苦参碱对人胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响

苦参碱作用广泛，具有抗病毒、抗感染、平喘、增强机体免疫力、升高白细胞、保肝等作用。近年来，其抑制肿瘤细胞生长的作用已经用于抗白血病的治疗,但在实体瘤的研究很少。本研究旨在探讨苦参碱对胆管癌细胞的作用及其机制。     

GABA对胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响

目的观察γ-氨基丁酸(GABA)对胆管癌细胞QBC939增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法观察GABA对人系胆管癌细胞QBC939增殖的作用,流式细胞术检测GABA对胆管癌细胞QBC939凋亡及其细胞周期的影响,放射免疫分析法检测cAMP含量。结果GABA抑制胆管癌细胞的增殖,呈剂量依赖性,流式细胞仪检测结果显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加(4.8%增至28.03%,P<0.05),同时促进胆管癌细胞内cAMP含量的增加。结论GABA抑制胆管癌细胞QBC939增殖,诱导细胞凋亡,可能机制是通过受体后信息介导的。     

光动力疗法对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响

目的 研究血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HPD)介导的光动力作用(photodynamic therapy,PDT)对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养人胆管癌QBC939细胞株,用不同浓度HPD处理,并用半导体激光治疗仪不同强度光照后,应用CCK8法检测PDT对QBC939细胞生长的相对抑制率.采用流式细胞术检测PDT作用前后QBC939细胞凋亡情况.应用RT-PCR检测PDT作用前后QBC939细胞中血管内皮细胞生长因子-C (VEGF-C)、环氧合酶-2 (COX-2)基因表达情况.用SP免疫细胞化学法测定PDT作用前后QBC939细胞质中VEGF-C、COX-2两种蛋白表达情况.用ELISA法测定PDT作用前后QBC939细胞上清中VEGF-C、COX-2两种蛋白分泌情况.结果 HPD-PDT在体外能够抑制QBC939细胞生长,HPD 10 mg/L经5 J/cm2光照强度时,实验组与空白组A值差异有统计学意义(P＜0.05),细胞生长抑制率达到70％.继续增加药物浓度或光照剂量,差异无统计学意义,细胞存活率降低不明显.流式细胞术显示HPD-PDT明显促进QBC939细胞早期凋亡.RT-PCR显示HPD-PDT能明显抑制QBC939细胞中VEGF-C、COX-2基因表达.SP免疫细胞化学法显示HPD-PDT能抑制QBC939细胞质中VEGF-C、COX-2两种蛋白表达.ELISA法显示HPD-PDT能抑制QBC939细胞VEGF-C、COX-2两种蛋白细胞外分泌.结论 HPD-PDT能抑制胆管癌QBC939细胞生长,促进胆管癌细胞早期凋亡.HPD-PDT对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过促进早期凋亡实现的,而VEGF-C、COX-2从基因到蛋白水平低表达可能是促进胆管癌QBC939细胞早期凋亡的途径.     

阻断Hedgehog信号通路可抑制胆管癌细胞QBC939的生长

目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)对人胆管癌细胞系QBC939增殖与凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测环靶明对QBC939细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率.RT-PCR法分别检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的mRNA表达及变化.Western blot检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的蛋白表达及变化.结果 环靶明抑制QBC939细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性.经5、10、20 μmol/L的环靶明作用48 h后,QBC939细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01).PTCH1、GLI1、EGFR的mRNA和蛋白均在QBC939中表达,环靶明下调QBC939的PTCH1、GLI1、EGFR表达.结论 阻断Hedgehog信号通路能抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,促进其凋亡.     

尼美舒利对体外培养人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用

近年来研究表明,环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂具有抑制结肠癌、胃癌、肝癌等癌细胞增殖的作用.我们采用选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胆管癌QBC939细胞,观察尼美舒利对胆管癌细胞的影响.……     

华蟾素对人胆管癌细胞系QBC939的作用

目的：探讨华蟾素对人胆管癌细胞株QBC939的抑制作用及可能的作用机制。方法：流式细胞仪检测华蟾素对QBC939细胞凋亡的作用，RT—PCR法研究华蟾素对人胆管癌细胞株QBC939Fas及caspase-3mRNA表达变化的影响。结果：不同浓度华蟾素作用于QBC939细胞48h后，流式细胞仪分析显示，凋亡细胞明显增多，与对照组相比有显著性（P〈0．001）。RT—PCR结果显示：leas、caspase-3mRNA表达实验组与对照组相比增强（P〈0．001）。结论：华蟾素作用于人胆管癌细胞株QBC939，促进其细胞凋亡，而这一作用的实现可能与Fas及caspase-3mRNA表达的上调有关。     

