眼针对眼周穴区皮下肥大细胞活化作用的实验研究

目的 采用自身配对设计与完全随机设计相结合的方法,借助肥大细胞甲苯胺蓝染色手段,观察眼周穴区、非穴区皮下肥大细胞分布规律;通过检测血清及眼周皮肤组织中IgE、组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量,探讨针刺对大鼠眼周穴区、非穴区皮下肥大细胞活化的调控作用。方法 SPF级SD大鼠30只,采用完全随机方法将大鼠随机分为3组：空白对照组,针刺穴区组,针刺非穴区组,每组10只。3组大鼠穴区与非穴区位置进行自身配对。空白对照组大鼠不做处理;针刺穴区组和针刺非穴区组大鼠每8 h进行1次眼针干预,共计干预3次。末次针刺后2 h,各组大鼠麻醉状态下,经腹主动脉采集全血,并采用过量麻醉法处死大鼠,以大鼠眼球为中心,环切眶内距离睑缘1～3 mm范围的皮肤组织,同时环切眶外区域距离睑缘4～6 mm范围的皮肤组织,两区域皮肤组织均等分两份,一份固定于4%多聚甲醛溶液中,另一份制备组织匀浆备用。采用甲苯胺蓝染色法,观察各组大鼠两区域皮肤组织中肥大细胞数量及形态;采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清和皮肤组织中的IgE、组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量。结果 各组大鼠皮...     

手针刺激“足三里”穴局部肥大细胞活动与外周神经放电的相关性研究

目的:探讨穴位处肥大细胞的激活及穴区胶原与支配该区域的神经束放电变化之间的关系。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为空白组、对照组、手针足三里组、手针+色甘酸钠组(穴区肥大细胞拮抗)、手针+胶原酶组(穴区胶原纤维溶解),每组6只。动物麻醉后,分离左侧"足三里"穴区坐骨神经干,手针提插刺激大鼠"足三里"穴20min,记录刺激前、刺激时和刺激后神经束诱发放电信号。对穴位组织进行组织学观察,统计肥大细胞脱颗粒率。结果:与对照组、手针+色甘酸钠组和手针+胶原酶组相比,手针足三里组诱发的坐骨神经放电活动明显增强(P<0.01);同时手针足三里组肥大细胞脱颗粒率显著升高(P<0.01),而手针+色甘酸钠组和手针+胶原酶组肥大细胞脱颗粒率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手针刺激大鼠"足三里"穴位可诱发支配该区域的外周神经束放电;穴位区注射色甘酸钠可抑制肥大细胞脱颗粒,针刺引起的外周神经放电减弱;穴位区注射胶原酶阻断针刺应力在穴位组织中传输,可以抑制肥大细胞脱颗粒,同样,针刺引起的外周神经放电也减弱。     

穴区结缔组织在针刺效应启动中的作用机制研究进展

穴区作为针刺的初始应答部位,是针效的源头。针刺引起穴区微环境的变化是其发挥效应的关键启动环节,阐明针刺的启动机制可进一步推动针刺临床应用。通过对针刺穴区相关基础研究文献进行梳理,发现针刺后穴区微环境结缔组织的变化与针刺效应密切相关,结缔组织中成纤维细胞、肥大细胞和巨噬细胞在针刺效应启动过程中发挥了重要作用,但有关针刺穴位启动机制的基础研究零散、不系统,针刺穴位启动机制的研究可为针刺临床应用提供依据,未来仍有很大深入研究的空间。     

不同配比甲苯胺蓝染液对小鼠“后三里”穴区肥大细胞的染色效果观察

目的:观察4种不同配比的甲苯胺蓝染液对穴区肥大细胞的染色效果。方法:选用昆明系健康雄性小鼠(SPF级)12只,随机分为4组,分别取各组小鼠"后三里"穴区皮肤肌肉组织,制作石蜡切片,各组切片分别用50%酒精、高锰酸钾、蒸馏水、柠檬酸钠-盐酸溶液配制成的甲苯胺蓝染液进行染色,观察肥大细胞染色效果。结果:柠檬酸钠-盐酸组、高锰酸钾组、50%酒精组的甲苯胺蓝染液染色效果优于蒸馏水组。其中柠檬酸钠-盐酸组的背景颜色对比效果最好;高锰酸钾组的染色时间最短,但着色较深,不易分色;酒精组的染液配制简便,但胞质内颗粒不甚清晰。结论:不同配比的甲苯胺蓝染液对穴区皮肤组织肥大细胞的染色效果优劣不一。     

