二苯乙烯苷、远志皂苷元及其合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的比较研究

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)及二者合用对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关机制。方法 PC12细胞采用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病的损伤模型。用析因设计,设立正常组、模型组(20μmol/L Aβ25-35)、TSG组(100μmol/L TSG)、TEN组(50μmol/L TEN)、TSG+TEN组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN),每组分设6个复孔。检测各组细胞存活率、乙酰胆碱酯酶(Ach E)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,统计各组细胞分化率。结果 TSG组、TEN组及TSG+TEN组细胞存活率、SOD活力及细胞分化率均明显高于模型组(P均<0.05),Ach E活力、MDA含量均明显低于模型组(P均<0.05)。且细胞存活率、细胞分化率从高到低依次为TSG+TEN组、TSG组、TEN组(P均<0.05),Ach E活力从低到高依次为TSG+TEN组、TSG组、TEN组(P均<0.05)。TSG组和TSG+TEN组Ach E活力和MDA含量均明显低于TEN组(P均<0.05),SOD活力均明显高于TEN组(P均<0.05),TSG+TEN组SOD活力和MDA含量与TSG组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 TSG与TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞具有明显协同作用,机制可能与明显改善神经胆碱能系统功能、保护神经细胞突触可塑性有关,而与对氧化应激系统的影响关系不显著;TSG对PC12细胞的保护作用优于TEN,机制可能与TSG改善神经胆碱能系统功能、神经细胞抗氧化应激功能及保护神经细胞突触可塑性的作用较TEN显著有关。     

细叶远志皂苷通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响

目的 探讨细叶远志皂苷（Tenuifolin, Ten）对Aβ_25-35诱导PC12细胞氧化应激及炎症因子的影响。方法 根据前期实验结果,20μM Aβ_25-35作用于PC12细胞,建立细胞损伤模型。40μg/ml TEN予以细胞保护作用。实验分为空白组、模型组、TEN组。试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）表达水平;Western Blot检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）蛋白水平。结果 高与空白组比较,SOD、GSH水平下降,MDA水平升高;细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;与模型组比较,TEN能提高SOD、GSH水平,降低MDA水平;降低细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结论 TEN能减轻Aβ_25-35诱导PC12细胞的细胞炎性反应及氧化应激,起到细胞保护作用。     

三七总皂苷保护PC12细胞对抗过氧化氢损伤的作用

目的:考察三七总皂苷在PC12细胞中对过氧化氢引起损伤的细胞保护作用.方法:采用MTT法考察0.01～100mg·L-1三七总皂苷对正常PC12细胞活力的影响,并在H2O2刺激的PC12细胞中考察0.1～10 mg·L-1的三七总皂苷对细胞活力的影响,通过对细胞活力的考察选择三七总皂苷合适的实验剂量,测定三七总皂苷0.1,1 mg·L-1对H2O2刺激的PC12细胞中活性氧水平、过氧化氢酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响以及对丙二醛(MDA)含量的影响.结果:三七总皂苷在0.1～10 mg·L-1浓度能提高正常PC12细胞活力,并能显著提高H202刺激的PC12细胞活力(P＜0.01).0.1,1mg·L-12个剂量的三七总皂苷均能显著减少H2O2刺激的PC12细胞中活性氧水平,提高SOD活力(P ＜0.001)和GSH-Px活力(P ＜0.001),并减少MDA生成(P ＜0.001).结论:三七总皂苷能通过增强细胞内抗氧化酶活力,保护PC12细胞对抗氧化损伤.     

