三氧化二砷诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人移行细胞膀胱癌细胞株T24细胞凋亡的作用。方法用MTT法、TUNEL法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导T24细胞凋亡的作用。结果As2O3可有效地抑制T24细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条带。TUNEL法呈阳性结果。透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。对照组均未见上述变化。对凋亡相关基因Bcl-2免疫组化染色发现其表达下调,同时凋亡主要效应分子Caspase 3被激活。结论As2O3可有效诱导膀胱癌细胞凋亡,通过下调Bcl-2基因表达是其作用机制之一。     

三氧化二砷对白血病HL-60细胞株分化影响的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)治疗白血病的作用机制.方法:1)用流式细胞仅检测细胞膜上的CD11b的表达和细胞凋亡率.2)用RT-PCR方法检测c-myc基因在mRNA水平上的表达.结果:2.5 μmol/LAs2O3处理HL-60细胞90 h后,细胞分化的标志性细胞膜抗原CD11b表达明显升高,由(14.5±2.1)%升高到(35.4±5.7)%,P<0.05;NBT阳性细胞由(10.0±2.1)%升高到(31.25±3.4)%(P<0.05),同时c-myc基因在mRNA水平也明显降低.结论:As2O3通过降低c-myc基因表达及上调细胞分化抗原CD11b表达,从而促进HL-60细胞分化.     

三氧化二砷对前列腺癌PC-3细胞生长及survivin基因表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对PC-3细胞生长及survivin基因表达的影响。方法不同浓度的三氧化二砷作用于PC-3细胞，以MTT法检测细胞增殖活性；流式细胞仪进行细胞周期分析及细胞凋亡检测；半定量RT-PCR检测survivin基因表达的变化。结果三氧化二砷抑制PC-3细胞的增殖活性具有时间及剂量依赖性。不同浓度三氧化二砷作用48小时后，PC-3细胞中G1期细胞数量增多，而高浓度的三氧化二砷则可诱导细胞凋亡，同正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01）。survivin基因的表达随三氧化二砷作用浓度的增加而降低（P〈0．01）。结论三氧化二砷在体外可有效抑制PC-3的生长。可能通过抑制PC-3细胞中survivin基因表达而诱导凋亡。     

三氧化二砷抗肿瘤研究

用三氧化二砷（As2O3）治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）疗效显著。研究表明As2O3还可以诱导多种实体瘤细胞生长阻滞和凋亡,但As2O3对实体瘤的治疗作用及抗肿瘤作用机制仍未明确。     

三氧化二砷抗肿瘤研究

用三氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)疗效显著。研究表明As2O3还可以诱导多种实体瘤细胞生长阻滞和凋亡,但As2O3对实体瘤的治疗作用及抗肿瘤作用机制仍未明确。     

野生型p53基因的导入对膀胱癌细胞抑制作用的观察

转染外源野生型ｐ５３基因对膀胱癌ＥＪ细胞的抑制作用。方法将含外源野生型ｐ５３基因的（ａｄ┐Ｗｔｐ５３）转染膀胱癌ＥＪ细胞,观察生长曲线,细胞周期变化及裸鼠体内抑瘤试验。结果转染了ａｄ┐Ｗｔｐ５３的ＥＪ细胞在体外生长速率下降,在裸鼠体内致瘤性丧失,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止期的细胞比例增高。另外,ａｄ┐Ｗｔｐ５３直接注射到肿瘤组织内,可使外源野生型ｐ５３基因在肿瘤细胞内有效、稳定的表达,肿瘤表现为生长减缓,最后停止生长并有缩小。结论腺病毒载体介导基因转染效率高,速度快,安全,是很有前途的体内基因治疗载体。     

三氧化二砷逆转人胃癌细胞SGC7901/ADR耐药性的作用机制

目的：探讨三氧化二砷(As_2O_3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用及其逆转机制。方法：采用MTT法检测As_2O_3的非细胞毒性浓度和SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流武细胞仪检测细胞内药物浓度和P-gp功能,免疫组织化学法检测细胞GST-π和TPPOⅡ的表达。结果：0．4～0．8μmol/L As_2O_3对耐药细胞SGC7901/ ADR无明显毒性,0．8μmol/L的As_2O_3可抑制P-gp功能,下调GST-π表达,显著提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论：As_2O_3可部分逆转SGC7901/ADR细胞对ADM耐药性,其机制可能与抑制P-gp功能及下调GST-π表达有关。     

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶抗裸鼠人结肠癌移植瘤的作用及其机制的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）对裸鼠人结肠癌移植瘤的抗肿瘤作用、作用机制以及药物毒性.方法建立裸鼠人结肠癌模型,随机分为生理盐水组、As2O3组、5-FU组和As2O3联合5-FU组,腹腔分别注射生理盐水、As2O3、5-FU和As2O3 ＋5-FU,观察各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对体内标本行光镜、电镜、原位末端标记（TUNEL）、免疫组化和血常规检测.结果与单药作用相比,As2O3联合5-FU可显著抑制结肠癌移植瘤的增长,CDI值〈1,并显著增强诱导瘤细胞凋亡作用、调控凋亡相关基因（Bcl-2、Bax、Fas和FasL）表达.联合用药并未增加裸鼠肝、肾和造血系统的毒性.结论 As2O3与5-FU联合应用对结肠癌移植瘤有协同抗肿瘤作用,其机制可能与增强诱导癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因表达有关;同时联合用药对于荷瘤裸鼠的肝、肾和造血系统无明显毒性.     