TFu对肝门部胆管癌细胞系FRH-0201增殖和凋亡的影响

目的探讨N3-邻甲苯甲酰基-氟尿嘧啶(N3-toluyl-FlulorouractilTFu)对FRH-0201细胞的生物学效应及其作用机制,为胆管癌临床化疗提供参考。方法光学显微镜、荧光显微镜观察FRH-0201细胞在TFu作用后形态学变化;集落形成实验检测TFu对FRH-0201细胞的增殖抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测DNALadder观察细胞的凋亡;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡并与5-Fu进行比较;MTT试验比较TFu与5-Fu等常用化疗药物对FRH-0201细胞抑制率。结果TFu能体外抑制FRH-0201细胞的增殖,其作用在0.016~4mmol/L范围内具有浓度依赖性及时间依赖性,同浓度比较抑制率高于5-Fu;流式细胞仪检测可见随作用时间延长,TFu及5-Fu组G1细胞期增多,S期细胞减少,细胞增殖被阻滞在G1期;细胞凋亡检测可见,随作用时间延长,TFu及5-Fu组较对照组细胞凋亡率增加,同时相TFu组凋亡率高于5-Fu组;化疗敏感性比较,TFu抑制FRH-0201细胞增殖作用不及阿霉素和顺铂,但明显优于5-Fu及泰素,联合用药阿霉素、顺铂和TFu联合对FRH-0201细胞抑制率最高,达79.02%,优于阿霉素、顺铂、5-Fu联合。结论TFu可明显抑制胆管癌细胞株FRH-0201细胞的增殖,该抑制作用可能通过阻滞细胞周期并进一步诱导细胞凋亡机制发生,同摩尔浓度TFu较5-Fu对FRH-0201细胞抑制作用强,TFu可作为胆管癌联合化疗的新药。     

索拉非尼对胆管癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

索拉非尼能抑制细胞转化分裂介质(Raf-1)、B-Raf、B-Raf V600E、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板源性生长因子受体(PDGFR)-h、Flt-3和c-Kit等多种激酶活性,已被美国食品药品监督管理局批准用于晚期肾癌及肝癌的治疗[1-2].国外临床前试验发现索拉非尼对胆管细胞癌也具有抗瘤活性,但确切机制尚不清楚[3-4].本实验旨在观察在体外条件下索拉非尼对胆管细胞癌增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.     

反义调控DNA甲基转移酶3b基因对人胆管癌细胞QBC939生长的影响

目的观察转染反义DNMT3b基因真核表达质粒对人胆管癌细胞QBC939生长的影响，初步探讨DNMT3b基因在胆管癌发生中的作用。方法构建反义DNMT3b基因真核表达质粒，用脂质体介导法将其转人人胆管癌细胞株QBC939；Western blot检测转染前后DNMT3b蛋白表达的变化；MTT法和软琼脂克隆形成试验观察细胞的生长增殖能力；流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果转染反义基因能使DNMT3b蛋白表达水平降低；转染反义DNMT3b基因不能抑制QBC939的生长曲线，对其软琼脂克隆形成率亦无影响（P=0．717）；转染反义DNMT3b基因不能改变QBC939的细胞周期和促进细胞凋亡（P=0．089）。结论转染反义DNMT3b基因真核表达质粒可下调DNMT3b在QBC939细胞中的表达水平，但对QBC939的生长和增殖无影响，也不能改变QBC939的细胞周期和促进细胞凋亡的发生。     

1,25二羟维生素D3与5-氟尿嘧啶对乳腺癌细胞生长及凋亡的影响

目的研究1，25二羟维生素D3[1，25(OH)2D3]与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人乳腺癌细胞株MCF-7生长及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞术测定细胞周期和凋亡率，免疫组织化学法检测bcl-2蛋白表达。结果1，25(OH)2D3与5-Fu均可抑制MCF-7细胞生长、1，25(OH)2D3阻滞细胞周期于G0／G1期，5-Fu阻滞细胞周期于S期，并可诱导细胞凋亡；当两药联合应用时，上述作用得到显著加强，凋亡率明显上升。两药均可下调bcl-2蛋白表达，当两药联合应用时，bcl-2蛋白几乎不表达。结论1，25(OH)2D3与5-Fu联合应用对乳腺癌细胞具有协同抑制生长和诱导凋亡作用。     

