缺氧时肝癌HepG2细胞HIF-1α对GLUT-1表达的影响及机制探讨

目的探讨缺氧状态下肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达对GLUT-1的影响。方法 HepG2人肝癌细胞株,以DMEM培养基加胎牛血清培养,分为常氧对照组(21%O2),缺氧组(1%O2),常氧加吲哚美辛组,缺氧加吲哚美辛组。收获细胞后,分别行免疫荧光法检测细胞内HIF-1α的表达和核转位;Western blot检测各组的HIF-1α、GLUT-1蛋白表达;RT-PCR检测各组的GLUT-1mRNA含量。结果缺氧时HIF-1α(蛋白:68.25±11.72)和GLUT-1(mRNA:0.7424±0.1127;蛋白:70.33±12.83)在肝癌HepG2细胞中的表达增高(P<0.05);缺氧时以吲哚美辛抑制HIF-1α蛋白(36.34±9.50)稳定和积聚后,GLUT-1 mRNA(0.3710±0.1016)及蛋白(38.46±12.20)表达受到抑制(P<0.05)。结论缺氧可以上调HIF-1α和GLUT-1在肝癌HepG2细胞中的表达;HIF-1α可以调控其下游靶基因GLUT-1的转录和表达,影响糖酵解和细胞能量的产生。     

HIF-1α靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成的机制研究

目的:探究HIF-1α对食管鳞状细胞癌转移及血管生成的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR检测细胞HIF-1α和SP1 mRNA表达;Western blot检测细胞HIF-1α和SP1蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;体外血管生成实验检测人脐静脉血管内皮细胞HUVEC血管形成能力;ChIP-PCR实验检测HIF-1α和SP1启动子的结合。结果:与人食管上皮细胞HEEC相比,在食管鳞状细胞癌细胞Ec109、KYSE30、KYSE150和KYSE410中HIF-1α和SP1 mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.05）,其中Ec109细胞变化最为明显。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与oe-NC组相比,oe-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。HIF-1α靶向结合SP1启动子区。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与sh-HIF-1α+oe-NC组相比,sh-HIF-1α+oe-SP1组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。结论:HIF-1α通过靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成。     

lncRNA SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌细胞侵袭及迁移中的作用

目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞侵袭及迁移中的作用。方法：收集2017年1月至2018年6月西安交通大学第一附属医院手术切除的20例HCC患者的癌与癌旁组织标本,以及人HCC细胞系HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh7和永生化人肝细胞LO2。利用生物信息学方法分析缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）与SNHG5的结合位点,将pCMV-HIF-1α、shRNA-SNHG5（sh-SNHG5）质粒转染进HCC细胞,用qPCR法检测HCC组织和缺氧条件下HCC细胞中SNHG5的表达水平,用Western botting检测HCC细胞中HIF-1α蛋白的表达水平,用Transwell小室法检测沉默SNHG5后常氧和缺氧条件下对HCC细胞侵袭及迁移能力的影响。结果：分别与癌旁组织和LO2细胞比较,HCC组织和各细胞系中SNHG5表达水平显著上调（均P<0.01）。缺氧可上调HCC细胞中SNHG5的表达水平,其机制可能与缺氧活化HIF-1α 与 SNHG5 启动子结合从而促进其转录有关 ;缺氧能够增强 HepG2和 MHCC-97L 细胞的侵袭及迁移能力（均P<0.01）,沉默SNHG5表达能够显著抑制缺氧条件下HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力（均 P<0.01）。结论：SNHG5在HCC组织及细胞系中高表达,并在缺氧诱导的HCC细胞侵袭及迁移中发挥重要作用。     