穴位处胶原纤维在针刺大鼠"足三里"镇痛过程中的作用

目的：探讨针刺镇痛作用机制。方法：采用穴位注射Ⅰ型胶原酶法破坏穴区胶原组织结构。在急性佐剂关节炎大鼠模型上,以大鼠缩爪反射的潜伏期及肥大细胞脱颗粒率为观察指标,比较破坏与不破坏穴位区胶原组织结构2种情况下,针刺“足三里”捻转或提插手法对针刺镇痛效应及肥大细胞的影响。结果：破坏胶原结构后2种手法的镇痛效果明显削弱,且穴位肥大细胞脱颗粒也受到明显抑制。结论：穴区胶原纤维与肥大细胞在针刺镇痛效应的产生过程中起到了重要的作用,胶原纤维参与了针刺信号由穴位向靶器官传输与转换过程,而肥大细胞脱颗粒则始终与针刺镇痛效应呈正相关。     

循经针刺对大鼠足阳明胃经穴区皮下筋膜内肥大细胞的影响

为探讨肥大细胞在经络活动中的作用,本文对比观察了针刺大鼠一侧“足三里”及“髀关”穴后,两侧足阳明胃经上五对不同穴区皮下筋膜肥大细胞数目的变化,发现各穴区皮下肥大细胞均显著高于经穴旁,针刺后各穴区肥大细胞数目皆明显增加,而经穴旁肥大细胞数目无明显差异。提示肥大细胞可能是经络活动及循经感传过程中的一个重要环节。     

集腋成裘,聚沙成塔——关于美国针灸医学发展的对话(一)

记录李永明在美国中医学院博士班讲课期间与巩昌镇就李永明的针灸理论展开的一系列关于美国针灸医学发展的对话。该部分讨论了"气球理论"、"硬针灸"与"软针灸"、泛穴现象、宋氏肥大细胞理论等。"气球理论"将针灸治疗产生的效果分为5个层次:自愈效果、安慰剂效应、心身疗法、针刺非特异穴效果、针刺特异穴效果。依据"气球理论",有利于设计合理的临床试验,解答针刺的特异性和非特异性疗效问题,有利于提高针灸临床疗效。区别"硬针灸"和"软针灸",有利于对临床试验结果做出正确的解读,有利于选择最佳的针灸疗法。根据临床现象和随机对照试验提出泛穴现象,其指针刺人体非特异穴位会产生一定的针刺生物学效应或起到一定治疗作用。泛穴现象不否认传统穴位的特异性,与以痛为腧不矛盾。宋氏肥大细胞理论可能是针灸穴位的细胞生物学基础,肥大细胞分布与经典穴位分布、微针系统穴位分布有高度相关性。     

肥大细胞和P物质参与急性胃黏膜损伤大鼠体表穴位的敏化过程

目的:观察急性胃黏膜损伤后伊文思蓝(EB)渗出穴区肥大细胞聚集数量和脱颗粒变化及其局部P物质(SP)的表达,以揭示病理状态下穴位的组织细胞特征,确定肥大细胞和SP参与穴位敏化的过程。方法:大鼠随机分为模型组和正常对照组,每组15只。采用空腹稀盐酸灌胃造成急性胃黏膜损伤模型。5 h后尾静脉注射EB,模型组取EB渗出点"脾俞""胃俞"和旁开2 mm处的皮肤和皮下组织,正常对照组取对应点皮肤和皮下组织。采用甲苯胺蓝染色法标记这些部位肥大细胞的聚集分布数量及脱颗粒特征。采用免疫组织化学方法显示局部SP的分布并进行Western blot相对定量测定。结果:急性胃黏膜损伤后EB体表穴区渗出点的皮肤和皮下组织中肥大细胞呈现聚集,其数量和脱颗粒数明显多于正常对照组和"脾俞""胃俞"旁开对照组(P0.05,P0.001),脱颗粒率也显著高于旁开点和正常对照组(P0.01)。在EB渗出点和旁开部位均可见SP蛋白的表达水平显著高于正常组(P0.01),其阳性纤维多分布于皮下。结论:在急性胃黏膜损伤时,体表出现的敏化穴位中肥大细胞参与了与疾病相关的体表穴位敏化过程,且其局部的SP表达水平增高。     

针刺穴位信息启动传导机制与肥大细胞的相关性研究进展

综述近年针刺信息启动传导机制中与肥大细胞相关性的研究进展。针刺作用于腧穴后,穴区的物质基础、机械作用力、炎症反应、神经兴奋、P 物质、组织液、钙离子、组胺等均参与了针刺信息传导,并激活肥大细胞促使其脱颗粒,肥大细胞脱颗粒可能是针刺信号启动转导过程中的关键点。     

