS组PASMCs中TLR4的表达明显升高(P＜0.05);LPS组PASMCs中合成分泌IFN-γ、IL-6、PDGF的水平较对照组明显升高,TAK-242阻断TLR4,PASMCs中TLR4的表达明显降低(P＜0.05);细胞培养上清液中IFN-γ、IL-6、PDGF的表达水平较空白组明显降低(P＜0.05);TLR4表达水平与细胞培养上清液IFN-γ、IL-6及PDGF的浓度呈显著正相关性(r =0.95、0.87、0.83,P ＜0.05).结论 TLR4可能参与调控PASMCs的合成分泌功能.     

TLR4对胃癌细胞放射敏感性的影响探讨

目的探讨Toll样受体4（TLR4）对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法小鼠胃癌细胞株MFC分别经脂多糖（LPS）、瑞沙托维（TAK-242）和磷酸缓冲液（PBS）处理后进行5Gy照射和0Gy照射,分析MFC细胞TLR4表达情况、增殖活性、放射敏感性、凋亡率和细胞周期变化。结果 MFC细胞经5Gy X射线照射24h后TLR4表达水平显著下降;增殖活性、放射敏感性显著下降,凋亡率显著升高;细胞阻滞于G2/M期。经TAK-242和LPS处理后增殖活性、放射敏感性等均发生不同程度改变。结论 TLR4可对胃癌细胞放射敏感性产生较大影响。     

TAK －242对糖尿病周围神经痛大鼠的治疗作用

目的：明确HMGB1－TLR4轴在糖尿病周围神经痛（ DPN）致病过程中的作用及机制,为新型靶向药物治疗的临床研究提供动物实验基础。方法60只SD大鼠随机分为NC组、DPN 组、TAK组。 NC组按大鼠体重腹腔注射55 mg／kg柠檬酸／柠檬酸钠缓冲液,DPN腹腔注射55 mg／kg链脲佐菌素溶液造模,TAK组腹腔注射3 mg／kg TAK－242对大鼠进行行为学分析以及刺激实验,包括热辐射刺激、冷板试验以及触觉过敏试验。采用Western blot方法检测DPN大鼠模型脊髓组织的HMGB1－TLR4轴上下游基因（ HMGB1、TLR4、MAPK、NF－κB、IL－6）的变化,分析上述细胞因子表达水平与大鼠疼痛行为的相关性。观察TAK－242对DPN大鼠模型的治疗效果。结果 DPN组大鼠热辐射、冷刺激反应以及机械性触觉异位性疼痛阈值均较NC组下降（P＜0．05）。 West－ern blot检测显示DPN组大鼠HMGB1、TLR4、NF－κB、IL－6蛋白表达量较NC组升高（ P＜0．05）;TAK组TLR4、NF－κB、IL－6表达较DPN组下降（ P＜0．05）。结论 TLR4抑制剂TAK－242通过阻断HMGB1－TLR4轴对DPN动物模型起治疗作用。     

胸腺肽α1对皮肤移植小鼠免疫功能的影响

目的 本研究拟通过建立C57-BABL/c小鼠同种异体皮肤移植模型,观察胸腺肽α1（Tα1）对皮肤移植小鼠免疫功能的影响,同时探讨Tα1在体内诱导移植免疫耐受的机制。方法 取80只C57小鼠作为供体,80只BABL/c小鼠作为受体,建立C57-BABL/c小鼠同种异体皮肤移植模型,将移植术后的受体小鼠分为4组:A组,对照组（移植后不给予任何药物,n=20）;B组,环孢素A（CsA）治疗组（移植后给予CsA 10 mg/kg,n=20）;C组,Tα1治疗组（移植后给予Tα1 400 μg/kg,n=20）;D组,联合治疗组（移植后给予CsA 10 mg/kg+Tα1 400 μg/kg,n=20）。上述药物每日腹腔注射1次,共注射21 d。观察、记录移植皮片存活情况;各组分别于移植术后第1、7、14、21 d处死5只小鼠,取血行液相芯片细胞因子检测;取移植皮片作HE染色;取小鼠脾脏淋巴细胞行流式细胞术检测T细胞分化。结果 在移植后第1、7、14、21 d,同时点B、C、D组与A组相比,D组分别与B组、C组相比,白细胞介素（IL）-1、IL-2、IL-6、IL-17均降低（ P<0.05）,而IL-10均升高（ P<0.05）;而 B、 C两组相比差异无统计学意义。CsA与Tα1单药对细胞因子的作用类似,而联合用药能加强单药效果。B组及D组CD4/CD8比例倒置。D组CD4+CD25+ T细胞数高于其他组,差异有统计学意义（ P<0.05）。结论 移植后使用Tα1,在一定程度上能减轻T细胞对移植物的损伤,但不能完全阻止排斥反应的发生。     

