大鼠角膜重度碱烧伤后视网膜一氧化氮合酶变化与细胞凋亡的研究

目的研究大鼠角膜重度碱烧伤后视网膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)变化与细胞凋亡的关系。方法制作SD大鼠角膜重度碱烧伤模型76只(152眼)。在烧伤后不同时间点以免疫组化检测iNOS在视网膜的表达,以酶法检测视网膜组织中iNOS含量的变化,并以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜凋亡细胞,并与正常大鼠相对照。结果正常组视网膜中未测到iNOS的表达和含量,重度碱烧伤后大鼠视网膜中iNOS的表达和含量从伤后1d开始升高,于7d达最高,30d恢复正常,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。伤后3d、7d、15d在视网膜神经节细胞可见不同程度的TUNEL阳性细胞,7d组凋亡阳性表达最强,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论角膜重度碱烧伤后视网膜组织细胞存在凋亡,凋亡可能与iNOS表达有关。     

白内障术后房水一氧化氮及一氧化氮合酶的动态变化

目的：探讨白内障术后房水一氧化氮（NO）与炎症反应的关系。方法：用新西兰白兔动态观察对照组、晶状体囊外摘出术组（ECCE）和晶状体囊外摘出＋人工晶状体植入术组（ECCE＋IOL）眼内炎症反应及房水一氧化氮合酶（NOS）和NO2－／NO3－的活性。结果：白内障术反应与房水NOS和NO活性呈动态变化,ECCE＋IOL组明显高于ECCE组,且上两组均高于对照组。结论：房水NO的变化与白内障术后眼内炎症反应密切相关。     

角膜碱烧伤房水炎性细胞因子变化的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白细胞介素 1β(IL 1β)在眼前段碱烧伤病理过程中的作用机制。 方法　采用放射免疫法检测兔角膜碱烧伤后房水中不同时间的TNF α和IL 1β的含量。 结果　TNF α和IL 1β含量在角膜碱烧伤后 4小时急剧升高 ,2 4小时达到高峰 ,48～ 72小时呈一较高水平 ,与对照组比较差异均有非常显著性意义 (P <0 0 1)。结论　眼前段碱烧伤的发病机制中TNF α和IL 1β介导的炎症途径参与。     

兔角膜碱烧伤后角膜和房水中VEGF的表达

目的探讨兔角膜碱烧伤后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达。方法用1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤兔角膜建立角膜碱烧伤动物模型,未烧伤眼作为对照;免疫组织化学方法检测正常对照组以及角膜碱烧伤后1d、4d、7d、10d、14d VEGF蛋白在角膜中的表达情况,同时用酶联免疫吸附测定法(enzymelinkedi mmunosorbent assay,ELISA)检测房水中VEGF蛋白的表达量。结果正常对照组中,VEGF蛋白在角膜上皮细胞和内皮细胞仅有弱阳性表达,基质层表达不明显;房水中VEGF表达量为(0.168±0.038)μg·L-1。碱烧伤后,角膜各层组织中VEGF蛋白表达较对照组增强(P<0.05),其中基质层可见大量炎性细胞浸润,伴随有VEGF蛋白在该区域的集中表达。房水中VEGF的表达量于烧伤后1d为(0.336±0.072)μg·L-1,随后持续升高,至14d达(1.294±0.216)μg·L-1,各检测点均较对照组有显著差异(P<0.05)。同时房水中VEGF表达量与角膜中检测结果呈正相关(P<0.01)。结论角膜碱烧伤后早期角膜组织和房水中VEGF蛋白的表达均显著增高,提示VEGF可能在损伤后的早期修复过程中发挥着作用。     

碱烧伤对角膜组织中NO及iNOS含量变化的影响

目的 观察一氧化碳（nitric oxide,NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达在角膜碱烧伤后的变化，探讨N0在角膜碱烧伤病理过程中的作用。方法 SD大鼠制作角膜碱烧伤模型，将实验动物随机分为2组：正常对照组，角膜碱烧伤组(碱伤组)。于1、4、7、10、13天每组各取6只大鼠采用酶法和免疫组化染色分别检测角膜组织中N0含量以及iNOS的表达变化。结果 碱烧伤后大鼠角膜组织中N0含量在不同时期均升高(P＜0．05)，并于4—7天达最高峰(P＜0．01)；角膜组织中iNOS主要表达于炎症细胞胞浆中，在不同时期表达也同样增强。结论 碱烧伤后角膜组织中N0及iNOS含量增加，提示N0可能参与了碱烧伤后的角膜组织病理损伤过程。     

兔角膜碱烧伤后角膜微量元素的变化

以原子吸收光谱法观察了兔眼角膜严重碱烧伤后角膜铜、锌、钙和镁元素含量的变化及实验治疗的影响。结果角膜烧伤后各治疗组(综合治疗组和甲孕酮组)及对照组角膜中各元素含量均显著增加,一般在1～2周时达高峰,与角膜病变过程和程度相一致。讨论了微量元素在碱烧伤角膜的损伤修复过程中的可能作用。     

