石蜡包埋组织FCM DNA检测技术方法的进展

石蜡包埋组织ＦＣＭＤＮＡ检测技术方法的进展张祥宏１９８３年Ｈｅｄｌｅｙ等［’Ｊ建立了以石蜡包埋组织进行ＦＣＭＤＮＡ检测的方法，该方法大大地促进了ＦＣＭ技术在医学研究领域、特别是肿瘤回顾性研究中的应用。但近两年来以石蜡包埋材料进行的研究趋向减少，其原因...     

原位核酸杂交检测膀胱癌中结核菌L型DNA的意义

目的　探讨结核菌L型DNA表达在膀胱移行细胞癌发生与发展中的意义。方法　改良抗酸 (IK)染色和免疫组化染色 (S P法 )检测 6 8例膀胱癌组织中抗酸菌L型和结核菌抗原 ;原位核酸杂交 (ISH)检测 2 0例膀胱癌细胞内结核菌L型DNA。结果　抗酸菌L型阳性率 35 .2 % ,结核菌抗体 (BCG)阳性表达率 36 .7%。 4 0 %膀胱癌细胞内有结核菌L型DNA阳性信号 ,膀胱癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率分别为 2 0 %、30 %、80 % (P <0 .0 5 ) ,随着膀胱癌级别的增加 ,结核菌L型感染率显著增高。改良抗酸 (IK)染色、免疫组化染色和原位核酸杂交结果具有一致性。结论　膀胱癌中常伴有结核L型感染 ,结核菌L型DNA可进入膀胱移行细胞内 ,引起细胞增生和癌变 ,提示结核菌L型感染在膀胱癌发生、发展中起重要作用。     

石蜡包埋组织对流式细胞仪检测细胞凋亡率的影响

有关石蜡包埋组织进行细胞凋亡率检测探讨较少 ,本试验将 10周小白鼠脑组织分别用 70 %乙醇固定和进行石蜡包埋 ,用流式细胞术检测其凋亡率 ,目的是了解两种组织测定细胞凋亡率的差别。1　材料和方法1 1　材料　将 10周小白鼠处死后一部分脑组织用 70 %乙醇固定置 4℃保存待检 ,另一部分脑组织按常规进行石蜡包埋。1 2　单细胞样品制备方法1 2 1　乙醇固定组织单细胞悬液的制备　采用网搓法 ,将12 0目不锈钢网扎在小烧杯上 ,把剪碎的组织放在网上 ,用眼科镊子轻轻搓组织块 ,边搓边以生理盐水冲洗 ,直到将组织搓完为止。收集细胞悬液 ,10 0 …     

四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

背景:由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究.选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题.目的:比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法.方法:取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增.结果与结论:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P<0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P>0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当.结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法.     

石蜡包埋组织中DNA提取方法的比较

目的通过比较两种从石蜡包埋组织中提取基因组DNA的方法,确定一种高效、经济而简便的方法指导实际工作。方法按照两种方法（脱蜡法与非脱蜡法）提取DNA,比较所提DNA的质量,PCR扩增β-Globin基因作为基因分析的对照扩增,并对其中非脱蜡法进行改良。结果两种方法所提取的DNA均能达到相关分子学实验的要求,PCR扩增带清晰,结果较为相似。结论非脱蜡法也能提取出适用于PCR技术要求的DNA,方法简便、经济。     

石蜡包埋淋巴组织三种微量DNA提取方法的比较

目的为寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法，本研究比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响。方法选取淋巴相关组织的蜡块21例。三种DNA提取方法分别是简单消化煮沸法，酚／氯仿提纯法和试剂盒法。通过提取DNA的浓度和纯度、PCR扩增保守序列pglobin等方法，比较三种DNA提取方法的优劣。结果试剂盒法提取样品OD260／OD280平均比值位于1．6～1．8之间；提纯法位于1．3—1．5之间；简单消化煮沸法位于1，2—1．3之间。三种方法中，试剂盒法提取的DNA最为稳定。以3种DNA提取方法所获取DNA为模板，PCR扩增阳性率无统计学差异。结论从实用、快速、经济的角度综合分析，简单消化煮沸法简单快速，需要的组织样品少，是一个值得推荐的石蜡组织DNA提取方法。     

