拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒YMDD野毒株和变异株的变化

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者应用拉米夫定治疗前后,YMDD野毒株及变异株的动态变化,并分析其临床意义。方法 取5例CHB患者治疗前与治疗48周的10份血清标本,先用PCR法扩增包括YMDD基序的乙型肝炎病毒(HBV)部分核苷酸序列,然后进行DNA序列测定,同时分别进行克隆,每份标本随机挑选20～24株单克隆,用实时荧光PCR法检测YMDD野毒株及其变异株。结果 5例CHB患者治疗前PCR产物直接测序结果未检出YMDD变异,治疗48周时有4例检出YMDD变异,但对每株克隆的分别检测显示：治疗前YMDD变异株(YIDD／YvDD)所占比率分别为0％、9．5％、0％、4．5％、5．6％;治疗48周时所占比率分别为100％、100％、65％、100％、0％。其中1例患者治疗前检出YIDD变异株,而治疗48周时YVDD变异株则变成优势株。治疗52周时,4例YMDD变异患者中2例HBVDNA和血清丙氨酸转氨酶(ALT)突破,1例患者ALT突破,但HBVDNA为阴性。结论 YMDD变异株在拉米夫定治疗前的血清中已存在,在服用拉米夫定后,由于选择性抑制了野毒株,使YMDD变异株由弱势株变成优势株,部分患者可导致拉米夫定临床耐药。YVDD变异株可能比YIDD变异株的复制能力强。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV发生YMDD变异的检测

目的建立乙型肝炎病毒Ｐ基因区ＹＭＤＤ变异的检测方法,对用拉米夫定治疗５２周出现耐药的病人进行检测。方法从８８例治疗病人中选择１０例服用该药后ＨＢＶＤＮＡ转阴（＜１．６ｐｇ／ｍｌ）,５２周时又反跳≥２０ｐｇ／ｍｌ的病人,用 ＰＣＲ后直接测序的方法,分别对 ０周和 ５２周标本进行 ＨＢＶ ＤＮＡ聚合酶活性区域的测序。结果 １０例服药５２周后ＨＢＶ ＤＮＡ反跳病人中７例测得ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异。其变异分为两种类型：第一种类型为ＹＶＤＤ有５例,有核苷酸Ａ７４１→Ｇ,均伴有Ａ６６９→Ｃ的变异。第二种类型为ＹＩＤＤ有２例,有核苷酸Ｇ７４３→Ｔ,其中１例还有Ｔ７８１→Ｃ。结论少数病人在拉米夫定治疗过程中出现耐药,可能和ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异有关。     

基因芯片检测拉米夫定治疗后乙型肝炎病毒变异

拉米夫定是一种对乙型肝炎病毒(HBV)DNA复制有很强抑制作用的核苷类似物,目前已广泛应用于临床,但其会引起HBV DNA聚合酶活性区发生变异(YMDD变异),而影响其治疗效果或加重病情。在治疗前、治疗中及停药后,监测HBVDNA YMDD变异情况,对于指导临床用药、判定疗效和推测预后都具有十分重要的意义[1]。我们尝试将基因芯片技术引入乙型肝炎病毒变异检测,制作了乙型肝炎病毒YMDD变异诊断芯     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎发生YMDD变异的研究

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）发生YMDD变异的临床意义。方法分别用荧光定量PCR、ELISA检测72例用拉米夫定治疗的CHB患者治疗前（0个月）、治疗中（9、12、18个月）YMDD变异的情况、HBVDNA定量水平、两对半等指标。结果72例CHB患者中,拉米夫定治疗前未检查出YMDD变异,治疗9、12、18个月分别检出YMDD变异8例（11.1%）,17例（23.6%）,28例（38.9%）,随治疗时间的延长,YMDD变异率升高（P〈0.05）。另外用药前HBVDNA定量〉108copies/ml与HBVDNA定量〈108copies/ml相比YMDD变异率显著升高（P〈0.005）。HBeAg阳性组与HBeAg阴性组的患者在不同治疗时间YMDD变异率,差异无显著性（P〉0.05）。结论YMDD变异的发生随治疗时间的延长而增加。血清病毒载量可作为应用拉米夫定治疗YMDD变异产生的早期预测指标。     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒YMDD变异的相关因素分析

