反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒的研究

研究反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的方法。方法以重组丙型肝炎病毒（ｐＣＤ－ＨＣＶ）转染的Ｈ９细胞为对象，通过半定量逆转录聚合酶链反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ检测ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达的变化，观察与ＨＣＶ结构区（包括ＡＵＧ）互补和同源以及随机的硫代磷酸化寡核苷酸（ＰＳ－ＡＳＯＮ、ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ）对ＨＣＶ的抑制作用。结果ＰＳ－ＡＳＯＮ和ＰＳ－ＯＤＮ可有效地进入靶细胞并在体外与靶基因杂交结合，终浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ的ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ对ＨＣＶ均无抑制作用，但ＰＳ－ＡＳＯＮ可明显降低ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达水平，具有药物浓度和时间依赖效应，脂质体修饰可增强ＰＳ－ＡＳＯＮ的反义抑制作用，磷酸钙修饰却无此作用。结论与ＨＣＶ互补的ＰＳ－ＡＳＯＮ是ＨＣＶ的反义寡核苷酸，在翻译水平上具有反义抑制作用。     

60例散发性急性病毒性肝炎的病原学分型

对６０例已排除甲型、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的急性病毒性肝炎患者，以酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测抗－ＨＣＶ、抗－ＨＥＶ、抗－ＨＥＶ－ＩｇＭ、ＨＤＶ－Ａｇ、抗－ＨＤＶ－ＩｇＭ，抗－ＨＤＶ、抗－ＣＭＶ－ＩｇＭ及抗－ＥＢＶ－ＩｇＭ，同时应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果表明：１３．３％（８／６０）为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染，６１．７％（３７／６０）为戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染，     

乙型和丙型肝炎重叠感染患者肝组织免疫组织化学双标记研究

探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）重叠感染患者肝组织中病毒的复制状况和相互关系。方法采用免疫组织化学双标记技术，以抗－ＨＣＶＮＳ３、抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体和抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ多克隆抗体，检测２５例尸检肝组织中ＨＣＶＡｇ和ＨＢＶＡｇ的分布和表达。结果ＨＢ－ｓＡｇ和ＨＣＶＮＳ３Ａｇ同时阳性１１例，ＨＢｓＡｇ和ＮＳ５Ａｇ阳性１２例，ＨＢｃＡｇ和ＨＣＶＮＳ３Ａｇ及ＨＣＶＮＳ５Ａｇ阳性各１０例。几乎所有单标记染色阳性切片，其双标记染色也阳性。感染ＨＣＶ或ＨＢＶ的肝细胞各呈灶性、散在或弥散混杂分布，在重叠感染肝组织中，与ＨＢＶ复制有关的表达类型，如ＨＢｓＡｇ膜、浆型和ＨＢｃＡｇ浆型以及ＨＣＶＮＳ３Ａｇ和ＨＣＶＮＳ５Ａｇ的检出例数，同单纯感染组相比差异无显著意义（χ２＝０．１５４及０．１９８，Ｐ＞０．０５）。结论乙型和丙型肝炎病毒在重叠感染时，两种病毒在肝组织内可能不存在互相干扰和抑制。     

血液透析患者丙型肝炎病毒感染的研究

作者用ＥＬＩＳＡ法和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对４５例血液透析（ＨＤ）患者的血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）和丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）进行了检测，发现１３例抗－ＨＣＶ阳性，１５例ＨＣＶＲＮＡ阳性，共１７例患者（３７．８％）ＨＣＶ标志物（抗－ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ）阳性。将这１７例ＨＣＶ标志物阳性患者与２８倒闭性患者作了比较，结果表明，ＨＣＶ标志物阳性患者的透析时间、输血次数和输血量均明显高于阴性患者（Ｐ＜０．０１）。对１５例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者的ＨＣＶ基因型的分析表明，１３例为Ⅱ型，Ⅲ例为Ⅲ型。本研究表明，ＨＤ患者丙型肝炎的感染率很高，这与血液透析时多次接触血液、血液透析器具以及输血次数和输血量密切相关。     

