McAb共刺激PBLs淋巴细胞在培养体系中的状态及超微结构的 …

通过用抗ＣＤ３,ＣＤ２８＋ＣＤ８０ ＭｃＡｂ激活健康人的ＰＢＬｓ,并以ＰＨＡ,ＩＬ－２,ＰＢＬｓ为对照组;对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察。结果提示：ＣＤ３及ＣＤ２８＋ＣＤ８０刺激淋巴细胞增殖外,也能使淋巴细胞活化,细胞表现为胞体增大,细胞器增多,具有粗大的绒毛和突出伪足,并可见单核细胞吞噬活跃。     

双特异性McAb共刺激PBLs作用肝癌细胞后的超微结构的观察

Ｔ细胞表面ＣＤ２８（受体）与ＡＰＣ细胞表面Ｂ７分子（配体）的结合似乎提供了Ｔ细胞激活所需的主要共刺激信号。共刺激信号是激发有效的细胞免疫应答所必须的,Ｂ７分子家族及ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４等在共刺激信号的传递过程中起重要作用。肿瘤细胞表面不表达Ｂ７分子或表达但并不能引起有效的肿瘤免疫应答［１］。本文选用ＣＤ２８和ＣＤ８０ＭｃＡｂ来激活Ｔ细胞,作用于肝癌细胞结果引起凋亡,现报道如下。１　材料与方法１１　淋巴细胞的分离培养正常人外周血（ＰＢＬｓ）１００ｍＬ（广州血液中心提供）,加等体积Ｈａｎｋ′ｓ…     

McAb共刺激PBLs细胞超微结构的变化和作用肝癌细胞时间的选择

目的 根据McAb共刺激PBLs在不同抗体和不同时间里淋巴细胞的形态变化,找出免疫治疗的最佳时间。方法 用McAb抗CD3,CD28 CD80激活健康人的PBLs,对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察,并将淋巴细胞作用于肝癌细胞后BEL-7402。结果 CD3及CD28 CD80除刺激淋巴细胞增殖外,也能使淋巴细胞活化,细胞表现为胞体增大,细胞器增多,具有粗大的绒毛和突出伪足,并可见单核细胞吞噬活跃;CD28 CD80McAb组PBLs72h后作用BEL-7402肝癌细胞出现典型的凋亡现象。结论 本研究对肿瘤的T细胞治疗有重要意义,为肿瘤生物治疗用药时机提供依据。     

抗原诱导T细胞受体(TCR)Vβ基因表达特征(之三)McAb共刺激PBLs在肿瘤免疫治疗中的应用

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，本研究采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ...     

慢性淋巴细胞性白血病独特型McAb的研究

作者通过细胞融合技术获得10株抗独特型McAb,并对抗独特型McAb与各类免疫球蛋白及细胞反应性进行了检测。 作者以纯化的慢性B淋巴细胞性白血病(B-CLL)患者血清IgM免疫经耐受原刺激的BALB/c小鼠,通过两次细胞融合和克隆化,建立分泌抗独特型McAb的杂交瘤细胞株。该McAb属小鼠IgM和IgG亚类,经ELISA和间接混合ELISA夹心法证明,其特异性针对同源患者血清IgM,而对正常人血清及一系列骨髓瘤     

共刺激分子在混合性结缔组织病患者外周血淋巴细胞异常表达及意义

目的 探讨治疗前后混合性结缔组织病外周T细胞亚群改变及共刺激分子的表达.方法 流式细胞仪检测初诊混合结缔组织患者及治疗后患者外周血T细胞表面标志CD3/CD4/CD8及CD28/CD152在外周血T淋巴细胞上的表达水平.结果 与初治组相比,共刺激分子CD28在CD4+T和CD8+T淋巴细胞上的表达均有明显降低(P＜0.05),CD152在CD4+T淋巴细胞上的表达有明显降低(P＜0.05),而CD152在CD8+T淋巴细胞上的表达增加(P＜0.05).结论 混合性结缔组织病患者T淋巴细胞亚群及共刺激分子异常表达可能与免疫功能紊乱及疾病发生发展有关. Abstract： Objective To investigate the changes of expression of costimulatory molecule on peripheral blood lymphocyte subpopulations inpreliminary -diagnosis and post- treatment patients with mixed connetive tissue disease.Methods The expression of costimulators CD28 /CD152 and marks of lymphocyte cell CD3/CD4/CD8 on lymphocyte subsets in inpreliminary -diagnosis and post -treatment patients with mixed connetive tissue disease was deter mined by flow cytometry.Results The CD28 expressed on CD4 + T and CD8 + T cells were significantly decreased(P ＜ 0.05)in post - treatment patients.The CD152expressed on CD8 +T cell was significantly decreased(P ＜ 0.05)in post- treatment patients,while CD152 expressed on CD8 +T was signifantly increased(P ＜ 0.05).Conclusions The changes of expression of costimulatory molecule on peripheral blood lymphocytes may play an important role in immune dysfunction of MCTD patients.     