地塞米松和1，25(OH)2D3对体外人骨髓基质细胞成骨及成脂分化的影响

目的 观察地塞米松（Dex）和1，25（OH）2D3（D3）对骨髓基质细胞（MSCs）成骨及成脂分化的影响。方法 以离心法分离培养人MSCs，以10^-7mol／LDex和，或10^-8mol／Ll，25（OH）2D3作为分化诱导剂对细胞进行干预，分别用细胞碱性磷酸酶（ALP）染液试剂盒及苏丹Ⅲ染液对成骨细胞和脂肪细胞进行组织化学染色，计数；使用RT-PCR技术在转录水平检测成骨细胞标记物骨桥蛋白（OPN）及脂肪细胞标记物过氧化酶体增殖激活受体72（PPARγ2）mRNA的表达。结果细胞染色结果表明各干预组ALP^＋细胞百分比均较对照组增加，与对照组相比有显著性差异（P〈0．05），苏丹Ⅲ^＋细胞百分比Dex组较对照组增多，耽组较对照组减少，差异有显著性（P〈0．05），Dex＋D3组较Dex组苏丹Ⅲ^＋细胞数明显减少，两者相比差异有显著性（P〈0．05）；OPNmRNA及PPARγ2mRNA表达未在对照组测得，Dex诱导了OPNmRNA及PPARγ2mRNA表达，1，25（OH）2D3诱导OPNmRNA表达，并抑制Dex诱导的PPARγ2mRNA的表达。结论 Dex促进MSCs的成骨分化及成脂分化，1，25（OH），D，促进MSCs的成骨分化的同时抑制其成脂分化，与Dex合用抑制Dex成脂分化作用，强化了其成骨分化作用，反映了成骨细胞与脂肪细胞间存在的反变关系，表明两者来源于同一前体细胞的可能性。     

血清l，25(OH)2D测定及女性正常值的建立

目的 研究建立血清１,２５（ＯＨ）２Ｄ含量的检测方法及女性正常值。方法 用特定的试剂和分离柱分离纯化样品后,放免分析法测定,并观察不同年龄段女性人群的血清１,２５（ＯＨ）２Ｄ含量变化规律。结果 女性健康人群的血清１,２５（ＯＨ）２Ｄ正常值范围是５．５～６０．８ｐｇ／ｍｌ,均值是２７．７±１１．０ｐｇ／ｍｌ,且血清１,２５（ＯＨ）２Ｄ含量随着年龄的增加逐渐下降（Ｐ〈０．０１）,两呈中度相关（ｒ＝－     

23(S)25(R)-1,25-Dihydroxyvitamin D3-lactone, a naturally occurring metabolite of 1,25-dihydroxyvitamin D3, inhibits osteoclast-like cell formation in human bone marrow cultures

We have used a human bone marrow culture system that forms multinucleated cells (MNCs), 50% of which express the osteoclast phenotype, to examine the 23(S)25(R)-1,25-dihydroxyvitamin D₃-26,23-lactone (1,25-D₃-lactone) on osteoclast-like cell formation. The 1,25-D₃-lactone is a vitamin D₃ metabolite that has recently been detected in human serum under physiological conditions at concentrations of approximately 131 pg/ml (3 × 10⁻¹⁰ M) and can inhibit bone resorption induced by 1,25-dihydroxyvitamin D₃ (1,25-D₃) in vivo and in vitro. We examined the effects of the 1,25-D₃-lactone on the formation of MNC that cross-reacted with 23C6 monoclonal antibody (23C6-positive MNC), which preferentially binds to osteoclasts. All metabolites of 1,25-D₃ except the 1,25-D3-lactone increased both total and 23C6-positive MNC formation in a dose-dependent manner. In contrast, the 1,25-D₃-lactone inhibited both total and 23C6-positive MNC formation, whether the cultures were treated with 1,25-D₃, parathyroid hormone, or interleukin-1β, all potent stimulators of MNC formation. This inhibitory action of 1,25-D₃-lactone on MNC formation was very similar to the inhibitory effects of calcitonin. These data suggest that (1) 1,25-D₃-lactone is a potent natural inhibitor of formation of cells with the osteoclast phenotype at physiological concentrations and (2) the inhibition of these cells by 1,25-D₃-lactone may not result solely from its competitive binding to the 1,25-D₃ receptor. Received: April 24, 1997 / Accepted: May 30, 1997     