生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:探讨生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2处理PC12细胞制作成氧化应激损伤模型,采用MTT法检测生地黄水煎剂对PC12细胞活性的影响,并采用Westen blot法检测PC12体外凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、caspase3的表达情况。结果:经150μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率明显降低,而经生地黄水煎剂(2.5、5、10mg/m L)预处理后,细胞存活率大致呈浓度依赖增长,并明显抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的高表达,提高Bcl-2/Bax比值。结论:生地黄水煎剂对氧化应激损伤的PC12细胞凋亡具有保护作用,其保护机制是通过抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的表达,并提高Bcl-2表达而实现的。     

二苯乙烯苷、远志皂苷元2∶1配伍抗Aβ_(25-35)损伤PC12细胞作用的最适浓度研究

目的:研究不同浓度下二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞的作用,以筛选最适配伍浓度。方法:采用MTT比色法筛选Aβ25-35最适造模浓度,在所得最适Aβ25-35浓度基础上采用MTT比色法筛选TSG-TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的最适浓度。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P0.01);与模型组比较,合用4组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN)的细胞存活率最高(P0.01)。结论:在本实验所选取的浓度范围内,TSG与TEN 2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞以"100μmol/L TSG+50μmol/L TEN"合用浓度为最佳。     

人参皂苷Rg1对过氧化氢诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用

观察人参皂苷Rg1（GSRg1）对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤时细胞存活率、DNA及蛋白的影响。GSRg1与PC12细胞共同培养24h,经H2O2 处理30min,通过显微镜观察细胞的形态,MTT法测定细胞生存率,用单细胞凝胶电泳法测定DNA单链损伤,ELISA方法测定细胞内的羰基蛋白含量。结果：经H2O2 处理后细胞生存率明显降低,细胞内DNA单链损伤及羰基蛋白含量明显升高,并随H2O2浓度的增加而加重。而经GSRg1预培养的细胞生存率明显升高,细胞内DNA单链损伤及羰基蛋白含量明显减轻,其作用呈剂量依赖关系。结论：GSRg1通过降低H2O2 对PC12细胞内DNA和蛋白的氧化损伤而起到对神经细胞的保护作用。     

远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究

目的:观察远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用,初步探讨其可能作用机制。方法:以肺癌A549细胞为实验对象,通过不同浓度的远志皂苷元(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理A549细胞,MTT观察细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞的凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的活性;Real Time PCR检测凋亡相关基因TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的表达。结果:远志皂苷元可显著抑制A549细胞增殖(P0.05)、诱导A549细胞凋亡(P0.05)。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,显著改变TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的基因表达(P0.05)。结论:远志皂苷元可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

远志皂苷元对PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响

[目的]观察远志皂苷元对体外培养的PC12细胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影响.[方法]应用低糖培养PC12细胞模拟O-GlcNAc糖基化水平的下降,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞存活率;采用Western blot方法检测O-GlcNAc糖基化和tau蛋白磷酸化水平.[结果]远志皂苷元能明显改善PC12细胞存活率,与对照组相比,模型组O-GlcNAc糖基化表达降低,tau蛋白磷酸化水平升高.与模型组相比,远志皂苷元处理组未发生O-GlcNAc糖基化表达降低,tau蛋白未发生过度磷酸化.[结论]tau蛋白磷酸化在某些位点受到O-GlcNAc糖基化修饰的负性调节,远志皂苷元在一定程度上可以升高O-GlcNAc糖基化表达,降低tau蛋白磷酸化水平.     

菟丝子黄酮类组分对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的：探讨菟丝子中黄酮类组分（CF）对氧化损伤的肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞（Pheochromocytoma，PC12）的保护作用及其可能的作用机制。方法：从菟丝子中提取纯化黄酮类活性成分（CF），采用MTT法检测细胞活力，DPPH测定CF在无细胞体系中对自由基的清除能力，利用Hoechst 33258染色和流式细胞仪技术对凋亡细胞进行形态观测和比例测定。结果：0．3～0．5mmol／L H2O2能够剂量与时间依赖性降低PC12细胞的存活率，诱导细胞凋亡。不同剂量CF预处理可提高PC12细胞存活率，明显抑制细胞的凋亡，降低细胞的凋亡比率；CF对DPPH自由基的清除率呈剂量依赖性增强。结论：CF对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用，其机制可能是通过清除自由基、提高抗氧化酶活性从而抑制细胞的凋亡。     

