SLE血小板减少与巨核系祖细胞内在缺陷关系的探讨

本文应用改良的血浆凝块培养技术和ABC染色法研究SLE病人血小板减少的发病机理。实验结果表明,正常人外周血所形成的CFU—MK为21.2±4.7;血小板正常的SLE病人的CFU—MK为19.8±3.2;而血小板减少的SLE病人CFU—MK为8.5±3.1,明显低于正常对照(P<0.05)。我们的实验结果提示了SLE病人血小板减少是由于巨核系祖细胞(progenitor)或在CFU—MK水平上存在内在缺陷(intrinsic defect)。     

趋化性细胞因子与巨核系造血调控的研究进展

趋化性细胞因子是近年研究的一个热点 ,其对巨核系造血起着正向和负向调控作用 ,具有很好的临床应用前景。本文就趋化性细胞因子及其受体与巨核系造血调控的作用进行了综述。     

047 趋化性细胞因子与巨核系造血调控的研究进展

趋化性细胞因子是近年研究的一个热点，其对巨核系造血起着正向和负向调控作用，具有很好的临床应用前景。本文就趋化性细胞因子及其受体与巨核系造血调控的作用进行了综述。     

趋化性细胞因子与巨核系造血调控的研究进展

趋化性细胞因子是近年研究的一个热点，其对巨核系造血起着正向和负向调控作用。具有很好的临床应用前景，本文就趋化性细胞因子及其受体与巨核系造血调控的作用进行了综述。     

巨核系造血发育和调控

血小板是血液系统重要的组成部分,机体通过巨核系造血维持血小板数量。血小板在止血、血栓形成、创伤修复、固有免疫应答以及肿瘤转移等过程中发挥重要作用。巨核系造血受造血微环境中的细胞因子、黏附分子和细胞外基质(ECM)等多种因素的复杂调控,这些调控机制的异常可导致多种巨核/血小板谱系相关疾病的发生。近年来巨核系造血研究进展迅速,对血小板发育成熟过程及其调控机制的深入研究具有重要的理论意义和临床价值。现就近年来巨核系造血调控机制研究的进展作一综述。     

人促血小板生成素对造血干的增殖及定位分化效应

造血干 /祖细胞体外扩增是近年研究热点之一。利用造血干细胞具有多向分化的性能 ,扩增干细胞的同时 ,通过不同细胞因子的组合 ,定向诱导其分化 ,可以产生所需的功能细胞。利用血小板生成素 (ＴＰＯ )与ＩＬ 3、ＩＬ 6、可溶性补体结合 (ＳＣＦ)进行组合 ,研究ＴＰＯ对巨核系细胞的增殖及定向分化效应。1　材料和方法1 1　细胞分离纯化　ＣＳ 30 0 0分离的外周造血干细胞悬液进行单个核细胞分离 ,分离后的细胞进行培养及ＣＤ41ａ 细胞检测 ,同时进行ＣＤ34 细胞的分离纯化。流式细胞仪测定ＣＤ34 纯度及ＣＤ41ａ 细胞表达 ,并进行液体培养…     

诱导多能干细胞建系及体外造血祖细胞定向分化体系的建立

背景：目前,大量文献报道了诱导多能性干细胞系的建立,但大规模体外诱导分化造血祖细胞的研究还缺乏深入的探讨。 目的：建立诱导多能性干细胞体外定向诱导形成造血祖细胞的方法。 方法：采用慢病毒感染的方法将含有Oct4、Sox2、Nanog和Lin28全能性基因的慢病毒颗粒转导人皮肤成纤维细胞,获得了诱导多能性干细胞;在诱导分化体系中添加了Y-27632,克服干细胞扩增中的凋亡现象;运用OP9细胞产生的条件培养液建立诱导多能性干细胞体外定向分化形成造血祖细胞的分化体系。 结果与结论：①前3代细胞克隆传代时,诱导多能性干细胞发生凋亡的现象很多,很难大规模扩增培养。培养基中添加阻断ROCK活化的抑制剂,能够明显抑制胚胎干细胞的凋亡。②诱导多能性干细胞在OP9细胞条件培养液作用下,经过体外诱导分化,形成CD34+造血祖细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