1，25（OH）2VD3诱导小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化的研究

目的 探讨1,25(OH)2VD3在诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)向成骨细胞分化过程中的重要作用.方法 取2 d龄昆明小白鼠颅盖骨进行成骨细胞分离培养;参照并改进zur Nieden等的方法制备拟胚体(embryoid bodies,Ebs).将Ebs根据培养液不同分为4组:A组:不含白血病抑制因子Ebs培养液;B组:Ebs培养液中添加50μg/mL维生素C、50 mmol/L β-磷酸甘油;C组:培养液同B组,另每孔接种5×104个第3代成骨细胞;D组与C组相同,另添加4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3.检测ALP活性,实时定量PCR检测骨钙素mRNA的表达,茜素红S染色进行矿化骨结节计数.结果 Ebs贴壁后前5 d,各组ALP表达未发生明显变化,5 d后ALP表达逐渐增加,其中D组在第20天表达水平最高.光镜下可见轮廓清晰大小不等的红色结节.茜素红S染色测得A、B、C、D组骨结节数分别为(20±8)、(18±5)、(31±1)、(50±1)个:实时定量PCR测得A、B、C、D组骨钙素mRNA分别为10.18±1.17、20.29±1.03、18.84±4.07、32.15±5.23:C、D组与A、B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),C、D组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在浓度为4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3和维生素C、β-磷酸甘油共同作用下,有效促进了ESCs源性成骨细胞的产生.     

1,25(OH)2D and 24,25(OH)2D production in the developing kidney

To clarify the state of vitamin D production by the developing kidney, firstly, we measured serum levels of 1,25(OH)₂D and 24,25(OH)₂D in humans of different ages (pregnant and nonpregnant women, adult males, children and newborn infants) and secondly, we measured 1- and 24-hydroxylase activity in the kidney mitochrondria of rats at different ages. The mean serum levels of 1,25(OH)₂D in pregnant women, cord blood and newborns were significantly higher than those in children and non-pregnant women and adult males. In newborns, the level increased with gestational age. Synthesis of 1,25(OH)₂D was, at least in part, under the control of the fetus and newborn, rather then being solely a reflection of the conditions prevailing in the mother. The 1-hydroxylase activity in mitochondria was highest in the 1- to 2-month-old rats, and it decreased gradually thereafter. The change in 1-hydroxylase activity with age was due to a change in the V_max of the system.     

1,25(OH)2D3体外抑制小鼠Th17细胞分化的用研究

目的 探讨1,25(OH)2D3对Th17细胞分化的体外抑制作用.方法 通过对分离出的脾淋巴细胞进行CD4+T细胞分选,将不同浓度的1,25(OH)2D3加入到CD4+T细胞中并在诱导因子的作用下诱导其分化.通过ELISA检测培养上清中IL-17A和IL-22的浓度;流式细胞仪分析Th17细胞的比例及RT-PCR检测Th17细胞分化的转录因子的表达.结果 培养上清ELISA检测显示:与对照组相比,1,25(OH)2D3组的IL-17A和IL-22浓度随着加入1,25(OH)2D3浓度的增大而呈现逐渐降低的现象,差异且具有统计学意义(P＜0.01);流式结果显示:诱导分化后对照组Th17细胞比例最多,1,25(OH)2D3组处理后Th17细胞比例降低,且呈剂量依赖性;RT-PCR检测显示:与对照组相比,1,25(OH)2D3组IL-17A、IL-22,RORγt和RORα 表达量随着剂量的增加而逐渐降低,并具有统计学意义(P＜ 0.01).结论 体外实验表明,1,25(OH)2D3具有抑制Th17细胞分化的作用,表现为Th17细胞比例、分泌的细胞因子及特异的转录因子表达均减少.     