角膜碱烧伤的油剂治疗

目的 研究油剂对角膜碱烧伤的治疗效果。方法 本文对1997-2002年眼科住院的角膜碱烧伤病人34例44眼，随机分为两组，治疗组点油剂（茶油、鱼肝油）、对照组未点油剂。记录视力，荧光素染色裂隙灯检查情况。结果 发现油剂治疗组有效率为90．9％，对照组有效率为63．6％，差异有非常显著性（P〈0．01）。结论 油剂是治疗角膜碱烧伤的有效药物。     

角膜碱烧伤的免疫机制

角膜碱烧伤作为一种常见的致盲性眼病,其损伤机制一直为人们所关注。近年来,随着免疫学理论的发展和实验手段的进步,学者们渐渐认识到免疫系统在角膜碱烧伤时所起的作用。免疫细胞(包括多形核白细胞、郎格罕氏细胞、淋巴细胞等)和免疫分子(包括细胞因子、黏附分子和主要组织相容性抗原)相互联系、相互制约,它们通过细胞免疫、体液免疫和免疫网络来介导角膜碱烧伤的病理变化。     

大鼠角膜碱烧伤后角膜及房水中缺氧诱导因子-1α的表达

目的 检测大鼠角膜碱烧伤后角膜及房水中缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α的表达情况,探讨角膜碱烧伤后早期HIF-1α在其损伤机制中的作用.方法 选择健康成年SD大鼠25只,右眼建立大鼠角膜碱烧伤模型为实验组,左眼不作处理为正常对照组,免疫组织化学法检测碱烧伤后1d、4d、7d、10 d、14 d HIF-1α在角膜中的表达情况,ELISA法检测各时间点房水中HIF-1α的表达量.结果 正常对照组中,HIF-1α在角膜及房水中均无表达.实验组碱烧伤后,HIF-1 α在角膜上皮细胞层和基质层组织中的表达均较对照组增强,且随碱烧伤时间延长而逐渐增强,至14 d时达到峰值.房水中HIF-1α在碱烧伤后1d的表达量为(0.056±0.013) μg·L-1,随后持续增高,至14 d时达(0.823±0.114) μg·L-1.房水中HIF-1α的表达量与其在角膜中的表达量呈正相关(r=0.87,P＜0.01).结论 HIF-1α参与了角膜损伤的病理机制,其表达变化与角膜新生血管的生长情况相关.     

Morphine-stimulated nitric oxide release in rabbit aqueous humor

Recent studies in our laboratory have demonstrated a role of nitric oxide (NO) in morphine-induced reduction of intraocular pressure (IOP) and pupil diameter (PD) in the New Zealand white (NZW) rabbit. The present study was designed to determine the effect of morphine on NO release in the aqueous humor of NZW rabbits, as this effect could be associated with morphine-mediated changes in aqueous humor dynamics and iris function. Dark-adapted NZW rabbits were treated as follows: (1) treatment with morphine (10, 33 or 100 microg, 5 min); (2) treatment with morphine or endomorphin-1 for 5, 15 or 30 min; (3) pretreatment with naloxone (100 microg), L-NAME (125 microg) or reduced glutathione (GSH, 100 microg) for 30 min, followed by treatment with morphine (100 microg, 5 min). After the various treatment regimens, aqueous humor samples were obtained by paracenthesis and immediately assayed for nitrates and nitrites (an index of NO production), using a microplate assay kit. Morphine caused a dose-dependent increase in the levels of NO in aqueous humor after 5 min of treatment with each dose. Rabbits treated with endomorphin-1 (100 microg) had no significant change in NO levels in aqueous at any point in the course of time. Aqueous samples from rabbits treated with morphine (100 microg) for 5 min increased from 29.84+/-2.39 microM (control) to 183.94+/-23.48 microM (treated). The increase in NO levels by morphine (100 microg, 5 min) was completely inhibited in the presence of naloxone (100 microg), L-NAME (125 microg) or GSH (100 microg). These results indicate that morphine-induced increase in NO production in aqueous humor is a transient response that is linked to the activation of mu opioid receptors. Data obtained suggest that morphine-stimulated changes in ocular hydrodynamics and iris function are due, in part, to increased release of NO in aqueous humor. In addition, the sensitivity of the response to l-NAME and GSH suggests that morphine-induced release of nitric oxide into aqueous humor is mediated by activation of mu-3 opioid receptors found in the anterior segment of the eye.     

