尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征与耐药性的关系研究

目的了解社区感染尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的分布,并分析其与细菌耐药性的关系。方法选取114株临床非重复分离自医院门诊患者尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类。结果 114株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有50株检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出两种不同长度的可变区片段:1 700bp片段(30株)为dfrA17-aadA5,2 100bp片段(5株)为dfrA12-orfF-aadA2,有两株大肠埃希菌同时扩增出1 700bp和2 100bp的可变区片段,有17株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;114株大肠埃希菌对氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和左氧氟沙星的耐药率较高,>50.0%,对头孢替坦、亚胺培南、厄他培南、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、阿米卡星耐药率较低,<5.0%;Ⅰ类整合子阳性菌株对氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株。结论与医院感染相比,社区感染尿液中分离的大肠埃希菌受抗菌药物的选择压力相对较小,其对常用抗菌药物的耐药率、Ⅰ类整合子携带率均较低,同时Ⅰ类整合子中携带的基因盒种类也较单一。     

健康人群大肠埃希菌Ⅰ类整合子与耐药性关系

目的 研究健康人群大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带情况及分子特征,分析其与细菌耐药性关系。方法 采用V itek32细菌分析仪和纸片扩散法,检测150株大肠埃希菌抗生素敏感性,PCR检测总DNA中Ⅰ类整合子,扩增产物进行限制性核酸内切酶分析,测序确定携带基因盒种类,脉冲场凝胶电泳对整合子阳性菌株分子分型。结果 150株大肠埃希菌中,83株菌耐受>3种抗生素,耐多药率55.3%;超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性5株,阳性率3.3%;携带Ⅰ类整合子42株,扩增子150~3 000 bp,有8种带型;耐药基因盒主要是dfr和aadA类,最常见基因盒排列dfr17~aadA5;整合子分布在不同基因型菌株中。结论 健康人携带的大肠埃希菌中广泛存在Ⅰ类整合子,与细菌耐多药性密切相关;分子分型结果提示整合子能在细菌种内水平传播,整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制。     

食品中大肠埃希菌整合子与耐药性的关系研究

目的：研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：50株大肠杆菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与消毒剂抗性的研究

目的了解医院大肠埃希菌的Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因存在状况。方法对临床分离的34株大肠埃希菌,采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因。结果 34株大肠埃希菌qacEΔ1-sul1基因阳性有28株(82.4%)。结论 34株大肠埃希菌药敏试验结果显示,β-内酰胺酶和氨基糖苷类抗菌药物耐药性高与Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因高检出率有关。     

致泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的研究

目的：分析泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的流行情况和分子特征。方法：应用全自动细菌分析仪Microgcan WalkAway40和纸片扩散法，对40株大肠埃希菌进行抗生索敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子。对扩增产物进行测序。并分析其中的基因盒。利用脉冲场电泳（PFGE）对菌株进行分子分型。结果：22株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小为1000、1200、1700和3000bp，22株细菌各含1-2个整合子。1000bp整合子含基因盒aadA1。1200bp整合子含基因盒dfr1—OFRx，1700bp整合予含基因盒dfr17-aadA5，3000bp整合子两端分别含基因盒aadB、cmlA1，40株细菌被分为不同的基因型，在不同基因型菌株中发现了相同的整合子。结论：整合子在泌尿系统感染大肠埃希中广泛存在，整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制，基因分型结果提示整合子在细菌种内水平传播。     

致血液系统感染大肠埃希菌中Ⅰ类整合子参与耐药的研究

目的：探讨致血液系统感染大肠埃希菌中Ⅰ类整合子介导耐药性的分子机制。方法：应用全自动细菌分析仪Microscan WalkAway40和纸片扩散法，对16株大肠埃希菌进行抗生素敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子，对扩增产物测序并分析其中的基因盒。结果：8株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小分别为600bp、1700bp和2500bp，600bp整合子含基因盒dfr2d，1700bp整合子含基因盒dfr17-aadm5。结论：整合子在介导细菌耐药性方面发挥着重要作用。     

尿液分离肠杆菌科细菌整合子分子特征及其与耐药性的关系

目的 了解尿液分离肠杆菌科细菌中整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与细菌耐药性的关系.方法 选取111株临床上非重复分离自尿液样本中的肠杆菌科细菌菌株,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗生素的耐药性,PCR检测第1,2,3类整合酶基因(int11、int12、int13),对于第1类整合酶阳性菌株用PCR扩增可变区基因盒.结果 111株临床非重复分离自尿液样本的肠杆菌中有69株(62％)检测到第1类整合酶基因,12株(11％)检测到第2类整合酶基因,未检出第3类整合酶基因.共检测出6种不同长度的可变区片段:800 bp片段不含基因盒,1500 bp片段为aadB,1800 bp片段为aadA2,2200 bp片段为aac(6')-Ib-cmlA1,3500 bp片段为aadB-catB3 - aadA1,3000 bp为dfrA32.dfrA32是首次在1株奇异变形杆菌中检测出的一种新的甲氧苄啶耐药基因.第1类整合子阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率均高于第1类整合子阴性菌株.结论 第1类整合子及相关基因盒在肠杆菌科细菌中分布广泛,与细菌耐药性关系密切.     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