静脉吸毒者丙型肝炎病毒感染的研究

目的 进一步研究静脉吸毒者（ＩＶＤＵＳ）＿中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ（）感染的特点。方法 采用ＥＬＩＳＡ法对１１４份ＩＶＤＵＳ,其中包括人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）阳性５０份,ＨＩＶ阴性６４份,以３主１１８份非静脉吸毒者（ＮＩＶＤＵＳ）血清进行抗ＨＣＶ检测;并采用ＲＴ－ＰＣＲ法对其中抗ＨＣＶ阳性者和４０例抗ＨＣＶ阳性的非吸毒者血清用ＨＣＶ２型引物进行ＨＣＶ０ＲＮＡ检测。结果 ＨＩＶ阳性的ＩＶＤＵＳ抗ＨＣ     

维持性血液透析患者的丙型病毒性肝炎感染率

目的 评价血液透析（血透）患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染状况、ＨＣＶ阳转率及危险因素。方法 采用第２代酶链免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ２,和逆转录聚合酶锭反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测６２例血透患者血清抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲ－ＮＡ,采用ＥＬＩＳＡ２随访１９９５年６月～１９９６年１２月间１９９例血透患者ＨＣＶ阳转情况。结果 ６２例患者中,抗－ＨＣＶＩｇＭ阳性２７例（４３．６％）,抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性２９例（４     

血清HCV RNA与抗—HCV关系研究

目的 研究血清ＨＣＶ ＲＮＡ与抗－ＨＣＶ之间的关系。方法 对５０例抗－ＨＣＶ阳性的丙型肝炎病人，用酶标仪测血清抗－ＨＣＶ ＯＤ值，同时用逆转录－套式－聚合酶链反应检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ５０例抗－ＨＣＶ阳性丙型肝炎（ＨＣ）患者中３０例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性，即６０％的ＨＣ病人存在病毒血症；在不同的抗－ＨＣＶ ＯＤ值范围内ＨＣＶ ＲＮ检出率不等，ＨＣＶ ＲＮＡ检出率随抗－ＨＣＶ ＯＤ值增高而增加（     

烧伤病人输血后丙肝发生情况报告

采用酶联免疫反应（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶反应（ＰＣＲ）方法，对２０例烧伤病人血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ进行了检测。结果：入院时，输血组及非输血组抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ检测均为阴性。一个月后。输血组１０例病人中发现抗－ＨＣＶ阳性５例、ＨＣＶＲＮＡ阳性４例；而非输血组抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ检测均为阴性。说明输血是烧伤病人感染ＨＣＶ的重要途径。本还对烧伤病人输血     

抗HCV-IgM抗体测定及临床初步应用

将市售ＨＣＶ－ＩｇＧ诊断试剂盒加以改良，建立了ＨＣＶ－ＩｇＭ抗体检测方法，与抗ＨＢｃ－ＩｇＭ，抗ＨＢｓ－ＩｇＭ，抗ＣＭＶ－ＩｇＭ，抗ＲＶ－ＩｇＭ，ＲＦ及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应。正常人群中抗ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性率为１．５％（１／６８），抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性的４３例血透患者检出抗ＨＣＶ－ＩｇＭ１４例（３２．６％），１２例输血后肝炎抗ＨＣＶ－ＩｇＭ全部阳性。以上结果表明，抗ＨＣＶ－ＩｇＭ可作为输血后ＨＣＶ感染的一个敏感指标     

乙型和丙型肝炎重叠感染患者组织免疫组织化学双标记研究

探讨丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒重叠感染患者肝组织中 复制状况和相互关系。方法采用免疫组织化学双标记技术，以抗－ＨＣＶ ＮＳ３，抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体和抗－ＨＢｓ，抗－ＨＢｃ多克隆抗体，检测２５例尸检肝组织中ＨＣＶＡｇ和ＨＢＶＡｇ的分布和表达。     