CELF1通过抑制CDKN1B促进胶质瘤细胞增殖的研究

目的 探讨CELF1在胶质瘤细胞增殖中的作用及可能机制。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting检测胶质瘤细胞系U87、U251、SHG44以及人正常星形胶质细胞系HA1800中CELF1 mRNA和蛋白表达;无义核酸NC（NC组）、siCELF1（siCELF1组）和siCELF1＆siCDKN1B（siCELF1＆siCDKN1B组）转染U87细胞, CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期变化;Western blotting检测CELF1、CDKN1B和Cyclin D1蛋白表达。结果 胶质瘤细胞系U87、U251和SHG44 中CELF1 mRNA相对表达量分别为3.1±0.074、4.2±0.137和3.6±0.023,均高于人正常星形胶质细胞HA 1800的1.1±0.054,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测CELF1的蛋白表达与mRNA表达一致。沉默CELF1能显著降低U87细胞活力,siCELF1组G0／G1期细胞比例为（63.5±1.33）％,显著高于NC组的（39.4±1.24）％,而siCELF1组S期细胞比例为（14.3±0.095）％,显著低于NC组的（22.8±1.97）％（P＜0.05）。siCELF1组CDKN1B蛋白相对表达量为2.37±0.088,显著低于NC组的1.17±0.101（P＜0.05）。siCELF1组 Cyclin D1蛋白相对表达量为0.274±0.039,显著低于siCELF1＆siCDKN1B组的0.83±0.071（P＜0.05）。siCELF1＆siCDKN1B组细胞活力高于siCELF1组（P＜0.05）。siCELF1＆siCDKN1B组G0／G1期细胞比例为（42.1±1.76）％,显著低于siCELF1组的（62.4±1.92）％（P＜0.05）;而siCELF1＆siCDKN1B组S期细胞比例为（20.3±0.077）％,与NC组的（22.8±1.97）％差异无统计学意义。结论 CELF1通过抑制CDKN1B,进而介导Cyclin D1表达促进胶质瘤细胞增殖。     

肝癌缺氧诱导因子-lα异常表达与靶向干预的临床价值研究

分析肝癌组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达特征及沉默HIF-1α对癌细胞增殖的影响。方法:以免疫组化法分析自身配对的肝癌及癌周组织中HIF-1α表达。HepG2细胞转染靶向HIF-1α的miRNA干扰质粒,RT-PCR、Western blot检测HIF-1α基因及蛋白水平变化;酶联免疫吸附法检测培养液血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（ANG）-2表达;阿霉素预处理后,以Annexin V-FLUOS/PI双染法分析HepG2细胞凋亡率,并检测细胞周期改变。结果:肝癌及周围组织HIF-1α呈棕黄色颗粒状表达,定位于胞浆和胞核,其特征是癌旁组织全数表达高于癌灶组织（80.0%,χ2=22.35,P<0.001）,癌灶组织HIF-1α表达与肿瘤大小相关。HepG2细胞转染靶向HIF-1α miRNA干扰质粒后72 h,HIF-1α在转录水平下降87%,蛋白水平下降56%;培养液中VEGF和ANG-2表达水平分别减少54%和36%;HepG2细胞凋亡率为（22.46±0.61）%,G1期和S期比率分别为（61.49±1.12）%和（22.40±0.58）%;联合阿霉素后HepG2细胞凋亡率为（36.99±0.88）%,G1期和S期比率分别为（65.68±0.91）%和（19.47±1.34）%。结论:肝癌组织HIF-1α过表达与肝癌发展相关,沉默HIF-1α可有效调控下游血管生成相关基因表达,抑制癌细胞增殖,改善化疗药物敏感性。      

Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl2和MK-2206的浓度,最后分成空白组、MK-2206组、CoCl2组、MK-2206+CoCl2组;Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力;RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平;Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的侵袭、迁移(P＜0.05),同时能够促进HIF-1α的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),但是低浓度范围内的CoCl2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P＞0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P＜0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P＜0.05),缺氧环境无明显作用;同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-Akt、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力,但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。     