一氧化氮与眼病的关系

一氧化氮（nitric oxide,NO）是近年来眼科疾病的研究热点.其在体内一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的催化下生成,作为一种小分子介质调节眼部血流.诸多脉络膜视网膜疾病如葡萄膜炎、青光眼、缺血-再灌注损伤、前部缺血性视神经病变、糖尿病视网膜病变以及视网膜色素变性等发病机制中均发现NO的异常,与NO相拮抗的内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）也日益受到关注.对NO合成途径的干预有望成为一种新的眼科治疗手段.     

剥脱综合征性青光眼患者血清和房水中NO浓度的测定

目的:测定剥脱综合征性青光眼(peseudoexfoliation glaucoma,PEG)患者血清及房水一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度,并探讨其在PEG发病中的作用。方法:应用硝酸还原酶法测定PEG患者（实验组）及白内障患者（对照组）血清及房水NO浓度。结果:实验组血清及房水NO浓度明显低于对照组（P<0.01）。结论:PEG患者血清及房水NO浓度降低,可能是导致房水滤过阻力增高的原因之一。     

HIF在兔角膜碱烧伤后CNV生成中的作用研究

目的研究缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)以及诱导性一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在角膜碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成中的作用及机制。方法 建立兔CNV动物模型,将其随机分为对照组和3个实验组,对照组结膜下注射生理盐水,实验组注射不同剂量的三氧化二砷。观察兔CNV的生长情况,并记录CNV的生长面积。用免疫组织化学方法检测兔角膜HIF、iNOS以及VEGF的表达。结果 对照组6 d、12 d、15 d、21 d、28 d CNV的面积分别为:(53.86±20.60)mm2、(87.21±25.80)mm2、(128.31±40.10)mm2、(114.42±29.40)mm2、(78.15±35.13)mm2。各实验组CNV面积均小于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。免疫组织化学方法检测角膜HIF-1α、iNOS及VEGF蛋白的表达:VEGF表达集中在角膜上皮下基质,存在于血管内皮细胞、炎性细胞胞浆内,呈深黄色。在7 d有较高表达,14 d达到高峰,28 d时明显降低,且对照组明显高于实验组,各实验组的表达随三氧化二砷剂量的增加而减少。蛋白的表达与CNV面积呈正相关。结论 角膜碱烧伤后CNV的形成可能与HIF-1α有关。三氧化二砷通过抑制HIF-1α和iNOS、VEGF表达而抑制兔CNV的形成。     

急性高眼压状态大鼠虹膜睫状体一氧化氮及其合酶的变化

目的：通过对急性高眼压大鼠虹膜睫状体一氧化氮及其合酶变化的分析,探讨一氧化氮在青光眼发病机理中可能的作用。方法：Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２４只,随机分为高眼压３０分钟组;高眼压６０分钟组;高眼压９０分钟组;前房加压灌主制成高眼压模型。得用镀铜镉还原法测定虹膜中ＮＯ２＾－／ＮＯ３＾－的含量从而间接反映虹膜组织中ＮＯ的含量。利用免疫组织化学法研究睫状体内内皮结构型一氧化氮梧酶（ｅｃＮＯＳ）的分布及其变化。结果     

青光眼患者血清及房水一氧化氮浓度的测定

目的 测定青光眼患者血清及房水一氧化氮(NO)浓度并探讨其在青光眼发病中的作用。方法 实验患者分为青光眼组和白内障组,应用硝酸还原酶法分别测定两组患者血清及房水NO浓度。结果 两组患者血清NO浓度无显著性差异,青光眼组内各类型之间血清NO浓度亦无显著性差异。原发性开角型青光眼患者房水NO浓度较对照组及其他类型青光眼显著降低,闭角型青光眼患者房水NO浓度较对照组显著升高(P<0.01)。 结论 眼压升高可引起房水NO浓度升高,过多的NO可损伤小梁网及邻近的葡萄膜及视网膜组织。开角型青光眼患者由于房角原生型一氧化氮合成酶的减少引起房水NO浓度的降低,此可能为眼压升高的原因之一。     

一氧化氮(NO)对角膜神经再生的影响作用

目的 探讨一氧化氮(NO)对角膜神经再生的影响作用。方法 本研究以亚硝酸钠(NaNO₂)作为外源性NO供体,在细胞实验中以小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)为研究对象。采用不同浓度的NaNO₂处理Neuro-2a细胞并筛选出NO的最佳神经营养浓度。在动物实验中,将30只SD大鼠随机分组,10只作为NC组,其余20只大鼠建立角膜碱烧伤模型,再随机分为PBS组和NO组,每组10只。从碱烧伤当天开始,PBS组给予PBS治疗,NO组给予10.00μmol·L^-1 NaNO₂与PBS混合治疗。用荧光素钠染色后观察并记录大鼠角膜上皮愈合情况,计算角膜上皮愈合率。用CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测细胞神经元标记物的表达。于大鼠角膜碱烧伤处理后7 d取大鼠角膜上皮组织,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测每组角膜上皮中神经元标志物βⅢ-微管蛋白和神经生长因子(NGF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)的表达水平。结果 10...