HCV核心蛋白片段的表达、纯化及免疫原性检测

目的：探讨HCV核心蛋白N端119aa片段表达产物的抗原性及用于抗-HCV抗体检测的可能性。方法：把HCV C119-pEq32a／BL21重组菌进行发酵表达，提取包涵体，并用阳离子柱进一步纯化目的蛋白。用Western blot及ELISA分析该融合蛋白的免疫特异性及敏感性。结果：所表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的20％，SDS-PAGE结果表明所纯化的目的蛋白纯度大于95％。Western blot及ELISA结果显示该融合蛋白具有良好的免疫特异性，所检测的47份临床HCV感染血清的阳性率为91．5％，而阴性对照及HBV感染血清则未见阳性结果。结论：该HCV Cll9融合蛋白检测HCV感染患血清具有良好的特异性和敏感性，可望用于HCV抗体检测试剂盒的研制。     

12280例非感染科患者HCV抗体检测结果分析

目的 了解输血前和手术住院患者肝脏健康状况,避免和预防院内感染及医疗纠纷的发生。方法 用酶联免疫法进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和丙肝(HCV)检测。结果 在12280例输血前和手术非感染科住院患者中,HCV感染占1.03%,HBsAg和HCV同时感染占0.17%。结论 非感染科住院患者HCV感染率明显高于自然人群,说明进行HCV检测具有必要性和重要性。     

HCV-核心抗原及HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的价值分析

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)-核心抗原及HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的价值.方法 选取2018年1月至2019年6月就诊于本院的140例疑似慢性丙型肝炎行抗HCV抗体检测阳性患者为研究对象,抽取患者3 mL空腹静脉血,使用荧光定量检测法HCV RNA,酶联免疫吸附法(ELISA)测定HCV-核心抗原,统计...     

丙型肝炎患者血清中HCV F抗体的检测

目的以丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)F蛋白作为抗原,检测HCV感染者血清中的相应抗体,观察F抗体在国内HCV感染人群中的阳性率及其与HCV感染的相关性。方法基因工程重组表达的F蛋白经亲和柱纯化后,包被微量滴定板,以ELISA法检测35份HCV感染者、8份非HCV感染的肝病患者及10份健康者的血清标本。结合患者疾病资料,统计学分析F抗体与HCV感染的相关性。结果在35份HCV感染者血清标本中,F抗体的阳性率为43%(15/35),对照组(8份非HCV肝病患者及10份健康者)血清中无一例F抗体阳性,两组之间有显著的统计学差异(P<0.005)。但未发现F抗体阳性与患者年龄、性别、病程及血清HCV载量之间的相关性。结论本研究首次报道了F抗体在国内HCV感染人群中的检出情况,将有助于F蛋白的致病性研究,也对探讨F蛋白的功能及进一步将其作为HCV感染检测指标的研究有促进作用。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒交叉中和抗体的检测

[摘要]目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。 方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T 细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。 结果32份HCV抗体阳性血清中,26份血清可检测出E2抗体,阳性率81.3%。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性,E2抗体水平与HCV RNA水平负相关。HCV E2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相平行。结论HCV感染可诱导保护性体液免疫应答,丙肝患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV-RNA检测

目的 :了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞 (PBMC)中HCV RNA存在情况及其意义。方法 :采用套式PCR检测 38例急性丙型肝炎和 36例慢性丙型肝炎患者血清和外周血PBMC中HCV RNA。结果 :74例丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性 6 8例 ,PBMC阳性 44例 ;急性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA阳性 15例 (39.5 % ) ,慢性丙型肝炎患者PBMC中阳性 2 9例 (80 .6 % )。慢性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙型肝炎患者 (P <0 .0 1)。 3例血清HCV RNA阴性 ,而PBMC中HCV RNA均阳性 ;8例患者血清抗 HCV阴性 ,而血清HCV RNA均阳性。结论 :PBMC可能为HCV肝外贮存和复制场所 ,PBMC中的HCV感染在丙型肝炎慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用 ;血清HCV RNA检测有助于抗 HCV阴性丙型肝炎的诊断。     

