嗜肺军团菌肺炎的研究进展

<正>历史回顾:嗜肺军团菌肺炎(LPP)系指军团菌科(Legionellaceae)细菌所致的细菌性肺炎.1976年7月21~24日,在美国费城一所旅馆里召开美国退伍军人会议期间,182名军人突然出现发热、咳嗽、胸痛及呼吸困难,90%的病例X-ray呈肺炎征象,附近居民39例也有类似症状,共计221例,其中死亡34例(15.4%),此病即为“退伍军人病”或“军团病”.1977年1月,McDade从肺组织中分离出G-杆菌.     

铁路不同工种人群嗜肺军团菌Ⅰ型（Lp－I）抗体水平调查

应用ＭＡＴ法对太铁地区主要工种及学生共４９０名健康人群进行了Ｌｐ－Ｉ抗体水平调查。调查结果：抗体平均滴度为１：５．０２９，抗体阳性率１０．６１％。Ｌｐ－Ｉ抗体阳性率在各职业中的分布差异有显著性（χ２＝１２．２３Ｐ＜０．０１），以列车乘务员最高（１６．８１％），其次为供热工（１３．０７％）、养路工（６．７８％）和学生（４．００％）。     

嗜肺军团菌致病性的研究进展

嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,Lp)是引起军团菌病的病原菌,它是一种革兰阴性杆菌,嗜热怕冷,属兼性胞内寄生菌。嗜肺军团菌广泛存在于水、土壤中,特别是与日常生活密切相关的自来水、空调、冷却塔、淋浴器等供水系统中。国外有"有水即有军团菌"之说。无论是冷、暖气产生含有军团菌的气溶胶被人体吸入后可引起以肺部为主     

芜湖铁路地区嗜肺性军团菌1—8型自然感染状况的调查

了解芜湖铁路地区嗜肺性军团菌的自然感染情况及传播的季节性。方法 用微量凝集试验检测抗体。结果 芜湖铁路地区健康人群军团菌感染呈多型性，抗体在夏秋季升高，经过一个流行季节，人群抗体阳性率升高。结论军团病防治工作的重点就放在夏季进行。     

空调系统嗜肺军团菌的感染、诊断及控制研究

近年来军团菌病流行严重威胁人类的健康，因此，强化对军团菌感染状况及控制方法的认识是预防和治疗工作不可忽视的一件大事。本参考了近几年国内外有关献，列举了一些军团菌病爆发的事例，强调了军团菌影响人类健康的潜在危险。并就空调系统军团菌的感染现状和传播机制、军团菌与巨噬细胞之间的相互作用、军团病的早期诊断以及控制方法的研究进展进行了综述。     

军团菌肺炎的临床诊疗

1临床资料 分析我院2006年1月～2009年10月经免疫荧光法及血微量凝集法(MAT)检测军团菌血清抗体诊断明确的21例CAI.P的临床症状,实验室检查,影像学改变,阿奇霉素或莫西沙星的疗效.     

嗜肺军团菌病

嗜肺军团菌病(Legionnaire disease,LD)是由嗜肺军团杆菌(Legionella pneumophila,LP)所引起的以肺部感染为主,可合并肺外多系统损伤的一种细菌性传染病,军团菌病最初是在1976年7月在美国费城召开的退伍军人会议期间暴发了221例肺炎,其中34例死亡,死亡率15.4%主要症状有发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难及腹泻等,90%的病例胸部X线片显示肺炎征象.6个月后从死者肺组织中分离鉴定出一种新的革兰氏阴性杆菌,于1978年在国际学术会议上正式命名为嗜肺军团杆菌(LP),其所致疾病则为嗜肺军团菌病(LD)我国在1982年由康晓明首次报告一例,此后国内已证明多起LD的暴发或散发,但是,迄今为止人类对军团菌的认识仍十分有限.     

细胞内抗嗜肺军团菌药物有效浓度测定

【目的】 探讨红霉素&#65380;环丙沙星&#65380;左氧氟沙星&#65380;莫西沙星4种抗菌药物对细胞内嗜肺军团菌的抗菌活性&#65377;【方法】 分别采用E-test法和有限稀释法测定上述4种药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞外抗菌活性,再用噻唑蓝比色法(MTT法)测定上述药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞内抗菌活性&#65377;【结果】 细胞外抗菌活性E-test法:红霉素0.047 μg/mL&#65380;环丙沙星0.38 μg/mL&#65380;左氧氟沙星0.125 μg/mL&#65380;莫西沙星0.125 μg/mL;有限稀释法:红霉素0.125 μg/mL&#65380;环丙沙星0.03 μg/mL&#65380;左氧氟沙星0.016 μg/mL&#65380;莫西沙星0.016 μg/mL&#65377;4种药物的细胞内抗菌活性分别为:红霉素0.25 μg/mL&#65380;环丙沙星0.016 μg/mL&#65380;左氧氟沙星0.016 μg/mL&#65380;莫西沙星0.004 μg/mL&#65377;【结论】 氟喹诺酮类药物在U937细胞模型中对嗜肺军团菌ATCC 33152具有很强的细胞内抗菌活性&#65377;其中莫西沙星的细胞内抗菌活性最强&#65377;MTT法是一种行之有效的用于检测药物对细胞内嗜肺军团菌抗菌活性的方法,可同时检测并对比各种药物样本的细胞内抗菌活性&#65377;     