缺氧及HIF-1α对结直肠癌上皮-间质转化及侵袭增殖的影响

目的 研究不同缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、锌指转录因子Snail及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在结直肠癌SW480细胞中的表达水平,以及它们对细胞的增殖凋亡和侵袭迁移力的影响,探讨三者在结直肠癌的缺氧及上皮间质转化中的作用及可能机制.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导细胞缺氧模型,实验分组:常氧组、低氧组和无氧组.采用MTT法检测结直肠癌SW480细胞的生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell小室法)检测细胞的侵袭迁移力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡及周期变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达.结果 MTT结果显示随CoCl2浓度的增加结直肠癌SW480细胞的增殖活性逐渐增加(P＜0.05);Transwell结果显示随缺氧程度的增加穿过基质膜和聚碳酸酯膜的细胞数逐渐增多,侵袭迁移率增加(P＜0.05);FCM检测结果显示与常氧组比较,无氧组和低氧组G0/G1期SW480细胞明显减少,G2/S期细胞明显增多,细胞凋亡率降低(P＜0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示低氧组、无氧组与常氧组比较,SW480细胞内HIF-1α和Snail mRNA与蛋白的表达增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),且HIF 1 α和Snail的表达呈显著正相关.HIF-1α、Snail与E-cadherin的表达均呈显著负相关(P＜0.05).结论 缺氧及HIF-1α可促进结直肠癌SW480细胞株的体外生长增殖活性,抑制其凋亡,增强其体外侵袭迁移能力,其机制可能是缺氧诱导HIF-1α表达上调直接作用于SW480细胞产生,亦可能是缺氧或HIF-1α表达上调通过促进Snail表达,抑制E-cadherin表达,间接导致EMT的发生发展而产生.     

HIF-1α对胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨氯化钴（CoCl2）模拟化学缺氧复氧中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白的表达及其对人胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响。方法：在培养基中加入和去除CoCl2模拟化学缺氧和缺氧复氧,采用免疫印迹法（Western blot）检测CoCl2与HIF-1α蛋白表达关系;通过MTT、过河实验、黏附试验分别检测细胞侵袭、迁移运动能力和黏附能力。结果：人胶质瘤U251细胞中存在HIF-1α蛋白表达;在CoCl2模拟缺氧的时-效关系实验中,100μmol/L CoCl2刺激细胞6h、12h、24h时HIF-1α蛋白呈递增（分别为1.024±0.03、2.35±0.04、2.82±0.12）（P〈0.05）,24h达高峰,48h明显下降（1.82±0.05）。同时,在量-效关系实验中,CoCl250μmol/L、100μmol/L和150μmol/L刺激细胞24h时HIF-1α蛋白呈递增（分别为1.78±0.03、1.81±0.03、2.12±0.12）（P〈0.05）;MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞增殖起抑制作用;过河实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的迁移运动能力增加;细胞黏附实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的黏附力增加。结论：CoCl2能诱导人胶质瘤U251细胞HIF-1α蛋白过度表达,而且存在一定的时-效关系;经CoCl2诱导的缺氧后复氧,肿瘤细胞增殖能力下降,细胞的迁移运动能力和黏附能力增加。     

HIF-1α通过下调TP53INP1促进乳腺癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨HIF-1α通过调节TP53INP1蛋白对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:通过免疫组化检测60例乳腺癌标本中TP53INP1和HIF-1α的表达情况及分析其临床病理资料。通过体外构建HIF-1α及共转染HIF-1α和TP53INP1细胞模型,迁移侵袭实验和划痕实验检测HIF-1α和TP53INP1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响;Western blot实验研究共同下调HIF-1α和 TP53INP1对MMP2、VEGF蛋白表达水平的影响。结果:免疫组化实验显示HIF-1α在人乳腺癌组织中高表达,TP53INP1呈低表达,两者之间具有相关性且均与淋巴结转移有关（P＜0.05）。迁移侵袭实验及划痕实验显示在乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中下调HIF-1α抑制了迁移侵袭及愈合能力,MCF-7细胞中共同转染下调HIF-1α和TP53INP1质粒之后逆转了乳腺癌细胞的迁移侵袭能力及愈合能力（P＜0.05）。Western blot实验显示shHIF-1α和TP53INP1共转染后在MDA-MB-231细胞中MMP2表达水平高于下调HIF-1α表达组。共转染shHIF-1α和shTP53INP1质粒后在MCF-7细胞中,VEGF和MMP2表达高于下调shHIF-1α组（P＜0.05）。结论:HIF-1α可能通过下调TP53INP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移侵袭能力。     