目的 了解遵义地区HBV基因型以及拉米夫定治疗前后发生YMDD变异的相关因素,及早进行拉米夫定疗效及耐药的预测. 方法 53例慢性乙型肝炎患者分别在口服拉米夫定前及治疗后3、6、12、18、24个月进行血清HBV DNA定量、乙型肝炎标志物、ALT、AST、总胆红素,白蛋白的检测.同时在接受拉米夫定治疗前采用基因测序法检测HBV基因型及YMDD变异株,治疗后HBV DNA定量下降又反弹升高,且血清HBV DNA＞1×104拷贝/ml时,再次进行YMDD变异株检测.率的比较用卡方检验及确切概率法,两组均数之间比较采用独立样本t检验,有序变量之间的比较采用秩和检验.结果 遵义地区的HBV基因型由B、C及B+C基因型构成.拉米夫定治疗后18例检出YMDD变异株,用药1年和2年的变异率分别为15.1%和34.0%.HBV突变类型有rtL180M/M204V、rtL180M/M204I、rtM204I和rtL180M四种,其中C区rtM204V全部合并rtL180M突变(100%),C基因型中rtL180M/M204V联合突变及rtL180M/M204I联合突变明显高于B基因型(77.8%比25.0%及22.2%比12.5%);C基因型中未见点突变,而rtM204I、rtL180M的点突变仅见于B基因型.YMDD变异与未变异组性别、民族、乙型肝炎家族史及HBeAg情况差异无统计学意义(P＞0.05),病程≥2年组和年龄＜35岁组变异率明显升高(X2值分别为4.707和5.853,P值均＜0.05).不同HBV DNA滴度患者YMDD变异率差异无统计学意义(X2=0.801,P＞0.05),但HBV DNA＜105拷贝/ml者未发现YMDD变异.结论 拉米夫定治疗后YMDD变异可能与HBV基因型及P基因突变类型有关,并随治疗时间的延长而增加.为了减少YMDD变异的发生,应选用病程短、HBV DNA水平较低、肝损害较重的患者进行拉米夫定治疗,有条件的应检测HBV基因型.     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒YMDD变异的相关因素分析

Objective To identify factors associated with YMDD mutation in patients with chronic hepatitis B before and after Iamivudine treatment in Zunyi region.Methods 53 patients with chronic hepatitis B were enrolled in this study,HBV DNA,HBV markers,ALT,AST,TBil,albumin in the serum were examined at 0,3,6,12,18 and 24 months after lamivudine treatment.HBV genotype and YMDD mutation were determined by sequencing before lamivudine treatment.YMDD mutation was checked again if serum HBV DNA rebound to more than 1×104 copies/ml after the initial decrease.Results HBV genotype in Zunyi region iS constitute of B.C and B+C genotype.YMDD mutation occurred in 18 cases after lamivudine treatment.the rate of YMDD mutation was 15.1%,and 34.0% after 1 year and 2 years treatment.There are four types of mutation:nL180M/M204V,rtL180M/M2041,rtM204I,nL180M.rtM204V mutation in C gene was always acompanied by rtL180M mutation (100%). The rate of rtL180M/M204V mutation in genotype C group was significantly higher than that in genotype B group (77.8% to 25.0%),the same was true for the rtL180M/M204I mutation (22.2% to 12.5%). There was no point mutation in genotype C group. The point mutation of rtM204I and rtL180M appeared only in genotype B group. Gender,nation,family history of hepatitis B and HBeAg were not associated with YMDD mutation (P ＞ 0.05),while the mutation rate was associated with the disease course and severity of disease. YMDD mutation did not occure in patients with low HBV DNA level (＜105 copies/ml). Conclusion YMDD mutation after lamivudine therapy is associated with HBV gnnotype and P gene mutation type,and prolonged treatment increases the the mutation rate. In order to reduce the incidence of YMDD mutation,patients with shorter disease course,lower HBV DNA level,more serious liver damage should be treated with iamivudine.     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒P区基因的动态变化