慢性肝病患者血清VitD3水平与骨代谢的关系

检测了部分慢性乙型肝炎（下简称慢乙肝）及肝硬化患者的血清1，25（OH）2D3，骨钙素（BGP），甲状旁腺素（PTH），钙，磷及尺桡平均密度（BMD），并与对照组比较，结果两组患者血清1，25（OH）2D3，BGP及BMD值均明显下降，肝硬化组下降尤为显著，肝硬化组血清PTH显著升高，两组患者血钙明显降低，而血磷三组间无差异，1，5（OH）2D3水平与BGP，BMD呈显著正相关；PTH与血钙，BMD无相关性。提示慢性肝病患者存在以骨形成减少为主的骨代谢紊乱，其中血清1，25（OH）2D3减少为关键因素，PTH虽升高，但与肝病患者骨密度变化无相关。     

两种1,25（OH）2D3疗法对继发性甲旁亢的疗效比较

目的 比较1,25(OH)_2D_3(钙三醇)间断冲击与持续小剂量口服两种治疗方法对继发性甲旁亢(secondary Hyper-parathyroidism,SHP)患者的疗效。方法 26例血清甲状旁腺激素全段(Intac parathyroid hormone,iPTH)>20pmol/L的血透患者,随机分为钙二醇口服冲击治疗组(组A)及小剂量治疗组(组B),以iPTH≤10pmol/L为治疗终点,疗程16周。每四周测血清钙(SCa)、磷(SP)、碱性磷酸酶(AKP)及iPTH,疗程结束(或达治疗终点)后测血清骨钙素(BoneGLA protein,BGP)、Ⅰ型前胶原羧基前肽(Carboxy-terminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PICP)及Ⅰ型胶原羧基交联调聚肽(Carboxy-teminal cross-linked telopeptide of type,ICTP)。结果 12周及16周后,组A达到治疗终点的百分率显著高于组B(71％ vs 27％),未达到治疗终点的患者,其治疗前的甲状旁腺体积较达到治疗终点的患者显著增大。与治疗前相比,组A第4、8及12周后,iPTH显著降低;8及12周后AKP显著降低,SCa显著增高;12周后,BGP及ICTP显著降低。组B治疗前后上述指标均无明显变化。结论 钙三醇间断口服冲击疗法对血透患者SHP的疗效优于持续小剂量疗法。     

老年骨质疏松症患者监测25(OH) D3 水平的临床意义

从老年骨质疏松症发病情况入手,探讨维生素D治疗骨质疏松的作用机制、活性代谢产物种类以及活性维生素D监测的临床意义,有利于指导临床用药,使老年骨质疏松症患者做到个体化治疗。     

Effect of 1,25(OH)2D3 and 24,25(OH)2D3 on calcium ion fluxes in costochondral chondrocyte cultures

Summary Vitamin D₃ metabolites have been shown to affect proliferation, differentiation, and maturation of cartilage cells. Previous studies have shown that growth zone chondrocytes respond primarily to 1,25(OH)₂D₃ whereas resting zone chondrocytes respond primarily to 24,25(OH)₂D₃. To examine the role of calcium in the mechanism of hormone action, this study examined the effects of the Ca ionophore A23187, 1,25(OH)₂D₃, and 24,25(OH)₂D₃ on Ca influx and efflux in growth zone chondrocytes and resting zone chondrocytes derived from the costochondral junction of 125 g rats. Influex was measured as incorporation of⁴⁵Ca. Efflux was measured as release of⁴⁵Ca from prelabeled cultures into fresh media. The pattern of⁴⁵Ca influx in unstimulated (control) cells over the incubation period was different in the two chondrocyte populations, whereas the pattern of efflux was comparable. A23187 induced a rapid influx of⁴⁵Ca in both types of chondrocytes which peaked by 3 minutes and was over by 6 minutes. Influx was greatest in the growth zone chondrocytes. Addition of 10⁻⁸–10⁻⁹ M 1,25(OH)₂D₃ to growth zone chondrocyte cultures results in a dose-dependent increase in⁴⁵Ca influx after 15 minutes. Efflux was stimulated by these concentrations of hormone throughout the incubation period. Addition of 10⁻⁶–10⁻⁷ M 24,25(OH)₂D₃ to resting zone chondrocytes resulted in an inhibition in ion efflux between 1 and 6 minutes, with no effect on influx during this period. Efflux returned to control values between 6 and 15 minutes.⁴⁵Ca influx was inhibited by these concentrations of hormone from 15 to 30 minutes. These studies demonstrate that changes in Ca influx and efflux are metabolite specific and may be a mechanism by which vitamin D metabolites directly regulated chondrocytes in culture.