shRNA靶向沉默P2X7R表达对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt和Wnt／β-catenin通路的影响

目的 探讨靶向P2X7受体（P2X7R）的小发夹RNA（shRNA）对人鼻咽癌HONE1细胞增殖、凋亡及信号通路的影响。方法 根据预实验结果优化shRNA转染条件,将2条靶向抑制P2X7R基因的shRNA载体片段（shRNA-1、shRNA-2）分别高效转染HONE1细胞,同时设转染无义序列（Blank）的空转染组及不进行任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测P2X7R表达水平以筛选抑制率高的转染载体用于后续试验。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡率,QPCR法检测各组凋亡相关基因的mRNA水平,Western blotting检测各组转染96 h后磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）通路和Wnt／β-连接素（β-catenin）通路中的蛋白变化。结果 转染组的P2X7R mRNA水平均低于空转染组和对照组（P＜0.05）,且选择干扰效率高的shRNA-1载体进行功能学研究;与空转染组和对照组比较,shRNA-1转染组的HONE1细胞增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bid、Bax的mRNA水平均升高,而抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1的mRNA水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,shRNA-1转染组处理后PI3K／Akt通路中PTEN蛋白水平均升高,而p-Akt水平均降低（P＜0.05）,Wnt／β-catenin通路中p-β-catenin、Cyclin D1和C-myc水平均降低（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制P2X7R基因表达可抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡,可能与抑制PI3K／Akt、Wnt／β-catenin通路有关,对鼻咽癌的防治有一定价值。     

苦参碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨苦参碱（Mat）对视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响。方法 Y79细胞经0.5、1.0、1.5 g/L Mat处理24 h后,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,磷酯酰丝氨酸结合蛋白-异硫氢酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting免疫印迹检测各浓度Mat处理后凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax、PI3K/Akt信号通路重要蛋白PI3K p85亚基、Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 不同浓度Mat作用Y79细胞24 h后,可呈浓度依赖性方式抑制细胞增殖,增加细胞凋亡率（P＜0.05）。Western blotting检测发现,Mat可明显增加促凋亡蛋白Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2水平并可降低PI3K p85α亚基及磷酸化Akt的蛋白水平（P＜0.05）,对总Akt水平无明显影响。结论 Mat可抑制人视网膜母细胞瘤增殖并诱导其凋亡,可能与抑制PI3K/Akt 信号通路有关。     

硼替佐米对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨硼替佐米（BTZ）对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别给予硼替佐米（0,2,10,50,250 nmol/L）作用24 h,采用MTT法检测PANC-1细胞活力,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测细胞凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与0 nmol/L硼替佐米相比,不同浓度硼替佐米处理后,PANC-1细胞生长抑制率均显著升高（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例均显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达增高（P＜0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;裸鼠成瘤实验中,不同浓度硼替佐米作用后,肿瘤瘤体质量显著降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论:硼替佐米能抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖,诱导其凋亡,推测硼替佐米可能通过调节PI3K/Akt通路,激活凋亡蛋白基因表达,抑制抗凋亡蛋白基因的表达,诱导PANC-1细胞凋亡。     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。     

Melittin对非小细胞肺癌增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨Melittin对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 分别采用0、10、20、50、100 μmol／L Melittin处理NSCLC细胞株A549、SPC-A1及人肺上皮细胞株16HBE 24、48、72和96 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测各细胞株的增殖抑制率变化,同时采用流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法及PI单染法检测不同浓度Melittin 处理24、48 h后的A549细胞凋亡及细胞周期情况,Western blotting检测不同浓度Melittin处理48 h后的A549细胞中PI3K／Akt信号通路相关蛋白（Akt和PTEN）及凋亡促进基因（caspase-9）的表达情况。结果 在10～100 μmol／L范围内,Melittin可呈剂量和时间依赖的方式提高A549、SPC-A1细胞的增殖抑制率,差异均有统计学意义（P＜0.05）,但对16HBE无细胞毒性作用（P＞0.05）;与0 μmol／L比较,除10 μmol／L Melittin处理24 h后的晚期凋亡率和G2／M期细胞比例无统计学差异（P＞0.05）,10～100 μmol／L的早、晚期凋亡率、G0／G1期细胞比例及PTEN和caspase-9蛋白水平均升高,S期、G2／M期细胞比例及Akt水平均降低,以上差异有统计学意义（P＜0.05）,且10～100 μmol／L范围内各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Melittin可对NSCLC细胞有毒性作用,但对正常肺上皮细胞无影响,且可诱导A549细胞凋亡及细胞周期阻滞并抑制PI3K／Akt信号通路的激活。     