MACS系统对小鼠造血干细胞定向分化为未成熟树突状细胞的实验研究

目的:探讨经MACS系统在体外获得大量高纯度未成熟树突状细胞(imDC)的方法,并对其细胞表面标志、形态和功能进行鉴定。方法:对健康C57小鼠的骨髓通过MACS系统分离、纯化CD117 造血干细胞(HSC);使用SCF IL-3行体外扩增,并采用GM-CSF IL-4 IL-10诱导其定向分化为imDC;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,采用流式细胞计数法检测、鉴定其表面标志物的表达。结果:SCF IL-3可以分别在3、5、7d时体外扩增HSC达10.34±1.43倍、22.65±2.71倍、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为imDC,且具有吞噬功能,表面树突呈毛刺状、较为短小,imDC并表达CD11c 、I-A/I-Elow、CD40-、CD80-、CD86-。结论:本方法可稳定、有效地获得大量高纯度的imDC。     

神经干细胞的分化与定向诱导分化

传统观点认为成体哺乳运动中枢神经系统的神经元损伤后不能再生，但从1992年Reynoldsu和Richards从成鼠纹状体和海马中分离出神经干细胞(neural stem cell，NSC)之后，人们又从其他成体哺乳动物神经系统中又发现了神经干细胞，神经干细胞的研究已成为当今生命科学的热点之一。神经干细胞的分离、体外培养，到移植治疗神经系统疾病都     

Isolation of endothelial progenitor cells from cord blood and induction of differentiation by ex vivo expansion

Endothelial progenitor cells (EPCs) have been reported to possess the capacity to colonize vascular grafts and hold promise for therapeutic neovascularization. However, limited quantities of EPCs have been the major factor impeding effective research on vasculoangiogenesis. In this study, cytokine and culture conditions necessary for the provision of large quantities of endothelial cells (ECs) were investigated. Cord blood was collected from 18 normal full-term deliveries and CD34+ cells were isolated by MACS system (Miltenyi Biotech, Bergish-Gladbach, Germany). To evaluate the effect of cytokines, CD34+ cells were cultured with various cytokine combinations, such as stem cell factor (SCF), flt3-ligand (FL), and thrombopoietin (TPO) with vascular endothelial growth factor (VEGF), interleukin-1 beta , fibroblast growth factor-basic (FGF-b) as basic cytokines. The quantities of non-adherent and adherent cells were the greatest with SCF, FL and TPO. The addition of TPO to all other cytokines significantly increased the number of non-adherent and adherent cells (p< 0.05, Wilcoxon rank sum test). After four weeks of culture, adherent cells expressed endothelial specific markers such as KDR, CD31 and CD62E. Typical morphology of ECs was observed during culture, such as cord-like structure and cobblestone appearance, suggesting that the adherent cells were consistent with ECs. In this study, the experimental conditions that optimize the production of ECs for therapeutic neovascularization were described. And it was possibly suggested that TPO plays a major role in differentiation from EPCs to ECs.     

Effect of human recombinant erythropoietin on human hemopoietic progenitor cells in vitro

Summary Recombinant human erythropoietin (rhEpo), now available, might become increasingly more important for clinical use, e.g., in the treatment of anemia of chronic renal failure. As a prerequisite of clinical trials, we analyzed the stimulatory and suppressive effects of rhEpo on human hemopoiesis by adding rhEpo to in vitro cultures of nonadherent low-density bone marrow cells obtained from normal persons and from patients undergoing hemodialysis for chronic renal failure. rhEpo was shown to be an effective stimulus for erythroid and multilineage colony formation. The dose-response curve was similar for erythroid progenitors BFU-E from normal controls and patients with chronic renal failure. rhEpo had no effect on megakaryocytic colony formation nor on the megakaryocytic differentiation of multilineage stem cells. Because of a good stimulatory activity on erythroid and multilineage stem cells and lack of toxic effects, rhEpo might be useful in the treatment of certain kinds of anemia.Abbreviations BFU-E burst-forming unit-erythroid - CFU-E colony forming unit-erythroid - CFU-GEMM CFU-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocyte - CFU-GM CFU-granulocyte, macrophage - CFU-Mk CFU-megakaryocyte - IMDM Iscove's modified Dulbecco's medium - Mo-CM Mo-cell line conditioned medium - rhEpo recombinant human erythropoietin     