丙肝患者血清HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA检测的比较及肝功能的相关性研究

目的 探讨HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA及ALT、AST、γ-GT的相关性及临床应用价值.方法 ELISA方法检测HCV-Ab、HCV-cAg,PCR-荧光探针法检测HCV-RNA,全自动生化分析仪检测ALT、AST、γ-GT.结果 检测HCV感染者186例,其中HCV-Ab、HCV-cAg的阳性率分别为95.7％、25.3％、82.7％.ALT、AST、γ-GT水平与HCV病毒载量呈正相关（P＜0.01）.结论 同时检测HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA可充分掌握丙肝患者病毒感染情况,以及检测ALT、AST、γ-GT对抗病毒治疗的疗效评价及治疗时间有重要意义.     

Hepatitis C viral infection in a Chinese hemodialysis unit

Background The prevalence of hepatitis C virus （HCV） infection among maintenance hemodialysis （MHD） patients varies among countries and among dialysis units within a single country. The present study aimed to investigate the prevalence and characteristics of HCV infection in MHD patients in a Chinese hemodialysis unit.Methods One hundred and ninety-two patients on MHD for an average of （86.1±30.0） months （range 6-181 months） were enrolled in this cross-sectional study. HCV antibody and HCV-RNA were measured in these MHD patients before hemodialysis by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and polymerase chain reaction （PCR） methods.According to the result, all the patients were then divided into two groups： GroupⅠwas positive for HCV antibody and/or HCV-RNA （n=32）, and Group Ⅱ was negative for HCV antibody and HCV-RNA （n=160）. The following information was obtained for all the patients： socio-demographic data, history of blood transfusions and kidney transplantation, and some laboratory values. The MHD patients who were positive for HCV antibody and/or HCV-RNA were followed for more than three years. The disease activities were graded into ＂asymptomatic＂ if alanine aminotransferase （ALT） was less than 40 U/L,＂low activities＂ if ALT was 40-79 U/L, and ＂high activities＂ if ALT was equal to or above 80 U/L.Results The prevalence of HCV infection in MHD patients in our dialysis unit in May 2009 was 16.7, which was significantly higher than in general population （3.2%）. Among the 32 MHD patients with HCV positive, 20 patients were positive for HCV antibody but negative for HCV-RNA, eight patients were positive both for HCV antibody and HCV-RNA,four patients were negative for HCV antibody but positive for HCV-RNA. Eleven patients had a history of kidney transplantation and 12 had a history of blood transfusion, which were significantly more than among the MHD patients without HCV. Thirty of the 32 MHD patients were asymptomatic. There were no significant differences in age, aspartate aminotransferase （AST）, ALT, or between HCV-RNA positive group and HCV-RNA negative group. But the dialysis duration in the HCV-RNA positive group was significantly longer than that in the HCV-RNA negative group. All the 20HCV-RNA negative patients were asymptomatic. Two of the 12 HCV-RNA positive patients had low activity. None of the 32 cases with HCV positive markers had cirrhosis.Conclusions A high prevalence of HCV infection in MHD patients is related to blood transfusion and kidney transplantation. Occult HCV infection is present in MHD patients. Chronic hepatitis C among MHD patients is mild in disease activity, and is not progressive, perhaps due to immunological abnormalities in these patients.     

延边地区1996～2010年丙型肝炎病毒感染状况及危险因素分析

[目的]了解延边地区丙型肝炎病毒(HCV)感染情况及HCV感染的相关危险因素.[方法]选择1996～2010年延边大学附属医院检验室提供的丙型肝炎抗体检测资料,采用描述性流行病学方法进行分析,同时采用病例对照研究方法分析HCV感染的危险因素.[结果]1996～2010年丙型肝炎抗体阳性率逐年上升,呈现1996～2003年低水平维持阶段和2004～2008年快速增长阶段.丙型肝炎抗体阳性率随着年龄的增长而增高.HCV的主要感染危险因素仍然是破损的皮肤黏膜暴露.[结论]加强丙型肝炎知识的宣传教育,采取针对性措施是延边地区丙型肝炎预防与控制的重点.