岩藻糖基化抗原对卵巢癌细胞增殖信号通路PI3K/Akt的影响

目的:探讨岩藻糖基化抗原对人卵巢癌细胞系RMG-I增殖的影响,初步探讨其与增殖信号通路磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的关系。方法:观察PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对岩藻糖基化抗原致卵巢癌细胞增殖的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测岩藻糖基化抗原对细胞增殖的增强情况;Western blot观察RMG-I的Akt磷酸化蛋白表达。结果:α1,2-FT基因转染后细胞中Lewis(y)抗原含量明显增高。随着Lewis(y)含量的增加,RMG-I细胞增殖明显加快。Lewis(y)高表达卵巢癌细胞中磷酸化Akt的表达水平明显增高。PI3K抑制剂LY294002显著抑制Lewis(y)高表达卵巢癌细胞的增殖。抗Lewis(y)抗体和LY294002不仅降低了转染前后细胞中磷酸化Akt的表达水平,还消除了存在于细胞间的高低差别。结论:过表达的Lewis(y)抗原通过激活PI3K/Akt信号转导通路促进卵巢癌RMG-I细胞的增殖。抑制Lewis(y)抗原表达可能是一种治疗Lewis(y)高表达肿瘤的新方法。     

PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响

Objective  

We studied the effects of Wortmannin (WM) on the proliferation and apoptosis of leukemia cells, and explore the possible mechanisms.     

PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法: 以不同浓度的渥曼青霉素作用于人类髓细胞白血病细胞K562,采用MTT法检测细胞增殖活性,单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤形成的“彗星”样拖尾现象,Annexin VFITC/PI双标法检测细胞凋亡,Western blotting、RTPCR检测渥曼青霉素作用K562细胞后总Akt和磷酸化Akt以及NFκB基因及蛋白表达水平的变化。结果: 渥曼青霉素以时间剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,其24 h的IC50是25 nmol/L。渥曼青霉素诱导K562细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量依赖性增强。渥曼青霉素作用后K562细胞DNA链断裂,呈现“彗星”拖尾现象,其尾长与拖尾率显著高于对照组(P<0.01)。渥曼青霉素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制磷酸化Akt以及NFκB表达,但对总Akt蛋白没有明显影响。结论: 渥曼青霉素以时间和剂量依赖方式明显抑制K562细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能与其下调磷酸化PI3K/Akt信号通路以及NFκB蛋白表达有关。     

PI3K／Akt／mTOR在表阿霉素抑制Jurkat细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的 探讨PI3K／Akt／mTOR信号通路在表阿霉素抑制人T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖和诱导凋亡中的作用。方法 用0、1.25、2.5、5、10μmol／L表阿霉素和0、0.25、0.5、1、2μmol／L PI3K／mTOR双重抑制剂（NVP-BEZ235）对Jurkat细胞作用48h后,CCK-8试剂盒检测Jurkat细胞株增殖抑制情况;采用AnnexinⅤ／PE双染法流式细胞术检测上述药物作用Jurkat细胞48h的凋亡率以及5μmol／L表阿霉素和2μmol／L NVP BEZ235单独及联合作用Jurkat细胞0、12、24、36、48h的凋亡率;Western blotting法检测5、10μmol/L的表阿霉素作用Jurkat细胞0、6、12、24、48h,以及5μmol/L表阿霉素与2μmol/L NVP BEZ235单独及联合作用Jurkat细胞24、48h的PI3K／Akt／mTOR信号通路中Akt、mTOR、p70s6k等表达变化。结果 表阿霉素能够抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡,且凋亡作用呈浓度依赖性,5μmol／L表阿霉素作用Jurkat细胞48h的凋亡率为57.72％。在表阿霉素诱导Jurkat细胞凋亡过程中伴随Akt、mTOR、p70s6k的表达变化, NVP-BEZ235能够降低Jurkat细胞Akt、p70s6k的磷酸化水平,显著提高表阿霉素诱导Jurkat细胞凋亡的作用,5μmol／L表阿霉素和2μmol／L NVP-BEZ235联合作用Jurkat细胞48h的凋亡率达78.31％,明显高于5μmol／L表阿霉素的57.72％。结论 表阿霉素抑制Jurkat细胞增殖和诱导凋亡与PI3K／Akt／mTOR信号通路有关,当该通路抑制剂与表阿霉素联用时,Jurkat细胞对于表阿霉素敏感性有一定程度的提高。     