miR-765靶向ARID1A对结直肠癌细胞侵袭及迁移的影响

目的 探讨微小核糖核酸-765(miR-765)靶向AT丰富结合域蛋白1A(ARID1A)对结直肠癌细胞侵袭及迁移的影响。方法 收集35例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织,体外培养结直肠癌SW480细胞并分为对照组、siRNA NC组、miR-765 siRNA组、mimic NC组和miR-765 mimic组。qRT-PCR法检测miR-765、ARID1A mRNA表达,Transwell法检测SW480细胞迁移和侵袭情况,蛋白印迹法检测ARID1A、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,双荧光素酶实验检测miR-765与ARID1A的靶向关系。结果 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miR-765水平显著升高,ARID1A mRNA及蛋白水平显著降低(P＜0.001),且结直肠癌组织中miR-765与ARID1A mRNA呈显著负相关(r=-0.768,P＜0.001);与TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者相比,Ⅲ~Ⅳ期的患者结直肠癌组织中miR-765水平显著升高(P＜0.01),ARID1A蛋白水平显著降低(P＜0.001)。敲减miR-765表达后SW480细胞迁移数、侵袭数、miR-765水平及MMP-9、VEGF蛋白水平显著降低,ARID1A水平显著升高(P＜0.05);过表达miR-765后SW480细胞迁移数、侵袭数、miR-765水平及MMP-9、VEGF蛋白水平显著升高,ARID1A水平显著降低(P＜0.05)。miR-765靶向调控ARID1A表达。结论 miR-765可能通过靶向抑制ARID1A表达,促进结直肠癌SW480细胞的侵袭和迁移过程。     

二甲双胍通过巨噬细胞抑制食管癌TE-1细胞的侵袭和迁移

目的:探究二甲双胍是否通过巨噬细胞抑制食管癌TE-1细胞的侵袭迁移及其可能的分子机制。方法:100 ng/mL PMA诱导THP-1巨噬细胞。取对数生长期TE-1细胞和巨噬细胞,分别用最终浓度为0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L二甲双胍处理,Western blot检测MMP9、VEGF蛋白表达水平,ELISA检测细胞TNF-α和IL-8浓度,筛选二甲双胍最佳作用浓度（2 mmol/L）。分别用100 ng/mL LPS、2 mmol/L二甲双胍、100 ng/mL LPS+2 mmol/L二甲双胍处理巨噬细胞制备条件培养基。将TE-1细胞分为4组:对照组、LPS-条件培养基组（LPS组）、二甲双胍-条件培养基组（Met组）和LPS+二甲双胍-条件培养基组（LPS+Met组）。划痕实验观察各组细胞迁移能力。Transwell小室检测细胞侵袭能力。Western blot检测各组细胞VEGF、E-cad、Vimentin和NEDD9的表达。ELISA检测各组细胞TNF-α和IL-8浓度。结果:与对照组相比,二甲双胍可显著降低TE-1细胞和巨噬细胞中MMP9、VEGF、TNF-α和IL-8水平（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。二甲双胍可显著抑制TE-1细胞迁移和侵袭（P＜0.05）,显著抑制VEGF、Vimentin和NEDD9蛋白表达（P＜0.05）,促进E-cad蛋白表达（P＜0.05）;显著降低TE-1细胞中TNF-α和IL-8水平（P＜0.05）。结论:二甲双胍可通过巨噬细胞降低食管癌TE-1细胞NEDD9的表达,抑制食管癌细胞侵袭迁移。     

miR-377-5p 通过下调HIF-1α 及其相关VEGF 信号通路抑制肝细胞癌HepG2 细胞的增殖和侵袭

目的：探讨miR-377-5p 与缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1,HIF-1α）的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）信号通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用。方法：qPCR检测35 例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p 的表达水平。将HepG2 细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5p mimic 组,qPCR 检测转染效率;EdU染色、Transwell 和Western blotting（WB）检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）及上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）标志蛋白E-cadherin、N-cadherin 表达的影响;qPCR、WB检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞中,缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p 与HIF-1α 基因的靶向关系。结果：HCC 组织中miR-377-5p 表达水平较癌旁组织降低（P<0.01）。与对照组相比,miR-377-5p mimic 组HepG2细胞中miR-377-5p 水平明显升高,细胞的增殖、侵袭能力降低（均P<0.01）,EMT、N-cadherin 表达水平降低（均P<0.01）而E-cadherin 表达水平显著升高（P<0.01）;miR-377-5p mimic 组中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平均降低（P<0.01 或P<0.05）。miR-377-5p 靶向抑制HIF-1α 基因表达,并抑制VEGF通路的激活（均P<0.05）。结论：miR-377-5p 通过靶向抑制HIF-1α 基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2 细胞的增殖、侵袭和EMT。     