桦木尘的细胞毒作用及其机理探讨

本实验通过测定巨噬细胞存活率和超氧阴离子自由基，研究了桦木尘的细胞毒作用。结果表明：随桦木尘剂量的增大和接触时间的延长其细胞毒作用逐渐增强（Ｐ＜０．０５）；而超氧阴离子自由基的产生则随之增多（Ｐ＜０．０５）。两者的变化在一定接尘时间内呈负相关关系。实验中发现，超氧阴离子自由基产生的增加先于巨噬细胞存活率的下降。提示：桦木尘的毒作用可能与超氧阴离子自由基产生过度有关。     

Rapid Identification of Legionella Pathogenicity by Surface-Enhanced Raman Spectroscopy

Objective To establish Surface-enhanced Raman Spectroscopy (SERS) can be used as a rapid and reliable method to distinguish virulent strain and mild strain of L. pneumophila.
Methods We isolated and characterized of bacterial strains from ATCC and water samples strains, while we analyzed data from SERS technology using gold nanoparticles as a base and cell infections were employed to rapidly detect L. pneumophila strains. Origin 8.0 was used to collect Raman spectra, smooth and homogenize data, and to contrast spectra. Principal component analysis (PCA) was conducted to discriminate differences between groups using the multivariate analysis package PyChem 3.0.5.
Results Our results indicated that the peaks of high virulence strains reached≥4000. This criterion was verified by subsequent cell experiments. In addition, we also conducted SERS rapid identification on the virulence of several collected clinical strains and obtained accurate results.
Conclusion The present study indicates that the established SERS protocol can be used as a rapid and reliable method to distinguish virulent and mildly virulent strains of L. pneumophila, which can be further used in clinical samples.     

深圳市嗜肺军团菌血清Ⅰ型菌株PFGE分型指纹图谱研究

目的研究深圳市公共场所中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型（LpⅠ）的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳（Pulsed-Field Gel Electrophoresis，PFGE）技术对30株LpⅠ型军团菌进行电泳，并经Bionumerics软件进行聚类分析。结果30株菌可分为28种PFGE型。不同地区间分离出部分菌株，经PFGE分型，相似性系数为100％，表明深圳市公共场所中央空调冷却塔水间可能存在交叉污染；同一地区，菌株间相似性系数存在差异，没有优势菌株；同一采样地点，存在两种以上PFGE型别。结论深圳市公共场所冷却塔水中分离的LpⅠ型菌株基因宅多样性．     

肺癌患者肺泡巨噬细胞表现HLA-DR的表达

目的 了解肺癌患者肺泡巨噬细胞表面人白细胞抗原-DR(HLA-DR)的表达。方法 经支气管肺泡灌洗获肺泡巨噬细胞，贴壁分离及培养，免疫组化方法检测HLA-DR表达的阳性细胞百分率。结果 ① 肺癌及良性肺病患者，其肺泡巨噬细胞未经刺激，均已有部分表达HLA-DR，但前者明显高于后者；② 干扰素-α(IFN-α)或脂多糖(LPS)刺激后，HLA-DR的表达均增加，且两者联合刺激优于单独刺激；③ 无论刺激与否，肺癌组荷瘤侧肺与非荷瘤侧肺比较，肺泡巨噬细胞表达HLA-DR的阳性细胞率明显增高。结论 肺癌患者，尤其是肿瘤局部，肺泡巨噬细胞可能通过表达HLA-DR提高抗原递呈功能。IFN-α、LPS均能明显增强肺癌患者肺泡巨噬细胞的抗原提呈功能，且两者有协同作用。     

以dotA基因为靶标的LAMP法快速检测嗜肺军团菌

目的建立一种简便、高效、特异、灵敏的快速检测军团菌肺炎致病原-嗜肺军团菌的方法。方法本研究分析了NCBI数据库中嗜肺军团菌IVB型分泌系统的序列,经过筛选建立了以dotA基因为靶标的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测法。为了验证该法的特异性,提取了约旦军团菌、马氏军团菌、沙门菌、不同血清型的嗜肺军团菌基因组DNA进行检测;为了验证该法的灵敏度,对梯度浓度的阳性模板进行了检测,并与普通PCR对比;最后还将该法实际应用于环境水样的检测。结果本法可于30 min内完成扩增;扩增产物电泳呈现LAMP特有的梯形条带,酶切产物的片段大小符合理论值;阳性产物中可见白色沉淀,加入溴乙锭后在紫外光下可见明亮的荧光,阴性产物无此现象。结论该dotA-LAMP嗜肺军团菌检测法的特异性好,灵敏度高于普通PCR,可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏、直观地检测出嗜肺军团菌,具备现场检测及基层推广的应用潜力。     