汉防己碱对MCF-7细胞凋亡及Akt/NF-κB信号传导通路的影响

目的:探讨汉防己碱诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的信号机制.方法:以MTT法测定不同浓度的汉防己碱(1、5和10 μmol/L)对MCF-7肿瘤细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法分析AKT活化;细胞免疫化学染色检测NF-κB表达.结果:不同浓度汉防己碱对培养的乳腺癌细胞MCF-7生长有显著的抑制作用,有效的诱导凋亡,且呈剂量依赖性,各组MCF-7细胞生长抑制率分别为(34.04±2.06)%、(54.07±1.08)%和(70.29±1.05)%,与对照相比较差异均有统计学意义,P<0.01;各组细胞凋亡率分别为(15.21±2.13)%、(23.07±1.08)%和(30.35±1.06)%,与对照相比差异均有统计学意义,P<0.05.汉防己碱对细胞内总AKT激酶蛋白的表达没有影响,但抑制磷酸化AKT蛋白的表达;同时对细胞内NF-κB的表达有抑制作用.结论:汉防己碱诱导乳腺癌细胞凋亡的机制与Akt/NF-κB信号途径有关.     

LncRNA DLEU2对胃癌细胞增殖、凋亡和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)对胃癌细胞增殖、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法通过GEPIA在线分析来自TCGA数据库和GTEx项目的胃癌组织DLEU2水平,采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞和胃癌BGC-823细胞的DLEU2水平;脂质体法将3条靶向DLEU2的小干扰RNA(si-DLEU2-1、si-DLEU2-2和si-DLEU2-3)转染至BGC-823细胞中,筛选最佳si-DLEU2干扰序列进行实验。体外常规培养BGC-823细胞并分为转染si-DLEU2的干扰组、转染无义siRNA序列的阴性对照(NC)组和未转染的空白对照(Blank)组,采用MTT比色法和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的增殖活力和凋亡率,QPCR和Western blotting检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspase-3的水平,Western blotting检测磷酸化的PI3K调节亚基p85(p-p85)和Akt(p-Akt)水平。结果GEPIA在线分析显示胃癌组织的DLEU2水平高于正常组织(P<0.05);QPCR结果显示BGC-823细胞的DLEU2水平高于GES-1细胞(P<0.05),且3条si-DLEU2序列转染后,BGC-823细胞的DLEU2水平均降低(P<0.05),其中si-DLEU2-3序列的效果最佳,故选取si-DLEU2-3序列进行后续实验;干扰组的DLEU2水平及转染24、48 h后的增殖活力均低于Blank组和NC组(P<0.05)。干扰组的凋亡率为(21.529±1.320)%,高于Blank组的(9.032±0.536)%和NC组的(8.641±0.365)%(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,干扰组的Bcl-2、p-p85和p-Akt水平降低,而Bax和caspase-3水平均升高(P<0.05)。Blank组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论DLEU2在胃癌组织和细胞中均升高且发挥促癌作用,可能通过激活PI3K/Akt信号通路来增强细胞增殖能力并抑制凋亡,有望成为胃癌治疗的新靶点。     

PTEN/PI3K/Akt信号通路对K562细胞凋亡调控的研究

 目的 探讨PTEN/PI3K/Akt信号传导通路对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的增殖、凋亡调控的研究及可能的分子作用机制。 方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及空载体（Ad-GFP）腺病毒,转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时用细胞光镜、电镜形态等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-_xL、Bax mRNA水平变化,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平变化。 结果 与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,细胞增殖受抑,增殖指数降低,凋亡率增加,p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-_xL mRNA表达降低,促凋亡基因Bax mRNA表达增加。 结论 过表达PTEN可能通过抑制PI3K/Akt通路抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡。     

CUEDC2通过活化 PI3K／Akt 信号通路促进乳腺癌细胞的生长

目的：探讨 CUE 结构域2（CUE domain －containing 2,CUEDC2）蛋白在人乳腺癌细胞中的生物学作用。方法：人乳腺肿瘤细胞 MCF －7转染的 Myc －CUEDC2真核表达载体,提取转染细胞的总蛋白检测磷酸化 Akt 和总 Akt 的表达变化。利用 CCK －8检测过表达 CUEDC2后 MCF －7细胞的生长。结果：CUEDC2能够活化 Akt,使磷酸化 Akt 表达增加,能够促进人乳腺癌细胞生长。结论：当乳腺癌中 CUEDC2表达增高时,能够引起 PI3K／Akt 信号通路活化,促进肿瘤细胞生长。     