缺氧微环境下HIF-1α对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的:探讨缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对胰腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭迁移的影响。方法:首先比较缺氧和常氧培养的胰腺癌细胞形态和体外侵袭迁移能力,以及HIF-1α和EMT相关因子的表达水平。然后通过HIF-1α抑制剂YC-1和siRNA基因沉默分别从蛋白和mRNA水平抑制HIF-1α的表达,检测缺氧培养的胰腺癌细胞体外侵袭迁移能力,以及EMT相关基因的表达水平。结果:形态学和分子水平证实缺氧诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1的EMT改变,增强其体外侵袭和迁移能力。缺氧上调HIF-1α、Snail、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。抑制HIF-1α的表达后,Snail和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调,并且体外侵袭迁移能力降低。结论:HIF-1α介导EMT在缺氧促进胰腺癌细胞侵袭迁移中发挥重要作用。     

干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响

目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组（NC组）和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。     

HIF—1α基因表达沉默对肝癌细胞P13K／AKT信号转导通路影响的研究

目的：探讨沉默缺氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α）基因表达对肝癌细胞P13K／AKT信号转导通路的影响。方法：选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钻（CoCl2）建立厌氧模型。构建HIF-1α小分子干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）特异性载体复合物,小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF-1α的基因表达,分别利用RT-PCR和免疫印迹法检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）、磷酸化AKT（p-AKT）、AKT和P13K在iTIRNA和（或）蛋白水平的表达变化。结果：肝癌细胞在缺氧条件下表达HIF-1α较常氧对照组显著增多,差异具有统计学意义,PmRNA=0．002,P蛋白=0．003。特异性HIF-1αsiRNA表达载体转染肝癌细胞后,肝癌细胞HIF-1α（PmRNA和P蛋白均〈0．001）、VEGF（PmRNA=0．001,P蛋白〈0．001）和p-AKT（P§自〈0．001）的表达明显减少;AKT和P13K的表达显著增多,与对照组的差异均具有统计学意义,P蛋白值分别为0．032和0．020。结论：特异性siRNA干扰沉默HIF-1α基因表达可抑制肝癌细胞P13K／AKT信号转导通路的激活。     

miRNA-93对结肠癌HT-29细胞株化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-93与结肠癌HT-29细胞株对氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响及可能机制。方法 miR-93抑制物转染HT-29细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组（NC）,采用MTT法检测细胞增殖活性。流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验和划痕实验分别检测miR-93抑制物组、空白对照组和NC组HT-29细胞凋亡、侵袭和迁移。双荧光素酶报告实验验证PTEN与miR-93的关系。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测3组细胞miR-93表达,以及对p-VEGFR2、p-Akt、PTEN mRNA表达的影响。结果 miR-93抑制物组中miR-93的相对表达量为0.40±0.05,显著低于空白对照组和NC组的1.13±0.08、1.12±0.09,差异有统计学意义（P＜0.05）。经1、4、16、64、256 μg／ml的5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞的增殖抑制率高于同浓度下NC组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。经16 μg／ml 5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞凋亡率、侵袭率和愈合率分别为（52.75±7.44）％、（45.76±15.85）％、（12.64±3.29）％,与空白对照组和NC组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验分析PTEN可能是miR-93的下游靶基因。miR-93抑制物组p-VEGFR2、p-Akt和PTEN表达水平分别为1.28±0.09、0.85±0.08、1.22±0.09,与空白对照组和NC组比较,VEGFR2和Akt磷酸化水平下调,PTEN表达上调。结论 下调miR-93可以增加PTEN的表达,抑制VEGFR-2和Akt磷酸化水平,从而提高结肠癌细胞对5-FU的敏感性。     

缺氧条件下电离辐射与肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的关系

目的：探讨缺氧条件下，电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子HIF-1α及血管生成因子VEGF表达的影响。方法：将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组。缺氧组：氯化钴处理细胞模拟缺氧条件；单纯照射组：按照射率4Gy／min、总共8Gy的剂量，用x线射线照射细胞；缺氧加照射组：氯化钴处理细胞一定时间后，按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞。利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况，MTT法分析细胞存活分数，RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况。结果：细胞凋亡情况：对照组未观察到细胞凋亡的情况，缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡，单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡，但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少（P〈0．05）；MTT检测细胞存活分数排列顺序为：对照组〉缺氧组〉缺氧加照射组〉单纯照射组。HIF-1α表达情况：缺氧加照射组〉缺氧组〉对照组（P〈0．05），单纯照射组与正常组无明显差异。VEGF表达变化情况：缺氧加照射组〉缺氧组〉单纯照射组〉对照组（P〈0．05）。结论：本研究提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用，从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性。     