目的研究拉米夫定治疗前后慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒P基因区的变异情况。方法从5例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前和治疗12个月的血清标本中，扩增目的片段，阳性结果双酶切后克隆至JM105感受态细胞。每份标本随机挑取20个阳性克隆，以错配聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析法检测YMDD基因序列，出现变异者进行双向测序。结果5例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗12个月后，其中2例HBVDNA为阴性，2例HBVDNA转阴后又转阳，测序结果提示出现M5521变异；1例HBVDNA始终阳性，和治疗前一样存在D553G的变异。结论D553G变异可能是慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗无效的原因之一，拉米夫定治疗后出现的乙型肝炎病毒基因组P区YMDD变异是抗病毒药物诱导的结果。     

拉米夫定加肝络欣治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响

观察拉米夫定加肝络欣联合治疗慢性乙型肝炎的疗效及对慢性乙型肝炎病毒P基因(YMDD)变异的影响。收集乙型肝炎病毒(HBV)HBeAg、HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者6 7例,分为拉米夫定加用肝络欣组(A组)、单用拉米夫定组(B组)。分别检测血清HBeAg、抗-HBe、HBVDNA ,肝脏生化指标和基因YMDD变异。在治疗5 6周时,拉米夫定联合肝络欣组HBeAg/抗-HBe转换率(39. 4 % ) ,优于拉米夫定组(P <0 .0 5 )。HBVDNA阳性率及YMDD变异率都比拉米夫定组低(P <0 . 0 5 )。拉米夫定联合肝络欣能在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的疗效并可减少YMDD变异。     

拉米夫定治疗相关的乙型肝炎病毒变异研究进展

拉米夫定治疗相关HBV变异多发生于活性最强、包含第546－575位氨基酸的C区段酪氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸(YMDD)位点,亦涉及第501－545位氨基酸的B区段。YMDD位点是HBV逆转录酶的活性部分,属高度保守序列。在HBV 的逆转录过程中,     

拉米夫定抗乙型肝炎病毒感染中YMDD变异类型及时间研究

目的 研究拉米夫定抗乙型肝炎病毒(HBV)感染中P基因发生YMDD变异的类型和出现时间。方法 取拉米夫定治疗过程中HBV DNA由阴性再次转为阳性33例患者及HBV DNA始终保持阳性达一年或一年以上2例患者的血清,经PCR扩增HBV的P基因,对扩增产物进行测序及用3个限制性内切酶分析HBVP基因的YMDD变异。 结果 14例出现YMDD变异,其中6例YVDD变异,4例YIDD变异,3例YI/VDD混合变异,1例YI/MDD变异。变异出现时间平均为(11.07±3.65)个月,最短5个月,最长7个月。其中YIDD为(10.00±1.41)个月,YVDD为(11.67±4.41)个月,YI/VDD为(13.33±3.31)个月,三种变异类型的出现时间差异无显著性(F=0.543,P>0.05)。3例YMDD变异后拉米夫定加量至200mg/d,未能消除变异病毒。 结论 拉米夫定抗HBV感染后变异有多种形式,包括YIDD、YVDD、YI/VDD、YI/MDD。变异发生时间一般在治疗后(11.07±3.65)个月。变异类型与用药时间无关。     

拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒多聚酶变异的检测

目的建立拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒多聚酶变异的检测方法,对该部位变异类型、发生率及其与病毒滴度的关系进行初步分析。方法拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者164例,在其中治疗64周时HBVDNA阳性的101份血清中,选择9份血清进行分析。设计台成一对引物SI、A1,采用聚台酶链反应法扩增得到包括YMDD基序（motif）的部分P区基因,片断长926bp,对扩增片断的部分校苷酸（约500bp）进行序列分析。HBVDNA定量用分枝DNA信号扩增祛。结果在9例患者中,发现YMDD（酪氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸）基序变异的5例,占56％,其中M（蛋氨酸）－I（异亮氨酸）3例,M（蛋氨酸）－V（缬氨酸）2例,后者合并D（天门冬氨酸）→G（甘氨酸）变异1例。在2例血清HBVDNA低滴度（＜100MEq／ml）患者中未发现YMDD基序变异,7例中、高滴度（＞300ME／ml）患者中5例发现YMDD基序变异,占71％。结论拉米夫定是一种新的治疗慢性乙肝较有潜力的抗病毒药物,若能在治疗过程中对HBVDNA滴度变化及病毒变异发生进行监测,可指导临床的合理用药及联台用药。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎病人的长期疗效

通过多中心,承机,双盲,安慰剂对照的临床试验,研究拉米夫定（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）对慢性乙型肝炎（乙肝）病人的疗效和安全性。方法随机选择３２２例慢性乙肝病拉米夫定治疗（１００ｍｇ／ｄ）,１０７例病人服用安慰剂作对照,共治疗１２周,在１２周治疗结束后,拉米夫定组和安慰剂组病人均继续服用拉米夫定１００ｍｇ治疗至５２周。疗效评估包括临床症状和体征,肝功能和ＨＢＶ复制指标。结果治疗１２周,拉米夫定组ＨＢＶ     

泛昔洛书加拉米夫定联合治疗的HBV清除动力学比较

目的 比较单用拉米大定和泛昔洛韦加拉米在定联合治疗对ＨＢＶ清除动力学的影响。方法 ２１例ＨＢｃＡｇ阳性慢性乙型肝炎分二组分别接爱核苷类似物治疗,９例单用拉米大定１５０ｍｇ,每日一次,共１２周,１２例洛昔韦加拉米与夫定联合治疗,其中拉米夫定１５０ｍｇ,每日一次,稼昔洛韦５００ｍｇ,每日三次,共１２周,每一病例均有治疗前中后系列血清标本检测ＨＢＶ ＤＮＡ。按照蒋氏数学模型分析二种治疗方案对ＨＢＶ动力学     

乙型肝炎病毒多聚酶变异与拉米夫定治疗反应

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）多聚酶酪氨酸－蛋氨酸－天氧氨酸－天冬氨酸（YMDD）基序变异对拉米夫定抗病毒疗效的影响。方法 对19例拉米夫定治疗（100mg/d）48周时血清病毒核酸阳性的慢性乙型肝炎患者,采用聚合酶链反应（ PCR）产物直接测序技术,检测其血清中HBV多取和酶（YMDD）变异情况,并观察其血清HBV DNA和丙氨酸转氨酶（ALT）水平。结果 在检出YMDD变异株的10 例患者（4例为YV^550DD型,均伴L^526→M突变,6例为YI^550DD型）,至52周为止,共5例出现HBV DNA突发（分枝DNA信号扩增法）,其中2例伴ALT再高。追踪其治疗前血清均未发生上述变异。而在未检出YMDD变异的9例患者中,1例出现DNA突发后又阴转,而另1例治疗过程中HBV DNA未阴转、ALT始终波动于正常值上下的患者,发现多聚酶其他部位的变异^473→R,D^477→N,D^480→N,L^491→M)治疗前后相同。结论 乙型肝炎病毒多聚酶（ YMDD）变异与药物诱导相关,发生变异者较无变异者疗效降低;在拉米夫定治疗过程中,该变异的检测将有助于其疗效监测。     

拉米夫定治疗其他方法抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者的疗效

目的观察拉米夫定对复发性慢性乙型肝炎患者的疗效和安全性。方法选择27例其他方法抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者,给予拉米夫定100mg口服,每日一次,连续服用12个月。结果治疗后12个月时ALT和血清总胆红素平均值(分别为52.7±26.5U/L和19.7±21.1μmol/L),与治疗前平均值(211.3±182.4U/L和54.6±28.8μmol/L)相比显著下降(P<0.01);其ALT复常率为88.9%(24/27),HBV DNA阴转率77.8%(21/27),HBeAg阴转率29.6%(8/27),HBeAg/抗-HBe血清转换率18.5%(5/27)。停药后6个月内有7例复发。治疗全程未见严重不良反应。结论拉米夫定治疗其他方法抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者也能够迅速抑制病毒的复制,使肝功能复常,而且安全、方便。     