甘草汁蒸制远志对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的影响

目的观察甘草汁蒸制远志过程中对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的动态变化。方法采用HPLC同时测定远志生品及甘草汁蒸制不同时间(4、8、12、16、20、24 h)炮制品中远志皂苷B和细叶远志皂苷的量。色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长210 nm。结果随着蒸制时间的延长,细叶远志皂苷含有量逐渐升高,而远志皂苷B含有量变化不大。结论远志中远志皂苷B含有量较高,达到2.23%;甘草汁蒸制仅对远志中细叶远志皂苷含有量影响显著,但对远志皂苷B含有量无明显影响。     

芥子碱对连二亚硫酸钠引起的PC12细胞凋亡损伤的保护作用

目的：探讨芥子碱对连二亚硫酸钠诱导PC12细胞缺氧损伤的作用并探讨其机制。方法：用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧，建立细胞缺氧损伤模型，MTT法检测细胞的存活率；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的改变：测定乳酸脱氢酶（LDH）的释放量，培养基和细胞内丙二醛（MDA）含量。结果：与对照组和单纯缺氧模型组相比，芥子碱能显著提高损伤后细胞的存活率，降低细胞内LDH的漏出，使细胞内的MDA减少，降低细胞的凋亡率并提高线粒体的膜稳定性。结论：芥子碱具有显著的神经保护作用，其机制可能与提高细胞的抗氧化能力，减少细胞凋亡有关。     

脑力智宝提取物及其含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的：研究脑力智宝对神经细胞缺氧损伤的影响。方法：采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,研究脑力智宝对连二亚硫酸钠引起PC12细胞缺氧损伤的影响。结果;脑力智宝可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率。结论：脑力智宝提取物及其含药血清对缺氧引起的PC12细胞损伤具有保护作用。     

金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

目的利用PC12细胞的抗抑郁损伤模型研究金丝桃苷的抗抑郁作用及其可能机制。方法金丝桃苷、盐酸氟西汀与0.01 mmol.L-1皮质酮共孵PC12细胞48 h,采用形态学法、MTT比色法、LDH法、Fura-2/AM荧光标记法测定胞内Ca2+浓度。结果高浓度皮质酮处理PC12细胞后,细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;OD490值显著升高(P<0.01),LDH释放量较少(P<0.01),胞内[Ca2+]i升高,表明细胞受到损伤或部分死亡;当给予金丝桃苷或盐酸氟西汀后,细胞存活率升高,表明细胞损伤减少或接近正常。结论与经典抗抑郁剂盐酸氟西汀的作用效果一样,金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞有明显的保护作用和抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用有关。     

过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷的保护作用

 目的探讨过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法MTT测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,DCFH-DA为细胞内荧光探针,测定细胞内ROS浓度,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位。结果200μmol·L^-1H₂O₂可诱导PC12细胞凋亡,细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1,1和10μmol·L^-1浓度的芍药苷处理后,H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱H₂O₂对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内ROS累积,稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

舒络粉针剂对PC12细胞缺氧、缺糖损伤的保护作用

目的探讨舒络粉针剂对PC12细胞缺糖、缺氧损伤模型的影响.方法用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)、无糖Earle′s液复制PC12细胞缺氧、缺糖模型,通过MTT染色和乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定研究舒络粉针剂对PC12细胞的保护作用.结果含舒络血清不同程度的抑制Na2S2O4、无糖Earle′s液造成的缺氧、缺糖样损伤,降低LDH的漏出.结论舒络粉针剂对缺氧、缺糖引起PC12细胞损伤具有保护作用.     