水产品中耐药大肠埃希菌整合子与耐药基因盒研究

目的:利用水产品中分离到的耐药大肠埃希菌,研究整合子与耐药性的关系。方法:PCR扩增1类和2类整合酶及整合子,将其进行序列分析。结果:85株耐药大肠埃希菌中88%含有1类整合酶基因;其中68%能扩增此基因;1类整合子可变区PCR扩增产物谱型有17种;1类整合子最常见的基因盒有4种。还发现1株大肠埃希菌同时携带1和2两类不同的整合酶和整合子。结论:大肠埃希菌耐药性与整合子有相关性。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子及其与ESBLs基因关系的研究

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布及其在ESBLs基因水平转移中的作用。方法采用PCR方法检测230株产ESBLs和197株非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因intⅠ,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的关系,与blaSHV、blaCTX和blaTEM编码基因的关联及经质粒转移的情况。结果产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性例数分别是137例(59.6%)和48例(24.4%),两组整合子阳性率差异有统计学意义(P<0.01);整合子阳性株对喹喏酮类、氨基糖苷类以及二者同时耐药的比率较高,依次为82.5%、81.8%和71.5%;产ESBLs菌株中blaSHV、blaCTX和blaTEM基因与整合子经质粒共同转移的频率分别是59.5%、95.5%和69.5%。结论Ⅰ类整合子在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产ESBLs菌株,并参与产ESBLs菌株多重耐药性的形成;整合子与blaCTX经质粒共同转移的频率高于其他两类基因,提示CTX型酶具有更强的扩散优势。     

污水中大肠埃希菌携带第1类整合子的鉴定和特征分析

目的：探讨污水中大肠埃希菌携带第1类耐药整合子的分布、特征及所含基因盒的种类。方法：常规方法分离大肠埃希菌；纸片扩散法对9种抗生素进行耐药性监测和分析；PIER鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序并对结果进行分析。结果：42份标本中分离出24株大肠埃希菌，为多重耐药菌株，耐药谱为氨苄西林-复方磺胺-红霉素-四环素-链霉素-庆大霉素。有3株（12．5％）鉴定出1．6kb 1类整合子，PCR产物测序得知携带pse-1-aadA1、pse-1-aadA2、pse-1-aacA1基因盒，传递对β-内酰胺类-氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论：1类整合子存在于污水来源的大肠埃希菌中，并携带相应的耐药基因盒，决定着对β-内酰胺类-氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

健康人肠道大肠埃希菌整合子和耐药基因盒的研究

目的：研究健康人肠道大肠埃希菌的整合子携带情况与整合子携带的基因盒种类及其与耐药性之间关系.方法：PCR检测Ⅰ类整合子,确定细菌携带整合子的情况.整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区,分析插入基因盒的序列.结果：150株大肠埃希菌中有38株携带Ⅰ类整合子,集中分布在对3种以上抗生素耐药的菌株中.插入基因盒集中在甲氧苄氨嘧啶耐药基因（dfr）和氨基糖甙类抗生素耐药基因（aadA）.结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致,但是细菌耐药谱和其整合子无对应关系.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌工类整合子及其与ESBLs基因关系的研究

目的 研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌整合子分布及其在ESBLs基因水平转移中的作用。方法 采用PCR方法检测230株产ESBLs和197株非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因intⅠ，分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的关系，与blaSHV、blaCTX和blaTEM编码基因的关联及经质粒转移的情况。结果 产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性例数分别是137例（59．6％）和48例（24．4％），两组整合子阳性率差异有统计学意义（P〈0．01）；整合子阳性株对喹喏酮类、氨基糖苷类以及二者同时耐药的比率较高，依次为82．5％、81．8％和71．5%；产ESBLs菌株中blaSHV、blaCTX和blaTEM基因与整合子经质粒共同转移的频率分别是59．5％、95．5％和69．5％。结论 Ⅰ类整合子在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产ESBLs菌株，并参与产ESBLs菌株多重耐药性的形成；整合子与blactx经质粒共同转移的频率高于其他两类基因，提示CTX型酶具有更强的扩散优势。     

健康人群大肠埃希菌Ⅰ类整合子与多重耐药的相关性分析

目的 :了解成都、雅安地区健康人群大肠埃希菌耐药情况和Ⅰ类整合子存在、流行状况。分析Ⅰ类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法 :K B法测定 78株大肠杆菌耐药及多重耐药性 ;PCR扩增Ⅰ类整合子 ;电泳检测扩增产物。结果 :78株健康大肠杆菌对 7类 11种常用抗菌药物耐药率 ,最高为萘啶酸 4 2 13% ,最低阿米卡星 2 5 6 % ,多重耐药率 (耐受 3种以上药物 )为 31 6 2 %。Ⅰ类整合子阳性菌 2 2株 ,阳性率 2 8 2 %。对 9种常用药物Ⅰ类整合子阳性菌株耐药率与阴性株差异有显著性 (P <0 0 10 )。整合子阳性株多重耐药率 (77 2 7% )显著高于阴性株 (17 86 % ) (P <0 0 0 5 )。结论 :健康人群大肠杆菌携带有Ⅰ类整合子 ,Ⅰ类整合子对细菌多重耐药的产生和传播起着重要作用。应加强基因水平耐药监测。     