含人AGM区基质细胞培养体系定向诱导胚胎干细胞为造血干细胞的实验研究

目的： 体外模拟胚胎早期AGM区造血微环境，诱导胚胎干细胞（ESCs）分化为造血干细胞（HSCs）。方法：将小鼠E14 ESCs在含BMP-4及VEGF的半固体培养基中诱导为拟胚体（EB），分别于3、6、9、12、15 d时收获EB，流式细胞术检测Flk-1+细胞含量。取Flk-1+ 细胞处于高峰期的EB细胞，在人AGM区基质细胞饲养层上进一步诱导分化，并设无饲养层对照，分别于3、6、9、12 d时收获细胞计数、流式细胞术检测Sca-1+c-kit+ 细胞含量，并分析造血细胞集落形成能力。结果：诱导E14细胞形成EB过程中添加BMP4+VEGF的因子组Flk-1+细胞在第9 d达峰值（27.53%± 2.84％），与未添加因子组（8.77%± 1.12％）比较差异显著(P<0.05)。将培养9 d的EB细胞在hAGMS3、hAGMS4饲养层上进一步诱导分化，第6 d时Sca-1+c-kit+细胞达峰值，分别为7.31%±1.21％、7.62%±1.52％，其绝对数分别扩增(2.57±0.48)倍、(2.35±0.36)倍，与无饲养层组比较显著差异（P<0.05）。该分化阶段的Sca-1+c-kit+细胞具有形成各系造血细胞集落的能力。结论：人胚早期AGM区基质细胞能促进小鼠ESCs定向分化为HSCs，为研究ESCs分化为HSCs的分子机制提供了实验模型。     

体外PLGA三维支架上诱导小鼠骨髓干细胞向胰岛样细胞分化

目的 研究聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）三维支架在骨髓干细胞向胰岛样细胞诱导分化中的作用.方法 分别在平面和PLGA三维支架上对小鼠骨髓干细胞向胰岛样细胞进行诱导分化,对2组诱导分化的胰岛样细胞进行形态学观察和功能检测,对照组为小鼠胰岛细胞.结果 2组诱导分化的胰岛样细胞均呈双硫腙（DTZ）染色阳性,胰岛素、C肽双染阳性,胰高血糖素阳性和生长抑素阳性;在高糖刺激下,PLGA三维支架组的胰岛素分泌量较平面组显著提高（P＜0.01）.电镜提示诱导分化的胰岛样细胞具有类似β细胞的超微结构且与支架有良好的相容性.结论 PLGA三维支架有益于提高骨髓干细胞诱导分化的胰岛样细胞功能,且与胰岛样细胞具有良好的相容性.     

体外直接诱导人胚胎干细胞向神经细胞分化的研究

目的探讨体外直接诱导HSF6人胚胎干细胞（humanem bryonic stem cells,hESCs）分化为神经细胞的方法。方法采用直接的方法,在1%血清培养条件下,顺序添加bFGF、RA和Forskolin,诱导HSF6人ESCs分化为神经细胞。结果细胞发生神经样形态学改变,免疫荧光细胞化学分析结果显示,分化细胞表达神经干细胞特异性标志分子——巢蛋白（nestin）,以及神经元标志分子——β微管蛋白Ⅲ（neuron-specific class Ⅲ beta-tubulin,TuJ1）。实验组nestin阳性细胞数占（95.2±3.03）%,明显高于未添加诱导因子组的（31.6±4.93）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论本研究直接诱导hESCs分化为神经细胞,减少了常规经胚胎体（embryoid body,EB）的诱导方法而产生其它胚层细胞的机会,为进一步探索hESCs源性神经细胞的功能,以及为细胞替代治疗提供高纯度的hESCs源性神经细胞奠定了基础。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80%新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0.2%的细胞继续增殖、分化,参与修复。 目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。 方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。 结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5 d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元﹑少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Regeneration of dental pulp following pulpectomy by fractionated stem/progenitor cells from bone marrow and adipose tissue