穴区肥大细胞功能与针刺缓解急性佐剂性关节炎大鼠疼痛效应的关系

目的:通过观察针刺镇痛效应与穴位区肥大细胞脱颗粒率的变化,研究针刺效应与穴位局部的肥大细胞功能之间的关系。方法:58只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、留针组(仅留置针体在穴位处)、电针(EA,2/100Hz,0.5/1.0/1.5mA,“足三里”)组和手针(MA)组,在急性佐剂性关节炎(AA,完全弗氏佐剂0.05mL注射于动物踝关节)大鼠模型上,采用辐射热缩爪反射的方法,以大鼠缩爪反射的潜伏期为观察指标,比较电针、手针和留针组的镇痛效果。将穴位区的组织块制成石蜡切片,用甲苯胺蓝特殊染色法染色,观察其中肥大细胞变化的情况。结果:电针和手针对AA大鼠都有很明显的镇痛效应(与留针组比较P<0.01),而留针组无效(与模型组比较P>0.05),其中手针穴位处的效果更明显于电针。同时,电针和手针组的组织切片中肥大细胞脱颗粒率明显高于留针组(P<0.01)。结论:穴位组织中的肥大细胞在针刺镇痛效应的产生过程中起着重要作用,肥大细胞脱颗粒参与了针刺镇痛效应中针刺信号从穴位向靶器官传输与转换的过程。     

Skin Slice as a Model for the Investigation of the Role of Mast Cells in Acupuncture Effects

Objective： To establish a new and better model to investigate the properties of mast cells that could be involved in acupuncture process mechanisms. Methods： Connective tissue under the corium at the area of acupuncture point Zusanli （ST 36） from rat was acutely bluntly separated with forceps and scissors, and incubated in bath solution up to several hours. Mast cells in slices of that tissue were irradiated with laser light of 650 nm, and changes in the appearance were observed under microscope. In addition, patch-clamp technique in whole-cell configuration was employed to induce mechanosensitive currents by pressure applied through the patch pipette. Results： 1） A high density of mast cells embedded in the extracellular matrix was detected in the tissue slices using toluidine blue staining. The mast cells survived for up to several hours;     

Investigation of the Role of Mast Cells in Acupuncture Effects and Their Sensitivity to Physical Stimuli During TCM Treatment

Objective： To better understand the function of mast cells in acupuncture points （acupoints） in acupuncture-induced analgesia. The author tested their sensitivity to mechanical, thermo and light stimulation. Methods： The tail flick model was applied to measure analgesia in rats, and the author determined the density of mast cells in tissue slices and their degranulation ratio before/after acupuncture. The author also applied the patch-clamp technique to investigate activation of human mast cells （HMC1 cell line） by mechanical stress or noxious heat, and the author optically observed degranulation phenomena of mast cell in response to red laser light. Results： Manual stimulation by acupuncture at Zusanli （ST 36） of the rat resulted in analgesia and the effect was more pronounced than after stimulation of a sham point nearby the acupuncture point. A higher density of mast cells was found at Zusanli （ST 36） than at the sham point,     

Relationship Between and Laser Acupuncture Analgesia and the Function of Mast Cells in Adjuvant Arthritis Rats

Objective： To observe the analgesia effect and of low-level combined- and single-laser irradiation on Zusanli （ST 36） in rats and the relationship between mast cell degranulation and laser acupuncture analgesia. Methods： A total of 66 Sprague Dawley （SD） rats were randomly assigned into normal control, model control, sham irradiation, 10.6 μm laser （220 mW, 40 Hz） 650nm laser（36mW, continuous）, combined laser （10.6 μ m＋ 650 nm） groups. Arthritis mode 1 was established by injection of Complete Freund＇s Adjuvant （0.05 mL） into the left ankle joint. The paw withdrawal latency （PWL） was detected with a radiant heat algesimeter. Zusanli （ST 36） was irradiated with sham, single or combined laser for 30 min. After sacrifice under anesthesia （1% embutal）, tissues of Zusanli （ST 36） area were sampled, sliced （5 μ m） and stained with Toluidine Blue for skin for observing the mast cell degranulation. Results： Compared with model control and sham group, the pain threshold increased significantly in 650nm and combined laser groups （P〈0.01）, while remained no significant difference in 10.6/a m group. Compared with model and sham group, the degranulation ratios of mast cells in 650nm and combined laser group were significantly higher （P〈0.001）, while remained no significant difference in 10.6 ~ m group. The linear correlation coefficient between degranulation ratios of mast cells and PWL after laser acupuncture is 0.737 （P〈0.001）.Conclusion： Both 650 nm and combined laser stimulation of Zusanli （ST 36） can effectively raise pain threshold, and enhance degranulation ratio of mast cells at the stimulated acupoint. The result also suggested a linear correlation between degranulation ratio of mast cell and analgesia effect.     