乙型肝炎病毒基因分型与拉米夫定临床应用反应

目的了解常州地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布特征,探讨基因型与肝功能损害、病毒复制水平及其与拉米夫定疗效关系.方法 76例慢性乙型病毒性肝炎患者每天口服拉米夫定100mg治疗,并于治疗4～6周时测定不同基因型患者的丙氨酸转氨酶(ALT)和HBV DNA,治疗48周后测定HBV DNA反跳和YMDD变异.采用巢式聚合酶链反应(nest PCR)法扩增HBV S基因区,以4色荧光标记PCR产物末端,在以毛细管高压电泳为核心技术的核酸序列分析仪上自动测序,将测序结果与基因库中登录的标准基因型序列相比较.结果 76例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA基因分型示B型株感染26例(34.2%),C型株感染50例(65.8%).B和C基因型患者ALT值分别为(246.3±138.8)U和(283.7±125.6)U,(t=0.335,P>0.05),HBV DNA含量分别为107.124±101.49和107.189±101.56拷贝/ml(t=0.138, P>0.05),HBeAg阳性数分别为20例和41例(χ2=0.159,P>0.05).拉米夫定治疗4～6周后,B基因型和C基因型患者ALT、HBV-DNA(阴转)、HBV DNA(拷贝/ml)均呈良好恢复状态,两组间差异无显著性.治疗48周后,HBV DNA反跳者B基因型20例,C基因型16例(χ2=13.49,P<0.001).结论常州地区HBV DNA基因型以单一B或C型为主;不同基因型患者ALT水平、病毒复制水平以及HBeAg表达水平差异均无显著性,拉米夫定对C基因型患者的疗效优于B基因型.     

Measurement of hepatitis B virus core-related antigen as predicting factor for relapse after cessation of lamivudine therapy for chronic hepatitis B virus infection

Background

Prolonged lamivudine therapy has two major problems: breakthrough hepatitis during treatment and relapse of aminotransferase (ALT) after cessation of the therapy. The aim of this study was to examine factors that could predict ALT flare after stopping lamivudine therapy.

Methods

We analyzed 22 Japanese patients with chronic hepatitis B infection, in whom lamivudine therapy was stopped after HBV DNA level had been gone undetectable (<3.7 LGE/ml) during at least six consecutive months. The post-treatment followed up was carried for 28 months in median (range 9–41). HBV core-related antigen (HBcrAg) assay was assessed using newly developed assay.

Results

After cessation of lamivudine therapy, 11 patients (50%) had relapsed (reactivation of serum ALT >80 IU/l, relapsers) and remaining 11 (50%) did not relapse (non-relapsers). In the univariate comparison of relapsers versus non-relapsers, HBcrAg level at lamivudine cessation point (4.5 ± 1.0 versus 3.4 ± 0.9; p = 0.0145) has been shown as a significant predictive factor for non-relapse. All patients with HBcrAg <3.0 log U/ml at the cessation point had no ALT flares. Multivariate analysis on effects of 10 factors (age, sex, cirrhosis, pretreatment ALT level, HBV DNA level, HBcrAg level, mean months till undetectable HBV DNA, duration of undetectable HBV DNA and HBcrAg level at lamivudine cessation point), indicated that HBcrAg level at lamivudine cessation point <3.4 log U/ml was the only independent predictive factor for absence of the post-treatment relapse.

Conclusions

HBcrAg level at lamivudine cessation point might be useful as a prognostic predictor of response to lamivudine therapy cessation. The measurement of HBcrAg is a useful additional test for monitoring chronic HBV infection.