人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨人参皂甙Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及可能机制。 方法 :采用PC12细胞为模型 ,以不同浓度的DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测PC12细胞的亚二倍体峰 ,按Griess法测定NO代谢产物NO2 ·的浓度 ,并观察人参皂甙Rg1(10 μmol/L)预防性给药对其影响。 结果 :0、0 15、0 30、0 45和 0 6 0mmol/LDA处理组的凋亡率分别为 1 6 1±0 18、40 6 0± 1 74、46 6 7± 1 45、5 4 49± 1 6 1和 6 4 39± 1 6 0 % ,与Rg1预防组 0 73± 0 11、1 16± 0 0 9、1 35± 0 0 7、1 5 3± 0 10和 1 6 1± 0 12 %比较均有显著性差异 (P <0 .0 1) ;DA处理组的NO2 ·浓度分别为 1 82± 0 0 5、3 5 7± 0 0 2、8 82± 0 0 4、18 0 0± 0 0 7和 2 7 34± 0 0 9μmol/L ,与Rg1预防组的 1 0 0± 0 0 7、1 36± 0 0 7、1 2 5± 0 0 4、3 39± 0 11和 3 82± 0 11μmol/L比较亦都有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :NO生成增多可能是DA诱导PC12细胞凋亡的重要信号分子 ,人参皂甙Rg1可抑制NO生成 ,防止DA诱导PC12细胞凋亡     

淫羊藿苷对氧糖剥夺所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究淫羊藿苷对氧糖剥夺PC12细胞所致炎症损伤的保护作用。方法采用PC12细胞复制氧糖剥夺2 h细胞损伤模型。实验分成6组,即正常组,模型组,尼莫地平组(10-5mol·L-1),淫羊藿苷高、中、低剂量组(10-5,10-6,10-7mol·L-1)。将淫羊藿苷各剂量组预给药1 h加氧糖剥夺期间给药2 h后,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-lβ(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果淫羊藿苷各剂量组均能显著降低氧糖剥夺PC12细胞上清液的TNF-α、IL-1β、IL-6含量,提高细胞的活力,与模型组比较,差异均有显著性意义(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷能减轻氧糖剥夺PC12细胞所致的炎症损伤,具有细胞保护作用。     

玉郎伞多糖对过氧化氢诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用

目的研究玉郎伞多糖(YLS)对H2O2诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用及其机理。方法采用IV型胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,用H2O2体外诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中AST和ALT水平,测定肝细胞中MDA和GSH含量,MTT法检测细胞存活和增殖活性。结果YLS(0.125~1 mg/ml)可明显降低或恢复由H2O2升高的培养上清液中AST和ALT水平及肝细胞中MDA含量,还可提高H2O2降低的肝细胞存活率和GSH含量。结论提示YLS对大鼠原代培养肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

13种巴基斯坦草药对PC12细胞保护作用的研究

目的:选择13种巴基斯坦传统草药,观察其对PC12细胞增殖的影响,并探讨其对H2O2、谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用,为寻找神经细胞保护作用新药提供实验依据。方法:体外培养PC12细胞,应用不同浓度的H2O2、GLU,分别建立神经细胞损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率。结果:虎爪豆、诃子等能明显促进PC12细胞增殖作用(P<0.05);在H2O2 150μmol.L-1损伤模型中,药物组和模型组相比,罗勒、仙人掌、芦笋、灯油藤、诃子等能显著减轻H2O2的细胞损伤作用(P<0.05);在GLU 30mmol.L-1诱导PC12细胞损伤,与模型组比较,凤仙花、仙人掌、虎爪豆、诃子等均显示出损伤保护作用(P<0.05)。其中,诃子不仅能促进PC12细胞增殖,且在两种PC12细胞损伤模型中均具有较强的损伤保护作用。结论:具有促进PC12细胞增殖的药物为诃子、罗勒、虎爪豆;具有对抗H2O2损伤作用的药物有:诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、灯油藤、罗勒;具有减弱GLU诱导PC12细胞损伤的药物为:虎爪豆、诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、甘草;诃子在3种模型中均表现出较强的细胞损伤保护作用。本研究结果为神经退行性疾病药物的开发和选择提供了初步的实验依据。