电针对大鼠穴区血管内皮细胞间黏附因子1表达及肥大细胞分布的影响

目的:观察电针后大鼠皮下组织血管内皮细胞间黏附因子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达及肥大细胞(mast cell,MC)分布,探讨电针刺激后穴区血管ICAM-1mRNA表达的变化,及其与MC活性的关系。方法:将20只大鼠随机均分为正常组和电针组,电针组给予双侧"足三里"穴电针刺激25min。用原位杂交技术观察两组大鼠"足三里"穴区皮下组织ICAM-1mRNA的表达;同时用乙酰胆碱酯酶组化染色并甲苯胺蓝复染法观察"足三里"穴区皮下组织MC的分布。结果:电针组"足三里"穴区组织ICAM-1mRNA阳性表达明显高于正常组(P0.01);电针组穴区组织MC数和MC脱颗粒率均升高,与正常组比较均具有统计学意义(P0.01)。结论:电针可增强正常大鼠穴区组织血管内皮ICAM-1mRNA的表达,ICAM-1对电针促进肥大细胞向穴区迁移、聚集具有一定趋化作用。     

Study of Neuropathways of Acupuncture Effect on Functional Regulation and Disease Treatment

目的：探讨针刺信息调整自主神经功能和治疗疾病的神经通路机制，揭示针刺穴位和靶组织、器官效应的相互关系。方法：以大鼠和小鼠为对象，对躯体性针刺或电刺激下的传入神经反应特征、自主神经功能调控的重要机制之一的躯体-交感反射（一种躯体-自主神经反射）、谷氨酸神经递质的中枢性调控作用以及相应靶组织和靶器官反应的研究进行了回顾和分析。结果与结论：手针或电针刺激动物后三里穴位可以诱发支配后三里穴区的传入神经放电，而直接电刺激传入神经可模拟此过程。在外周躯体传入神经如胫神经直接给予电刺激，可在支配内脏的自主神经传出神经如交感神经上反射性诱发一个电位，该过程定义为躯体-交感反射。研究显示中枢神经系统的兴奋性谷氨酸类神经递质参与了该反射的调控。另一方面，研究显示动物后三里等穴位的躯体刺激如电针刺激可抑制小鼠后肢炎症痛的躯体感觉传入和肠易激综合症大鼠的结直肠痛的内脏感觉传入，其中脊髓GABA和NMDA受体被证明分别参与了前后过程。     

穴位注射组胺在急性佐剂性关节炎大鼠上引起的镇痛效应

目的:观察组胺对穴位处肥大细胞的激活作用,以及其引起的类似针刺的镇痛效应,讨论穴位注射疗法可能存在的机制。方法:SD大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、生理盐水对照组、手针组和组胺注射组。大鼠左踝关节腔注射完全弗氏佐剂0.05 mL制作佐剂性关节炎模型。测量各组痛阈变化,并对穴位组织进行组织学观察,统计肥大细胞脱颗粒率。比较在"足三里"穴位注射100μg/mL的组胺溶液50μL和手针刺激20 min下的镇痛效应的差异性。结果:组胺注射和手针针刺,都能提高大鼠的痛阈达到镇痛效果,与模型组相比治疗后痛阈都有显著提高(P0.01)。组胺引起的肥大细胞脱颗粒率与生理盐水相比明显增高(P0.01),与针刺相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:在佐剂性关节炎大鼠模型中,组胺可以引起穴位处肥大细胞脱颗粒,产生与针刺类似的镇痛效应。以刺激肥大细胞为目的的新型穴位注射疗法存在可行性。     

肥大细胞功能对针刺大鼠"足三里"镇痛效应的影响

目的:观察穴位肥大细胞与针刺效应之间的关系。方法:SD大鼠48只,随机分为正常对照组、穴位针刺组、旁开针刺组、色甘酸钠组、生理盐水组、色甘酸钠 针刺组、生理盐水 针刺组和色甘酸钠 对侧针刺组。采用大鼠尾部痛阈作为效应指标,在体观察针刺“足三里”提插捻转30 min过程中大鼠的甩尾潜伏期;并通过穴位组织切片染色,离体对照针刺前后穴位处局部肥大细胞脱颗粒率的变化,以及色甘酸钠注射对其的影响。结果:手针大鼠“足三里”穴具有显著镇痛作用,效果明显优于针刺旁开对照点;而在色甘酸钠屏蔽穴位肥大细胞的脱颗粒功能后,这种镇痛作用被明显地削弱。针刺后穴位处局部肥大细胞脱颗粒率显著提高;而注射色甘酸钠可以明显减少该脱颗粒现象。结论:穴位组织中的肥大细胞在针刺镇痛效应的产生过程中起着重要作用,肥大细胞脱颗粒参与了针刺镇痛效应的产生过程。