石蜡包埋组织DNA的快速提取技术

传统方法提取石蜡包埋组织ＤＮＡ ,步骤繁琐耗时。本实验室以ＰＣＲ方法检测结核菌为例 ,摸索出一种不经过脱蜡及酚—氯仿抽提 ,直接提取石蜡包埋组织ＤＮＡ简捷而快速的方法。1　材料与方法1.1　主要仪器 :全电脑基因扩增仪ＮＴ116 9型 (北京新技术应用研究所 ) ;低温高速离心机ＵＮＩＶＥＲＡＬ - 16Ｒ(德国 ) ;多功能紫外透射仪 (温洲市孚华分析仪器厂 )。1.2　试剂1.2 .1　裂解液 10ｍｍｏｌ ＬＴｒｉｓＨＣＬ(ｐＨ8.0 ) ;2ｍｍｏｌ ＬＥＤＴＡ(ｐＨ8 0 ) ;0 5 %Ｔｗｅｅｎ - 2 0 (ｖ ｖ) ;0 5 %ＮＰ - 40 (ｖ ｖ)。1.2 .2　 2 0ｍｇ …     

石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应影响因素的研究

目的　探讨石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。方法　应用从石蜡包埋组织中提取的DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子 ,分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。结果　 10 .0 μm× 1组织切片组 ,PCR反应循环次数 4 0次组 ,PCR反应模板量 0 .0 5 μg组PCR反应取得高质量目的基因DNA。结论　减少提取组织用量有利于减少抑制PCR物质的量 ,有利于反应的成功 ;PCR反应循环次数一般应大于 4 0次 ;PCR反应时减少模板量有利于PCR反应成功。     

55例非特异性慢性肉芽肿性炎中抗酸菌L型感染的探讨

目的 探讨非特异性慢性肉芽肿性炎的病因。方法 利用HE染色、改良抗酸染色（IK）和BCG免疫组化染色对55例该种病变进行检测。结果 55例中54例（98%）抗酸染色阳性,51例（92%）BCG免疫组化染色阳性,两者的符合率为94.5%。结论 非特异性慢性肉芽肿性炎很可能与抗酸菌L型感染有关。     

改良的石蜡包埋组织中提取高质量基因组DNA

从石蜡包埋组织中提取基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）进行基因检测，在临床常用于疾病的回顾性调查和研究。目前国内外从石蜡包埋组织中提取基因组DNA，多采用经二甲苯脱蜡，该方法可以获得所需要的DNA，但整个抽提过程过长、所得的DNA量很较少，并且易出现DNA链的降解（小片段的DNA），同时在提取过程中所使用的有机溶剂二甲苯试剂易造成环境的污染和对操作者身体的伤害。为了改进从石蜡包埋组织中提取基因组DNA的方法。     

从石蜡包埋的淋巴瘤组织提取DNA并定量检测EB病毒

目的 定量检测石蜡包埋的淋巴瘤组织中EB病毒（EBV）的表达,方法 对TES水浴DNA提取法进行了改良,从石蜡包埋的淋巴瘤组织中提取高质量的基因组DNA,以实时荧光定量PCR方法检测淋巴瘤组织EBV。结果在60例标本中平均提取DNA量为3．97ng（10／μm厚切片2片）,86．7％（52／60）标本DNA的纯度（260nm／280nm）≥1．6,其中50％（30／60）淋巴瘤组织EBV呈阳性表达（10^0～10^6拷贝／ngDNA）。结论 采用改良TES水浴法能获取石蜡包埋组织中高质量基因组DNA,使用该新的实验技术可有效地利用现有的标本资源进行与疾病相关科学的研究。     

结核菌L型在肺癌病理中检出的研究

肺结核与肺癌的关系早已引起人们的关注。结核菌与其他细菌一样,由于体内外环境的改变或抗结核药物等因素作用下,可导致细胞壁部分或完全缺失而形成L型。迄今已在乳腺癌,何杰金氏病、恶性淋巴瘤、白血病等多种组织中分离出细菌L型,且分离出的L型菌再感染动物可引起类似的肿瘤。曾有人发现肺结核趋向痊愈时,易并发肺癌,可能与肺结核愈合时病灶内的结核菌主要以L型形式存在有关。本文对97例肺癌标本进行组织切片,应用改良抗酸染色及免疫组化染色法进行研究,旨在探讨结核菌L型与肺癌的关系。     

从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR扩增的影…

常规福尔马林固定、石蜡包埋的病理标本，由于出现ＤＮＡ降解，不适于做大片段靶序列的ＰＣＲ扩增。本文就不同的固定液、固定不同时间对ＤＮＡ模板的降解影响、ＤＮＡ提取各步应注意的事项及选用长短适宜的靶序列进行ＰＣＲ扩增等情况进行综述。     

