聚乙二醇诱发人淋巴细胞早熟凝集染色体的方法

人外周血淋巴细胞染色体畸变的检查,按常规方法至少需经48h培养。近年来由于细胞融合技术的发展,发现了早熟凝集染色体(Premature Condensation Chromosome,PCC)现象,对未进入分裂周期或处于间期的细胞也能进行染色体分析。本文介绍了用聚乙二醇(PEG)作为融合剂获得人淋巴细胞G_1-PCC的方法,还对影响细胞融合的各种因素进行了比较研究。     

染色体提前浓集技术及其应用

染色体提前浓集技术(Premature Chromosome Condensation),简称 PCC,是近十几年来在细胞融合和染色体技术的基础上发展起来的一种新技术。PCC 的概念是 Johnson 和 Rao 于1970年根据其实验结果提出来的。他们认为,PCC 就是用间期细胞与分裂期细胞融合,使间期染色质在间期内提前浓集成染色体的现象。这种提前浓集的染色体称为 PC 染色体。1977年 Lau 用化学融合剂聚乙二醇代替生物融合剂仙台病毒,获得了大量的融合细胞,简化了操作,使这项技术逐渐得到广泛应用。     

用人鼠细胞杂交、提前染色体浓缩和染色单体差异技术研究人骨髓细胞增殖时相和周期

骨髓是人类造血器官,它的细胞增殖动力反应了它的造血功能状态。骨髓造血功能的研究是临床血液学的一个重要课题。骨髓细胞增殖中只有分裂中期的 M 时相可以从形态上识别,而分裂间期(间期细胞)的三个时相(G_1相,S 相和 G_2相)从形态上则无法区分。     

关于染色质的结构

染色质(chromatin)是间期细胞在电镜下所见的纤维状细丝,而染色体(chromosome)则是细胞进行有丝分裂时在光镜下所见的棒状结构。当细胞周期由间期进入有丝分裂期时,染色质高度螺旋卷曲密集成染色体。这样看来,染色质与染色体在化学组成上是基本相同的。大多数人认为,二者均由组蛋白、DNA、非组蛋白染色体蛋白质(Nonhistone chromosomal protein缩写为NHCP)以及RNA所组成。各组成成分之     

人胃癌细胞不同增殖周期与HPD光敏损伤的关系

应用超微结构技术研究 HPD 加红光对人胃低分化粘液腺癌细胞损伤敏感部位与细胞周期时相的关系.HPD 光敏作用从细胞超微结构损伤中呈现出显著的周期特异性,M 期细胞以核部位损伤比胞质更为敏感。且损伤严重;G_1期细胞以质膜与胞质损伤明显;S 和 G_2期细胞以线粒体和其它细胞器的损伤最为严重,与 G_1期相似但质膜损伤很小.     

刺梨黄酮对辐射损伤骨髓细胞周期的影响

目的研究刺梨黄酮(FRT)对辐射损伤骨髓细胞周期的影响。方法取小鼠骨髓细胞制成单细胞悬液,分为空白对照组、辐射组、辐射+50 mg·L~(-1)FRT干预组(50 mg·L~(-1)FRT干预组)、辐射+100 mg·L~(-1)FRT干预组(100 mg·L~(-1)FRT干预组)。空白对照组不加干预;辐射组给予6 Gyγ射线照射;50、100 mg·L~(-1)FRT干预组先在骨髓细胞悬液加入相应量的FRT,使FRT终浓度分别为50、100 mg·L~(-1),2 h后给予6 Gyγ射线照射。经细胞固定、碘化丙啶染色后,进行流式细胞仪检测。结果与空白对照组比较,辐射组照射后6、12 h,G_1期、S期细胞比例均降低(P<0.05),G_2期细胞比例均增高(P<0.05),且辐射后12 h G_1和S期细胞比例低于6 h时(P<0.05),G_2期细胞比例显著高于6 h时(P<0.05)。与辐射组比较,50、100 mg·L~(-1)FRT干预组的G_1、S期细胞比例均增高(P<0.05),G_2期细胞比例均减少(P<0.05),且辐射后6、12 h,100 mg·L~(-1)FRT干预组G_1和S期细胞比例高于50 mg·L~(-1)FRT干预组(P<0.05),G_2期细胞比例低于50 mg·L~(-1)FRT干预组(P<0.05)。结论 FRT可以降低辐射后骨髓细胞G_2期的细胞比例及增高G_1、S期的细胞所占比例,对γ射线所致骨髓细胞损伤有一定防护作用,且在一定浓度范围内防护效果呈浓度依赖性。     

3’-Me-DAB诱癌过程中大鼠肝组织染色体及病理形态的变化

用直接法制备染色体、病理切片和放射自显影技术,观察3’-甲基-4,4’-二甲基偶氮苯(3’-Me-DAB,三甲基奶油黄)诱发大鼠肝癌的诱癌过程。发现诱癌过程中鼠肝组织内细胞增生活跃:早期为卵圆细胞和残留的肝细胞;中期为增生结节内的肝细胞及汇管区胆管上皮细胞;后期为肝癌细胞。同时也发生了染色体数目及形态的变化。染色体畸变以染色单体型为主,提示致癌剂作用于S和G_2期细胞。1、2号染色体断裂率高于理论值,这可能与染色体结构重排有关。癌变过程中染色体畸变可能有累积和放大。我们还对肝癌的发生与染色体畸变的关系进行了探讨。     