PI3K、NF-κB p65蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、真核细胞转录因子κB(NF-κB) p65蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法 选取宫颈癌患者62例作为研究对象,提取宫颈癌组织及癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测PI3K和NF-κB p65蛋白的表达情况,对比宫颈癌组织和癌旁组织中REG4蛋白和Sp1蛋白阳性情况,分析PI3K和NF-κB p65蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的相关性。结果 宫颈癌组织中PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达率为62.90%和69.35%,癌旁正常组织中无阳性表达,两组比较,P<0.05。不同年龄、病理分型、肿瘤直径患者的PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);FIGOⅢ～Ⅳ期患者PI3K和NF-κB p65阳性表达率为76.92%和82.05%,高于FIGOⅠ～Ⅱ期患者的39.13%和47.83%(P<0.05);不同分化程度患者PI3K和NF-κB p65阳性表达率从高到低依次为低分化(83.33%,94.44%)、中分化(61.11%,63.89%)、高分化(25.00%,37.5%)(...     

阻断PI3K/Akt信号通路对低氧微环境中BCSCs微球体细胞增殖的影响

目的:探讨LY294002特异性阻断磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路对低氧条件下乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)微球体细胞增殖的影响。方法:通过无血清悬浮培养技术从人乳腺癌MCF-7细胞中筛选BCSCs微球体,应用免疫荧光染色检测BCSCs相关标志物CD44及CD133的表达,MTT法检测不同浓度LY294002处理后BCSCs微球体细胞的增殖情况,RT-PCR法检测BCSCs微球体细胞中缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测BCSCs微球体细胞中HIF-2α、PI3K和磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表达。结果:筛选获得的微球体细胞高表达BCSCs相关标志物CD44和CD133。LY294002能有效抑制低氧条件下BCSCs微球体细胞的增殖,抑制效应在药物作用后72～96h最为明显(P<0.05)。与低氧组比较,低氧+LY294002组微球体细胞中HIF-2αmRNA及PI3K、p-Akt和HIF-2α蛋白表达水平均明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LY294002通过特异性阻断PI3K/Akt信号通路而有效抑制低氧条件下BCSCs微球体细胞的体外增殖能力。     

二苯乙烯苷抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的: 研究二苯乙烯苷(2,3,5,4'tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及对PI3K/Akt信号通路的影响.方法: MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡,Western印迹法检测PTEN、p-PKB、cyclin D1、Bcl-2、caspase3和NF-kB蛋白的表达,RT-PCR检测PI3K上游抑制物PTEN mRNA的表达.结果: 1、10和100μmol/L的THSG处理细胞24、48和72 h后,明显抑制MCF-7细胞增殖,100μmol/L作用48 h的增殖抑制率为41.8%(P<0.05),但低浓度(0.1、0.01 μmol/L)THSG出现弱的促增殖作用.1、10和100 μmol/L THSG作用48 h后,MCF-7细胞凋亡率分别为(6.25±0.65)%、(5.04±0.83)%和(7.98±0.67)%.1、10和100 μmol/L THSG上调PTEN的蛋白表达量,下调p-PKB和cyclin D1的蛋白表达,均呈剂量依赖性;而对NF-kB、Bcl-2和ctrspase-3表达却无明显影响.THSG能轻微上调PTEN mRNA水平.结论: THSG可抑制MCF-7细胞增殖,该作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路实现的.     

CDX2基因通过NF-κB信号通路抑制结肠癌细胞增殖

目的 观察过表达CDX2基因对人结肠癌细胞株增殖影响,并初步探讨其作用机制。方法 通过基因转染技术将CDX2基因转染入结肠癌HT-29细胞株,经G418筛选后获得稳定转染细胞株,RT-PCR和Western blot检测CDX2基因表达。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。Western blot检测CDX2过表达对HT-29细胞内Cyclin D1和NF-κB磷酸化水平的影响。结果 经脂质体转染和筛选,建立了稳定过表达CDX2人结肠癌HT-29细胞株。转染CDX2组与未转染组和空白质粒组相比,细胞的生长速度减慢(P＜0.05),细胞周期中G₁/G₀期比例增加(P＜0.05),而S期比例则减少(P＜0.05);与未转染组和空白质粒组比较,转染CDX2基因组HT-29细胞的Cyclin D1和p-NF-κB活性明显降低。结论 CDX2基因可能通过抑制NF-κB通路抑制Cyclin D1活性,从而抑制人结肠癌HT-29细胞增殖。     

抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。