推拿对腰间盘突出症大鼠的治疗作用及对TLRs/MyD88信号通路的影响

目的观察推拿对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠的治疗作用及对Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子(MyD88)信号通路的影响。方法取45只大鼠采用自体髓核移植法建立LDH大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、模型+抑制剂组、推拿组、推拿+激活剂组,每组10只,剩余10只为假手术组。模型+抑制剂组给予TLR4抑制剂TAK-242,推拿组施用推拿手法,推拿+激活剂组施用推拿手法并给予TLR4激活剂脂多糖(LPS),模型组、假手术组固定的同时给予生理盐水。测定各组大鼠造模后1、7、14、21 d机械性缩足反射阈值(PWMT)、热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);造模21 d处死各组大鼠,观察背根神经节病理变化,并比较背根神经节肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β水平及髓核组织TLR4、MyD88、核转录因子κB(NF-κB)p65 mRNA及蛋白相对表达量。结果与模型组比较,模型+抑制剂组、推拿组7、14、21 d PWMT及PWTL升高(P<0.05),推拿+激活剂组7、14、21 d PWMT及PWTL降低(P<0.05)。HE染色显示,模型组、推拿+激动剂组背根神经节细胞肿胀,形状不规则,有空泡变性,尼氏小体排列不均;推拿组、模型+抑制剂组背根神经节病理形态较模型组有所改善,细胞排列较清晰,存在少数细胞空泡变性,尼氏小体较均匀。与模型组比较,模型+抑制剂组、推拿组背根神经节TNF-α、IL-6、IL-1β水平,髓核组织TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA及蛋白相对表达量降低,且推拿组低于模型+抑制剂组(P<0.05),推拿+激活剂组背根神经节TNF-α、IL-6、IL-1β水平,髓核组织TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论推拿可能通过抑制TLR4/MyD88信号通路发挥消炎止痛作用,改善LDH症状。     

冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变.结果 冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10 μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少.结论 冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关.     

苦参素对脂多糖诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨苦参素(OMT)对脂多糖(LPS)诱导的海马神经元凋亡的影响及其可能机制。 方法 根据海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放率选择OMT的浓度进行实验分组。分为7组:正常对照组;脂多糖组;阿司匹林+脂多糖组;苦参素组;苦参素低剂量+脂多糖组;苦参素中剂量+脂多糖组;苦参素高剂量+脂多糖组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫荧光观察NF-κB/P65核易位情况;酶联免疫吸附(ELISA)技术测定海马神经元培养上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。 结果 LPS组海马神经元凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01),OMT预处理可以显著减少LPS刺激引起的海马神经元凋亡率(P<0.05)。LPS可以促进海马神经元NF-κB/P65由胞浆转位到胞核,提高海马神经元培养上清中TNF-α和IL-1β水平;而OMT预处理能显著减少LPS对海马神经元NF-κB/P65核易位作用及降低TNF-α和IL-1β的水平(P<0.05)。 结论 LPS诱导海马神经元NF-κB/P65核易位,导致炎症因子TNF-α和IL-1β的含量增加;OMT预处理可以抑制海马神经元NF-κB/P65核易位,减少TNF-α和IL-1β的分泌,从而抑制海马神经元的凋亡。