顺铂诱导原代培养人膀胱癌细胞的凋亡

目的：探讨顺铂诱导原代培养膀胱癌细胞发生调亡变化的特征及机制。方法：以0-100umol/L浓度顺铂处理原代培养膀胱癌细胞12-72小时,应用MTT法检测细胞增殖抑制变化。分析其与凋亡指数（AI）的关系;用光镜和透射电镜分别观察膀胱癌细胞凋亡变化的特征。结果：顺铂能够明显地诱导膀胱癌细胞凋亡,具有一定范围内的作用时间和药物浓度依赖性,与细胞增殖抑制密切相关。膀胱癌细胞凋亡的镜下特征为胞膜完整,胞浆浓缩,核碎裂、萎缩或边积,胞浆外突形成凋亡小体。结论：证实顺多功能铂诱导膀胱癌细胞广泛性凋亡是它产生杀瘤效应的途径之一。     

肝细胞癌对三氧化二砷的化疗耐药性机制

研究证实三氧化二砷（As2 O3）单药治疗肝细胞癌（HCC）的效果有限,多数学者认为主要与 HCC 的化疗耐药有关。HCC 对 As2 O3的耐药机制目前仍很不明确,研究显示与 As2 O3的代谢特点、肝癌组织学和分子生物学的特征等密切相关。     

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制.方法:用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素(survivin)表达的变化.结果:As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT 细胞后,细胞生长受到明显抑制.单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用(P<0.05).As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和survivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性(P<0.05).结论:As2O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性.     

转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞多药耐药性研究

目的:探讨转染Bcl-2基因后膀胱癌细胞的多药耐药变化。方法:采用基因重组技术构建Bcl-2基因的真核表达载体pcD-NA3.1( )/Bcl-2,经酶切和基因测序分析对构建结果进行鉴定;通过脂质体将含Bcl-2基因的表达载体转染膀胱癌细胞BIU-87,RT-PCR检测基因转录水平;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞在不同化疗药物作用下的细胞耐药性。结果:经酶切鉴定和基因测序分析证明真核表达载体pcDNA3·1( )/Bcl-2构建成功。将该表达载体转染BIU-87细胞后,Bcl-2基因的表达水平与野生型BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞相比显著提高(P<0·01)。与BIU-87细胞和BIU-87/neo细胞相比,BIU-87/Bcl-2细胞对MMC、PHA和DDP等化疗药物的耐药性也明显增强(P<0·01)。结论:Bcl-2基因高表达是膀胱癌多药耐药的原因之一。     

抑制细胞外信号调节激酶对As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶在三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径中的作用.方法采用MTT法检测As2O3对胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用,采用瑞氏-姬姆萨染色和流式细胞仪检测As2O3诱导MGC-803凋亡以及加入选择性ERK抑制剂PD98059后细胞凋亡率的变化.结果5 μmol/L与10 μmol/L的As2O3作用24 h后凋亡率分别为(4.74±0.03)%和(11.93±0.06)%,而与PD98059联合作用24 h后凋亡率分别增加至(11.65±0.09)%和(18.15±0.10)%,P＜0.05.As2O3抑制MGC-803细胞的增殖,并诱导凋亡.结论预先抑制ERK途径增加了As2O3诱导MGC-803细胞的凋亡效应.ERK途径可能参与了As2O3诱导胃癌细胞系MGC-803凋亡的信号转导途径.     

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制。方法：用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素（survivin）表达的变化。结果：As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT细胞后,细胞生长受到明显抑制。单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用（P〈0.05）。As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和sur-vivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性（P〈0.05）。结论：As2 O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性。     

膀胱肿瘤T24／ADM多药耐药细胞株的建立及耐药机制的研究

目的建立人类膀胱肿瘤多药耐药（MDR）细胞株并研究其耐药机制。方法以人类膀胱肿瘤细胞株T24为研究对象，用多柔比星（ADM）浓度梯度递增诱导法，建立人类膀胱肿瘤细胞多药耐药模型（简称T24／ADM）。用MTT法检测肿瘤细胞的MDR特性；RT—PCR检测膀胱肿瘤耐药细胞株MDR基因的表达情况。流式细胞术检测耐药细胞P-糖蛋白（P—gP）的表达。结果T24／ADM对多种化疗药物产生耐药，对ADM的耐药性提高了16-3倍。RT—PCR检测发现T24／ADM中MDR基因和P—gp的表达明显增强。结论T24／ADM细胞具有MDR特性，其耐药性与MDR基因和P—gP的过表达有关。     