乏氧条件下雷帕霉素对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨乏氧条件下雷帕霉素(RPM)对乳腺癌细胞的影响及其机制。方法 MTT法检测乏氧条件下RPM对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的抑制作用,采用定量RT-PCR和Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1α)、VEGF基因mRNA和蛋白表达。结果 缺氧条件下,RPM对MCF-7细胞生长有抑制作用;HIF-1α蛋白水平随着RPM浓度提高而降低(P＜0.01),而HIF-1α mRNA表达水平无明显变化;VEGF的转录和蛋白表达均随着RPM浓度升高抑制率增加(P＜0.01),呈剂量依赖性。结论 RPM能抑制乳腺癌的肿瘤缺氧反应,从而抑制肿瘤的生长和血管的生成。     

Ezrin蛋白和HIF-1α在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测Ezrin蛋白和HIF-1α在胃癌组织中的表达情况,探讨二者在胃癌血管形成中的作用。方法 应用免疫组织化学法检测60例胃癌、20例癌旁组织中HIF-1α和Ezrin蛋白的表达及微血管密度(MVD)。结果 Ezrin蛋白在胃癌组织中阳性率表达为73.3%(44/60),HIF-1在胃癌组织中的表达率为76.7%(46/60),MVD平均计数为21.15±7.61。Ezrin蛋白表达与组织分化程度、淋巴结转移及预后相关(P＜0.05)。HIF-1α表达与癌组织的大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期及预后相关(P＜0.05)。Ezrin蛋白和HIF-1α在胃癌中的表达呈正相关(r=0.380,P=0.003＜0.05)。Ezrin蛋白和HIF-1α阳性组MVD值显著高于阴性组(P＜0.05)。结论 Ezrin蛋白和HIF-1有可能作为评估胃癌恶性程度及判断预后的指标。Ezrin蛋白和HIF-1α可促进胃癌血管生成,可能参与胃癌的进展。     

miR-182对直肠癌细胞增殖、侵袭及Foxo3a/Wnt/β-catenin通路的调节作用

目的 研究miR-182对直肠癌细胞增殖、侵袭及Foxo3a/Wnt/β-catenin通路的调节作用。方法 收集2016年6月—2019年7月手术切除的直肠癌组织及癌旁组织,培养直肠癌细胞株HT29、SW620、HCT-116及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-182的表达量。将SW620细胞进行分组处理,对照组用不含药物的RPMI-1640培养基处理,NC组转染NC模拟物、miR-182组转染miR-182模拟物。采用MTS法检测各组细胞增殖活力,采用Transwell检测侵袭活力,采用Western blot检测Foxo3a/Wnt/β-catenin通路分子的表达。结果 直肠癌组织中miR-182的表达量(2.14±0.55)明显高于癌旁组织(1.06±0.24)(P＜0.05);HT29、SW620、HCT-116细胞中miR-182的表达量明显高于HIEC(P＜0.05),且SW620细胞中miR-182表达增加最显著;miR-182组细胞的增殖活力(0.92±0.15)明显高于对照组(0.52±0.08)和NC组(0.55±0.07)(P＜0.05),侵袭数目(39.49±7.61)明显多于对照组(23.25±5.85)和NC组(21.84±4.77)(P＜0.05),迁移数目(44.12±9.29)明显多于对照组(29.39±6.18)和NC组(32.83±6.68)(P＜0.05);Foxo3a的表达水平(0.36±0.07)明显低于对照组(0.83±0.15)和NC组(0.86±0.12)(P＜0.05);Wnt2的表达水平(0.86±0.15)明显高于对照组(0.62±0.09)和NC组(0.58±0.07)(P＜0.05);β-catenin的表达水平(0.79±0.15)明显高于对照组(0.41±0.07)和NC组(0.45±0.08)(P＜0.05)。结论 miR-182能够促进直肠癌细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向Foxo3a/Wnt/β-catenin通路相关。