Pulp stem/progenitor cells can induce complete pulp regeneration. However, due to the limited availability of pulp tissue with age, there is a need to examine other sources for fractions of side population (SP) cells. In the present investigation bone marrow and adipose tissues of the same individual were evaluated as alternate sources. Pulp CD31⁻ SP cells have higher migration activity and higher expression of angiogenic/neurotrophic factors than bone marrow and adipose CD31⁻ SP cells. Adipose tissue CD31⁻ SP cell transplantation yielded the same amount of regenerated tissue as pulp derived cells. However, bone marrow CD31⁻ SP cell transplantation yielded significantly less regenerated tissue in pulpectomized root canals in dogs. The rate of matrix formation was much higher in adipose CD31⁻ SP cell transplantation compared to pulp CD31⁻ SP cell transplantation on day 28. Microarray analysis demonstrated similar qualitative and quantitative patterns of mRNA expression characteristic of pulp in the regenerated tissues from all three cell sources. Expression of many angiogenic/neurotrophic factors in the transplanted cells demonstrated trophic effects. Our results demonstrate that bone marrow and adipose CD31⁻ SP cells might be suitable alternative cell sources for pulp regeneration.     

糖皮质激素对成体海马神经祖细胞的影响

背景：体内研究显示,高浓度糖皮质激素可抑制大鼠内源性神经前体细胞增殖。而神经胶质抗原2蛋白聚糖阳性神经祖细胞(NG2细胞)是成熟中枢神经系统中最大的增殖细胞群体,具有多分化潜能。 目的：观察糖皮质激素对体外培养的成熟大鼠海马由来的NG2细胞生存和增殖的影响。 方法：原代及传代培养成年大鼠海马NG2细胞,以0,0.1,1,10,100 μmol浓度糖皮质激素类药物地塞米松干预48 h后,采用乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,原位缺口末端标记技术(即TUNEL法)观察细胞凋亡情况,5’-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法鉴定细胞增殖状况。 结果与结论：1,10,100 μmol浓度地塞米松干预明显减少NG2细胞数,并显著增加TUNEL阳性细胞率,明显减少BrdU阳性细胞率。结果可见高浓度糖皮质激素能抑制NG2细胞分裂增殖,并诱导细胞凋亡,从而明显减少NG2细胞数。     

自身免疫调节因子在小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化中的表达

文题释义：自身免疫调节因子：基因分析显示由于单基因突变引起一种自身免疫病,此基因则被命名为自身免疫调节因子即AIRE基因。AIRE基因的突变或者缺失会造成胸腺内自身组织特异性抗原转录缺失,影响阴性选择,从而致使自身反应性T细胞逃逸外周,引起自身免疫反应。AIRE基因一直是免疫学相关研究中的热点。胸腺上皮细胞：胸腺上皮细胞分为髓质胸腺上皮细胞和皮质胸腺上皮细胞,二者均来源于胸腺上皮祖细胞,据研究报道髓质胸腺上皮细胞表达的AIRE基因调控着胸腺内的阴性选择,但是由于胸腺上皮祖细胞和胸腺上皮细胞不易分离且数量少,其应用和研究一直受限。该实验在体外将胚胎干细胞分化为胸腺上皮祖细胞,可以为相关研究提供细胞来源。  摘要背景：自身免疫性疾病主要是由于胸腺内自身组织特异性抗原持续表达缺失而引起强烈免疫应答的一类疾病,而胸腺功能减退和胸腺内组织特异性抗原的不稳定表达会限制治疗效果。胸腺组织主要由胸腺上皮细胞组成,但胸腺内成熟胸腺上皮细胞和胸腺上皮祖细胞有限的数量来源极大限制了相关研究。目的：研究小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化过程中自身免疫调节因子的表达变化。方法：采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,分别收集定向诱导分化第0,3,13天细胞,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time PCR 检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论：①诱导分化第0天,免疫荧光检测OCT4、SSEA1表达阳性;诱导分化第3天,免疫荧光检测SOX17、FoxA2呈双阳性表达;诱导分化第13天,流式细胞术检测EpCAM1、K5、K8表达阳性;②Real-time PCR检测小鼠胚胎干细胞定向分化过程中PAX1、PAX9、FOXN1、PLET1基因表达逐渐增高;③Real-time PCR检测分化第0,3,13天AIRE基因表达升高,INS2、GAD67基因表达也升高;④Western blot检测分化第0,3,13天AIRE蛋白表达降低,胰岛素蛋白、GAD67蛋白均无表达;⑤结果表明,小鼠胚胎干细胞成功分化为胸腺上皮祖细胞,且分化而来的胸腺上皮祖细胞中AIRE基因表达很高,促进了INS2、GAD67基因的表达,为细胞移植治疗自身免疫性疾病提供评价依据。ORCID: 0000-0001-5253-3085(胡蓉) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程