粒细胞集落刺激因子及其McAb的研究

利用B细胞杂交瘤技术,用rhG-CSF免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地建立了3株能持续分泌特异抗rhG-CSF McAb的杂交瘤细胞。取其中2D_4-B_4杂交瘤细胞进行染色体数目测定,并将2D_4-B_4瘤细胞注入小鼠腹腔,获得抗体阳性腹水,测定提纯抗体IgG亚型、特异性、稳定性和亲和力,证实该McAb可以和hG-CSF及小鼠G-CSF特异结合。为进一步研究hG-CSF和人工合成G-CSF打下良好的基础。     

共刺激因子在细胞免疫中的作用

共刺激因子是一类参与免疫反应的辅助性分子,存在于Ｔ／Ｂ细胞、抗原提呈细胞（ＡＰＣ）和靶细胞表面（表１）。在细胞对抗原的识别中通过细胞表面共刺激因子的特异结合,可有效增强Ｔ细胞与其它细胞的粘附,传导抗原刺激信息,参与细胞的免疫活化过程,在细胞抗原识别及...     

CD3McAb、CD28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究

目的　为肿瘤生物治疗寻找高效、安全的效应细胞。方法　采用CD3 单克隆抗体与CD2 8单克隆抗体及CpGODN共刺激外周血单核细胞活化增殖。对增殖细胞的增殖量、剂量依赖性与细胞表型进行测定。结果　单用CD3 单克隆抗体和小剂量的IL - 2就可以引起PBMC有效扩增 ,CD2 8单抗可提供协同刺激信号 ,使PBMC扩增达到最高。而CpGODN亦可提供第二信号 ,但较CD2 8单抗为弱。CD2 8协同扩增呈剂量非线性相关型 ,而CpGODN则为剂量正相关。表型测定表明共刺激细胞中NK细胞比率明显增高 ,分别达到 33.1 0 %± 1 3.82 % (CD3 CD2 8) ,2 9.5 0 %± 1 3.2 0 % (CD3 CPGODN) ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。同时 ,CD4 CD8 T细胞比值发生倒置。结论　CD2 8、CpGODN均能协同CD3 单抗诱导PBMC活化增殖 ,CD2 8单抗激活无剂量线性相关 ,而CpGODN激活有剂量正相关。激活的细胞是以NK细胞、CD4 CD8-、CD4- CD8 T细胞为主体的异质细胞群。     

共刺激分子在宫颈癌组织中的表达

目的 研究宫颈癌组织中癌细胞中的共刺激分子Ｂ７．１、Ｂ７．２、细胞间粘附因子－Ｉ（ＩＣＡＭ－１）及主要组织相容性抗原（ＭＨＣ）Ｉ、Ⅱ类分子表达,以揭示人体肿瘤的逃逸机制。方法 利用免疫组织化学技术,观察了４２例人宫颈癌组织中Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＡＭ－１的表达,观察了３６例ＭＨＣＩ、Ⅱ类抗原的表达;利用原位杂交技术观察了２０例人宫颈癌组织中Ｂ７．１、Ｂ７．２和ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ表达。结果 在     

共刺激人外周血淋巴细胞对大肠癌细胞的杀伤作用

目的：探讨CD28mAb与CD80共刺激活化的外周血淋巴细胞（PBLs）在体外对大肠癌细胞株HT-29杀伤强度及杀伤作用机制,为大肠癌的过继免疫治疗提供参考．方法：获得人PBLs;共刺激;检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用,并用电子显微镜观察效应细胞杀伤的大肠癌细胞超微结构,用流式细胞仪检测大肠癌细胞的凋亡指数．结果：共刺激PBLs对肿瘤细胞杀伤作用较强,达到（69．4±1．2）％．电镜结果显示,效应细胞作用12h肿瘤细胞出现坏死,部分可见凋亡．流式细胞仪检测效应细胞凋亡指数为12h19．6％,48h12．1％．结论：活化的淋巴细胞杀伤大肠癌细胞是通过坏死及凋亡两条途径来实现的．     

小柴胡汤对免疫抑制小鼠淋巴细胞共刺激分子的免疫调节作用

目的探讨小柴胡汤对免疫抑制小鼠外周血淋巴细胞共刺激分子的调节作用。方法每日给予正常小鼠及肌肉注射环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠小柴胡汤25g/kg体重,连续10d。并设免疫抑制模型及正常对照小鼠。于实验第11天,收集所有小鼠血样,分离淋巴细胞,采用流式细胞术检测实验小鼠外周血淋巴细胞CD28、CTLA-4、CD80和CD86的表达,并与对照组比较。结果与正常对照小鼠比较,免疫抑制小鼠淋巴细胞亚群发生明显变化、CD4/CD8比例明显倒置(P0.01),淋巴细胞CD28、CTLA-4、CD80和CD86的表达明显降低(P0.01)。与正常对照小鼠相比较,给予小柴胡汤的正常小鼠的淋巴细胞亚群及淋巴细胞共刺激分子的表达差异无统计学意义(P0.05)。与免疫抑制小鼠相比较,给予小柴胡汤的免疫抑制小鼠CD3+细胞增加(P0.01),CD3+CD4+细胞增加(P0.01),CD3+CD8+细胞降低(P0.01),CD4/CD8比例升高(P0.01),CD28、CD86和CD80表达增加(P0.01),而CTLA-4的表达无明显差异(P0.05)。结论小柴胡汤可能通过调节淋巴细胞表面协同刺激分子的表达进而调节免疫抑制小鼠的免疫功能。     