深圳市公共场所冷却塔水中嗜肺军团菌Mip序列分型研究

目的研究深圳市公共场所冷却塔水中嗜肺军团菌的基因特征。方法采用军团菌巨噬细胞感染力增强因子基因（Macrophage Infectivity Potentiator,mip）分型方法。提取深圳市51株嗜肺军团菌菌株DNA,聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）技术扩增mip基因,并将PCR扩增产物进行测序。结果每菌株测序后,序列与European Working Group for Legionella Infections（E.W.G.L.I）组织建立的数据库进行比对。51株嗜肺军团菌分为5种型别,分别为L.pnuemophile-phil-1、L.pnuemophile-sg3、L.pnuemophile-D-15、L.pnuemophile-sg10与L.pnuemophile-97-2898。结论mip分型方法可用于嗜肺军团菌的基因分型。深圳各区不同场所冷却塔水中分离的嗜肺军团菌株之间存在差异,L.pnuemophile-phil-1型别为优势型别占60.8％。     

纳米氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖影响

目的：研究纳米氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的毒性作用和对细胞的增殖影响;考察纳米氧化铈作用于细胞的生物效应是否存在剂量和粒径效应。方法：不同终浓度200、100、50、20、10、5、2.5、1.25、0.625μg/m L的20.8 nm Ce O2-NPs体外作用于96孔板中NR8383细胞24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;四种粒径20nm、50-100 nm、300-500 nm、1-5μm Ce O2分别以四种终浓度100、50、20、10μg/m L作用于NR8383细胞24 h,采用CCK-8试剂盒检测检测细胞活力。结果：不同浓度20.8 nm Ce O2-NPs作用于NR8383细胞,与对照组相比,除1.25、2.5、5μg/m L外,其他浓度下细胞存活率随浓度增大而升高,100、200μg/m L最明显;有剂量效应。四种粒径四种浓度的纳米氧化铈作用于NR8383细胞,50-100 nm的20μg/m L浓度和1-5μm的50、10μg/m L浓度Ce O2-NPs抑制细胞增殖,但不明显;其他各组均促进细胞增殖,其中20 nm的20μg/m L,50-100 nm的50μg/m L、100μg/m L最明显。剂量尺寸效应不明显。结论：小粒径纳米氧化铈对NR8383细胞增殖有促进作用,无明显毒性;微米级氧化铈有些浓度下细胞存活率降低,可能对细胞造成毒性。     

764—3对大鼠肺泡巨噬细胞膜ConA受体的影响

用辣根过氧化物酶-胶体金标记技术(HRP-Gold),观察肺泡巨噬细胞(AM)膜刀豆素球蛋白受体(ConA-R)的变化。结果发现:正常大鼠肺泡巨噬细胞表面胶体金颗粒平均为1.985±0.097个/μm,分布较均匀;博来霉素A_6(BLMA_6)体外激活的AM表面金颗粒为3.909±0.314个/μm,与正常组比较差异显著,P<0.001;预先与764-3培养的AM,其表面金颗粒平均为1.577±0.090个/μm,较单纯BLMA_6组明显降低。提示764-3对BLMA_6激活的AM膜ConA-R表达有一定的抑制作用。     

地塞米松对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

目的：通过研究地塞米松对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨地塞米松治疗急性肺损伤的作用机理。方法：健康雄性Wistar大鼠放血处死后全肺灌洗获取肺泡巨噬细胞（PAMs）,贴壁纯化,在预培养20h后重悬PAMs,分3组分别处理4h。正常对照（C）组：不做任何干预;脂多糖（LPS）组：按10μg／ml。的剂量加入LPS刺激;脂多糖加地塞米松（LPS＋Dex）组：将含Dex终浓度1×10mmol／L～1×6mmol／L的RPMI 1640培养基加入LPS。收集PAMs,与1％鸡红细胞悬液培育后制片,瑞氏染色观察并计算吞噬率和吞噬指数,对两者做相关回归分析并采用单因素方差分析比较组间差异。结果：各组AM的吞噬率和吞噬指数呈线性相关性关系．从高到低依次为：C组（12．50±2．07）％,2．29±0．08;LPS＋DeX组（8．25±1．67）％,1．73±0．18;LPS组（3．50±1．20）％,1．16±0．19;各组间的差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：LPS可抑制体外培养PAMs的吞噬活性;Dex对LPS抑制的PAMS吞噬活性有一定的活化作用。