应用DNA探针检测石蜡包埋组织中结核杆菌DNA的研究

结核病是严重危害人类健康的传染病，近年来发病呈上升趋势。由于外界理化环境的影响及菌体的变异，传统抗酸染色阳性率大为降低。近年来，临床采用PCR等技术对体液标本中结核杆菌-DNA进行检测，使诊断率明显提高，但病理学石蜡包埋组织中结核杆菌的检测尚未建立稳定可靠的方法，我们对此进行了探索。     

聚合酶链反应检出石蜡包埋肝癌组织的乙型肝炎病毒DNA

传统免疫组织化学方法及分子杂交检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ灵敏度低，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法能否检测到石蜡肝癌组织中的ＨＢＶＤＮＡ报道尚不多见。为此，采用ＨＢＶ与丙型肝炎病毒二合一ＰＣＲ试剂盒对１７例肝癌患者的石蜡包埋癌组织进行了ＨＢＶＤＮＡ检测，结果７例阳性，阳性率为４１％，而８例非肝癌对照患者则均阴性。组织ＨＢＶＤＮＡ结果与血清ＨＢｓＡｇ比较显示，该试剂盒有较高的检出率及符合率。这为今后进一步研究大量保存的肝病石蜡包埋组织的ＨＢＶ感染提供了一个可靠灵敏的方法，也为研究其他病毒感染的石蜡包埋材料提供了参考。     

聚合酶反应检出石蜡包埋肝癌组织的乙型肝炎病毒DNA

传统免疫组织化学方法及分子杂交检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ灵敏度低，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法能否检验到石蜡肝癌组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ报道尚不见。为此，采用ＨＢＶ与丙型肝炎病毒二合－ＰＣＲ试剂盒对１７例肝癌患者的石蜡包埋癌组织进行了ＨＢＶ ＤＮＡ检测，结果７例阳性，阳性率为４１％，而８例非肝癌对照患者则均阴性。组织ＨＢＶ ＤＮＡ结果与血清ＨＢｓＡｇ比较显示，该试剂盒有较高的检出率     

石蜡包埋组织提取DNA不同条件下的PCR扩增

背景:在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中会对DNA造成损害,提取的DNA在用于PCR扩增时部分结果并不理想。目的:比较分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。方法:从10.0μm×2、10.0μm×4和10.0μm×5石蜡包埋食管癌组织切片中提取DNA,以0.05,0.1,0.2μg模板DNA量扩增内参基因β-actin,PCR反应循环次数分别为35,40,45次,分析影响PCR反应的因素。结果与结论:琼脂糖凝胶电泳结果显示以10.0μm×2组织切片量,PCR反应循环次数40次,PCR反应模板DNA量0.05μg扩增取得的目的基因DNA的质量最高。说明减少石蜡包埋组织用量和减少模板DNA量有助于获得高质量的PCR反应条带,且PCR反应循环次数应大于40次,小于45次,再增加循环次数,则意义不大。     

从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR扩增的影响因素

常规福尔马林固定、石蜡包埋的病理标本,由于出现DNA降解,不适于做大片段靶序列的PCR扩增。本文就不同的固定液、固定不同时间对DNA模板的降解影响、DNA提取各步应注意的事项及选用长短适宜的靶序列进行PCR扩增等情况进行综述。     

优化甲醛固定石蜡包埋组织DNA提取预处理对STR分型有效性的研究

目的通过对甲醛固定石蜡包埋组织（FFPET）DNA提取进行优化处理,确定满足FFPET样本进行短片段重复序列（STR）完整分型的条件。方法改变石蜡切片厚度、离心速率和时间、组织用量和消化液体积等参数提取FFPETDNA,并对提取的DNA样本进行常规STR扩增检验。结果优化方法处理后可以提取到较高质量DNA（1000bp）,经扩增均可以检出性别基因座（amelogenin）和15个以上STR基因座。结论 FFPET优化方法能够提高DNA提取的质量,适合STR分型研究。     

夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸菌的应用及评价

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病。痰结核菌检查是当前国家结核病控制规划（NIP）实施中的一个重要组成部分，也是诊断结核最基本的细菌学检查方法。我们采用夹层杯集菌离心涂片法检查抗酸杆菌，取得较好的效果。