CD40培养体系的建立及B淋巴细胞的体外培养

采用自行研制成的功能性人ＣＤ４０单克隆抗体,转导ＣＤ３２的Ｌ细胞和细胞因子建立体外研究人Ｂ淋巴细胞增殖,生长和分化的ＣＤ４０系统。方法（１）流式细胞仪分析ＣＤ４０分子的表达;（２）在ＣＤ４０激发型单抗与ＬＣＤ３２共培养中,加入ＩＬ－４及其它细胞     

B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134—285AA)的cDNA片段，该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体。测序表明除(ATA^263→ATG^263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外，其余序列与Genbank报道的序列一致。蛋白表达用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，SDS—PAGE表明：在33ku处有明显的融合蛋白表达，其表达水平高达总茵体蛋白的50％。点印迹证实融合蛋白能与anti—His6Tag抗体反应。生物学活性研究表明BLys协同丝裂霉素能明显地抑制HeLa细胞的生长。     

CD40培养体系的建立及B淋巴细胞的体外培养

采用自行研制成的功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体、转导ＣＤ３２的Ｌ细胞（ＬＣＤ３２）和细胞因子建立体外研究人Ｂ淋巴细胞增殖、生长和分化的ＣＤ４０系统。方法：①流式细胞仪分析ＣＤ４０分子的表达;②在ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１）与ＬＣＤ３２共培养中,加入ＩＬ－４及其它细胞因子,组成ＣＤ４０培养系统,观察人扁桃体来源Ｂ细胞的体外生存和增殖等生物学效应。结果：①ＣＤ４０分子表达于人外周血、扁桃体来源的Ｂ细胞及人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ２和人Ｂ淋巴瘤细胞株Ｄａｕｄｉ;②用ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１和２Ｇ１１）与ＬＣＤ３２细胞联合ＩＬ－４能使静止期Ｂ细胞体外长期生存和增殖。表明用激发型ＣＤ４０单抗５Ｃ１１和２Ｇ１１建立的ＣＤ４０培养体系,能使Ｂ细胞长期生存和增殖,为体外研究Ｂ细胞提供了有效的手段。     

共刺激分子BT-H3在肿瘤中的研究进展

肿瘤是给人类生命健康带来威胁最大的疾病之一,临床中手术后多数病人预后较差,肿瘤免疫治疗因而也越来越受到人们的重视,寻找到一个合适的免疫靶点分子是众多学者研究的方向。BT-H3是共刺激分子B7超家族的最新成员,研究发现其在肿瘤的发病机制中起着重要作用,随着对其研究的不断深入,该分子有望成为肿瘤免疫治疗的新靶点。     

CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子 RANTES的影响

目的探讨CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子RANTES的影响与意义,以及免疫抑制剂环孢素(CsA)对RANTES产生的抑制作用.方法分离健康人外周静脉血中的淋巴细胞,实验分为4组①抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激组;②抗CD28mAb刺激组;③抗CD3mAb+抗CD28mAb共刺激组,即CD28共刺激组;④未加任何刺激作为对照组.吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)和CsA以不同终浓度干预CD28共刺激组.采用ELISA法测定培养上清中RANTES含量,流式细胞术检测淋巴细胞CD25和RANTES受体CCR5表达率.结果培养48 h后,CD28共刺激组RANTES产生显著增加(P＜0.05);不同剂量PDTC和CsA对CD28共刺激后淋巴细胞产生RANTES均具有抑制作用;CD28共刺激后淋巴细胞CD25表达率显著增高(P＜0.05),而CCR5表达率显著降低(P＜0.05).结论CD28通路共刺激后淋巴细胞产生RANTES显著增加.淋巴细胞产生RANTES及其对RANTES的反应均受到CD28共刺激信号调控.核因子(NF)-κB的特异性抑制剂PDTC和免疫抑制剂CsA均可抑制淋巴细胞产生RANTES.     

BTLA介导的负调共刺激信号对混合淋巴细胞反应抑制的研究

目的HVEM基因突变体腺病毒载体对大鼠混合淋巴细胞反应（MLR）的影响。方法RT—PCR获得人HVEM的cDNA，使其与uGHT分子结合的表位点突变，保留与BTLA结合的关健位点。构建经修饰的HVEM基因的复制缺陷型腺病毒载体Adv—mHVEM-IRES2-EGFP并对其进行鉴定和转染效率测定。将该载体用于混合淋巴细胞反应中，观察对淋巴细胞增殖的影响。结果成功构建HVEM突变体和EGFP复制缺陷型腺病毒载体，经过测序与预期一致，体外培养细胞转染效率达到95％以上。该载体能够对大鼠MLR有明细的抑制作用。结论构建的腺病毒载体能够共表达目的基因的产物HVEM突变体和EGFP蛋白，对体外细胞具有高效转染能力。该载体能够对大鼠混合淋巴细胞反应有明显的抑制作用。