肠出血性大肠埃希菌1类整合子与耐药性关系

目的研究48株(国内28株，美国20株)肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的耐药特点以及1类整合子的分布，探讨整合子中耐药基因盒的种类及与细菌耐药性的相互关系。方法琼脂稀释法对18种抗生素进行耐药性监测和分析；PCR法鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序及分析。结果48株肠出血性大肠埃希菌中23株为O157：H7；2个地域的肠出血性大肠埃希菌对抗生素的耐药情况大多无差别，只存在对氨苄西林和红霉素耐药率的差异，前者为国内分离株(60．7％)高于美国分离株(30％)，后者为美国分离株(95％)高于国内分离株(60.7％)。耐3种以上抗生素的肠出血性大肠埃希菌18株(美国3，中国15)。48株分离株中有11株(22．9％)鉴定出1类整合子，PCR产物测序分析可见，9株携带aadA1基因盒，2株携带aadA2基因盒，传递对氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论1类整合子及其相关的基因盒广泛存在于肠出血性大肠埃希菌中，而且决定着对氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系研究

目的：研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌档进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：69株大肠菌中25株携带1类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr(甲氧苄氨嘧啶)和aadA(氨基糖甙类)基因盒，各种基因盒组合中最常见的是difrl—aadA1。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

食品中大肠埃希氏菌、沙门氏菌整合子的耐药性水平传递研究

探讨整合子在细菌耐药性的获得及传递中的作用。方法 :采用膜接合试验。结果 :菌株之间的接合频率在 1 0 - 1～ 1 0 - 5之间。结论 :整合子可发生水平传递 ,同时整合子可捕获或丢失基因盒 ,造成耐药基因的水平播散。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系

目的 研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1，2，3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果69株沙门菌中25株携带1类整合子。集中分布在对4种以上抗生索耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr（甲氧氨嘧啶）和aadA（氨基糖甙类）基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfrl-aadA1。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

临床分离大肠埃希菌耐药性分析及I型整合子研究

目的了解临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药状况;研究整合子在大肠埃希菌中的分布情况,探讨其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性。方法收集广东省3所医院2010-2012年分离的大肠埃希菌,采用K B纸片扩散法进行药敏试验;聚合酶链反应（PCR）法扩增3类整合子整合酶基因和整合子可变区,测序分析整合子所携带的耐药基因盒类型。结果共收集156株大肠埃希菌,其对青霉素类、头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类等的大多数抗菌药物的耐药率＞50%;耐药率＜10%的抗菌药物有头孢哌酮/舒巴坦（0）、亚胺培南（3.85%）、头孢替坦（4.35%）、厄他培南（7.69%）和哌拉西林/他唑巴坦（8.97%）;I类整合子的检出率为57.69%（90/156）,多重耐药菌与非多重耐药菌的整合子检出率分别为66.00%（66/100）和64.71%（22/34）,两组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但分别与敏感菌组（9.09%,2/22）相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）。所检出的整合子可变区分为9种类型,大部分都含有aadA和dfrA耐药基因盒。结论大肠埃希菌整体耐药情况严重;I类整合子在临床分离大肠埃希菌中分布广泛,并与大肠埃希菌的耐药性关系密切,主要介导对氨基糖苷类、磺胺类、β 内酰胺类等多种抗菌药物的耐药性。     

Ⅰ、Ⅱ类整合子在变形菌属中的分布及耐药性研究

目的了解Ⅰ、Ⅱ类整合子在变形菌属中的分布及其耐药性,为临床合理选用抗菌药物提供参考依据。方法 125株变形菌属采用聚合酶链式反应扩增Ⅰ、Ⅱ类整合酶基因,微量稀释法测定细菌对抗菌药物的药敏率。结果 125株变形菌属中检出携带Ⅰ类整合子46株占38.60%,检出携带Ⅱ类整合子32株占25.60%,同时携带Ⅰ、Ⅱ类整合子17株,阳性率为13.60%;携带Ⅰ类或Ⅱ类整合子或同时两种整合子的菌株对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、氨苄西林、环丙沙星、哌拉西林、头孢哌酮、头孢吡肟耐药率高于整合子阴性菌株,差异有统计学意义(P<0.05);携带有Ⅰ、Ⅱ类整合子的变形菌属对庆大霉素、环丙沙星、氨苄西林、哌拉西林、头孢哌酮的耐药率均>60.00%;125株变形菌属对哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁耐药率均<10.00%。结论临床分离的变形菌属中携带Ⅰ、Ⅱ类整合子的菌株比例较高,Ⅰ、Ⅱ类整合子与变形菌属的多药耐药具有相关性,临床上需合理应用抗菌药物,避免新耐药菌株的产生。