Bcl-2过表达对多柔比星诱导的膀胱癌细胞凋亡和NF-KB活化影响的观察

目的：探讨凋亡相关基因Bcl2过表达对多柔比星（ADM）诱导的膀胱癌细胞凋亡和NF—KB活化的影响。方法：采用脂质体转染法将Bcl-2基因转入膀胱癌细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,RT—PCR检测Bcl-2基因的表达。用6．25、12．5和25μg／mL的ADM分别作用于细胞24h,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测NF-kB活化情况。结果：建立分别稳定过表达Bcl-2基因和新霉素抗性基因（neo）的膀胱癌亚克隆株BIU87／Bcl-2和RIU87／neo,RT-PCR结果显示,H1U87／Bcl-2细胞的Bcl-2mRNA水平明显高于BIU87／neo和BIU87细胞,F=63．107,P〈0．0l。经6．25、12．5和25μg／mLADM作用24h后,BIU87／Bci-2细胞凋亡率较BIU87／neo细胞明显降低,t=11．216,JP〈0．01。与BIU87／neo细胞相比,ADM作用24h后BIU87／Bcl-2细胞胞质IKB明显减少,t=-O．255,P=0．018;而胞核NF—KBp65明显增多,t=2．088,P=O．049。结论：Bel-2基因能够抑制ADM诱导的膀胱癌BIU87细胞凋亡,其抗凋亡作用涉及NF—KB活化。     

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法:用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素(Survivin)表达的变化。结果:三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论:As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。     

Survivin基因siRNA真核表达载体的构建及其对转染膀胱癌细胞Survivin表达的抑制作用

目的构建针对Survivin基因的siRNA(smallinterferenceRNA)真核表达载体,并观察其对转染的膀胱癌细胞中Survivin基因表达和细胞凋亡的影响。方法应用siRNA设计软件设计针对Survivin基因的特异性短链寡核甘酸,化学合成后经退火形成双链siRNA模板,通过克隆到质粒pSilencer1.0-U6构建siRNA真核表达载体并用酶切和测序鉴定;然后将其转染人膀胱癌细胞株BIU-87,以反义Survivin寡核甘酸(ASODN)抑制效果为对照,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测BIU-87细胞生长抑制率(IR)和凋亡指数(AI),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测BIU-87细胞中SurvivinmRNA及其蛋白的表达。结果酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA对BIU-87细胞的IR和AI(62.14%和33.77%)均分别显著高于ASODN(39.33%和23.98%)和空白对照组(1.98%和3.75%),P均<0.05,SurvivinmRNA及其蛋白相对表达水平均显著低于ASODN和空白对照组。结论构建的siRNA真核表达载体能有效地抑制Sur-vivinmRNA的转录和表达,诱导BIU-87细胞凋亡和抑制细胞生长,为膀胱肿瘤的基因治疗提供新的方法和手段。     

直肠癌组织中多药耐药基因表达的临床研究

目的:探讨多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)表达产物P- 糖蛋白(P gly coprotein,P -gp)在直肠癌组织中表达的临床意义及对预后的影响。方法: 用SABC法免疫组化染色检测62例直肠癌组织中P-gp表达情况,并与癌组织分化程度、临床分期(Duke’s分期)及预后进行相关性分析。结果:MDR1 表达产物P- gp的阳性表达与直肠癌组织病理分化程度差异有统计学意义,临床分期方面差异无统计学意义,且与预后有关。P- gp高表达者5 年生存率为43. 2%, P gp阴性表达者5 年生存率为71. 6%,两者差异有统计学意义,P=0 .034 4。结论:直肠癌组织MDR1的阳性表达具有先天耐药性,这是直肠癌术后辅助化疗效果不佳的主要原因,并影响生存率,癌组织中P -gp高表达者较阴性表达者预后差。     

组蛋白去乙酰酶抑制剂MS-275抑制膀胱癌的实验研究

背景与目的:染色质核心组蛋白的乙酰化水平受组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰酶(HDAC)的控制,它与基因表达调控密切相关、HDACs功能异常与肿瘤的发生发展有关,组蛋白去乙酰酶抑制剂(HDAC Is)通过抑制HDACs而抗肿瘤。本文研究HDAC I类药物之一MS-275对人膀胱癌T24细胞的抑制作用,为临床应用提供有价值的实验依据。方法:将不同浓度的MS-275作用于T24细胞,用MTT法检测生长抑制作用,用平板克隆形成试验测定细胞增殖能力的影响,分别采用光学显微镜、透射电子显微镜及AnnexinV、PI双标流式细胞术观察和检测细胞的凋亡情况。结果:MS-275对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作用存在明显的剂量、时间依赖关系,0.5μmol/L作用72 h的抑制率为9.34%±3.57%,而8μmol/L作用120 h达94.84%±1.33%。克隆形成率从阴性对照组的55.67%±6.51%降至4μmol/L组的2.33%±0.58%。显微镜下可观察到大量的凋亡形态特征的细胞。流式细胞术检测示,作用48 h后的凋亡率在1μmol/L组、2μmol/L组和4μmol/L组分别为24.19%、30.77%和38.51%,明显高于阴性对照组(2.49%)。结论:组蛋白去乙酰酶抑制剂类药物具有体外抗膀胱癌作用,其重要作用机制之一是诱导膀胱癌细胞凋亡,并有望成为新的抗膀胱肿瘤药物。