亚硒酸钠对U—937细胞增殖,分化及双链RNA含量的影响

采用流式细胞仪检测等方法,初步研究亚硒酸钠对U-937细胞的抑制增殖作用和诱导分化作用及其对U-937细胞双链RNA的影响,结果提示:亚硒酸钠可抑制U-937细胞增殖,其作用随剂量增加和时间延长而增强。可使细胞用期发生改变,表现为G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞减少,G_2/M期细胞减少。可增强细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶活性,同时伴有单核细胞样形态变化,提示亚硒酸钠可能有诱导U-937细胞分化的作用。亚硒酸钠尚可明显降低U-937细胞双链RNA过量百分率。     

干扰素抑制肿瘤生长的G_0—G_1期

本文报告了人白细胞干扰素制剂能影响人色素瘤由“A”态转为“B”期。在高细胞密度进入静止期的人色素瘤细胞比在同样情况下继续增殖者对于干扰素细胞抑制作用较敏感。这些细胞由干扰素引起细胞周期的紊乱,包括G_0—G_1期(“A”态)至S期(“B”期)的转变率下降,及S期延长。这些发现支持一些G_0—G_1期     

抗-p30单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

作者用纯化的p30抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。融合率为93.95％,抗体阳性率为21.01％。经克隆化,获得两株分泌抗-p30单克隆抗体的杂交瘤细胞株E_8与G_1。染色体计数:E_8为98.7±6.54;G_1为97.7±7.77。PAGE于γ区出现浓染的蛋白带。免疫组织化学染色和ELISA抑制试验证实该两株细胞分泌的抗体具有较好的种属特异性和器官特异性。均属IgG_2。都不能使人精子凝集和制动。     

亚硒酸钠对单个直肠腺癌细胞DNA含量影响的研究

1.7μmol/L浓度的亚硒酸钠对人体直肠腺癌细胞系HR8348作用48小时,用萤光半定量方法测定单个细胞的萤光位。细胞群体萤光值的频率分布提示:G_1期细胞增多,S期、G_2期和M期细胞减少,可能该浓度亚硒酸钠抑制G_1期细胞的代谢而使DNA的合成减少。     

染色体和遗传

97川场5绒毛间期细胞凝集染色体的诱导及其意义/魏文祥…厂生殖医学杂志一1卯6,5(l)一47 ~49 本文作者首次将染色体期前凝集(PCC)方法用于绒毛间期细胞的探索。结果显示:由于G,期的绒毛细胞处于合成期之前,染色体尚未复制,此时诱导出的代C均为染色单体。G.期PCC从早期到晚期凝集度逐渐减少,G.早期PCC粗而短,染色较深,且可逐条分辨,C.晚期PCC细而长,染色浅,染色体相互缠绕,不能逐条分辨。S期绒毛细胞诱导出的PCC呈现不均匀浓缩、光镜下见一团“粉碎状”的染色体。S期PCC实际上为着色的颗粒区和不着色的间隙区相间串联而成,前者为完…     

G-CSF单克隆抗体的研究及临床应用

粒细胞集落刺激因子(G—CSF)是人体中集落刺激因子(CSFs)的四种亚型之一。它是一种糖蛋白单体,主要作用于中性粒细胞系,对髓性白血病有强大的诱导分化作用。为了对G—CSF进一步了解,作者单位的实验室首次在国内建立了三株分泌特异抗rhG—CSFMcAb的杂交瘤细胞,为深入研究G—CSF提供了条件。利用B细胞杂交瘤技术,将用rhG—CSF免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,建立了三株分泌抗rhG—CSFMcAb的杂交瘤细胞:2D_4、1B_9、2G_3。染色体数目测定结果表明它们的染色体数大都在     

Cyclin B1的启动子在HeLa细胞cyclin B1蛋白调控中的作用

目的 通过检测细胞周期素B1(cyelin B1)的启动子在HeLa细胞的不同细胞周期的活性变化,探讨其对cyclin B1蛋白的调味控作用.方法 采用PCR法获得HeLa细胞cyclin B1的启动子,通过基因重组插人pGL3 promoter vector 从而获得质粒pGL3/cyelin B1 promoter.采用羟基脲(hydroxyurea,HU)对HeLa细胞进行细胞周期G_1、S、G_2/M期的同步化,通过流式细胞术法确认.用短暂转染的方法,将重组的质粒转染至HeLa细胞.通过双萤光素酶活性检测分析cyelin B1的启动子在HeLa细胞周期G_1、S、G_2/M期的活性的变化.结果 双荧光素酶活性检测cyelin B1的启动子活性在G_1期最高,S期最低,G_2期中等.结论 在HeLa细胞巾cyclin B1的启动子活性和cyclin B1蛋的的表达并不同步.     

野百合碱对早熟凝聚染色体的损伤与微核效应

本文研究野百合碱对细胞周期各时相的作用。以HeLa细胞早熟凝聚染色体(PCC)为指标,发现PCC的损伤主要表现为粘连,在间期各时相中,以S期较为敏感。当剂量达20mg/kg以上时,小鼠骨髓多染红细胞的微核率有显著增加,说明野百合碱对间期和丝裂期都有影响,具有一定的致突变作用。     

血清饥饿法处理胎儿成纤维细胞周期同步化的研究

目的 探讨不同的血清饥饿方法和饥饿时间对水牛胎儿成纤维细胞(BFF)周期的影响.方法 用血清直接饥饿和梯度饥饿处理水牛胎儿成纤维细胞.结果 血清直接饥饿处理或梯度饥饿处理后其G_0/G_1期成纤维细胞的比例均显著高于一般培养组[(88.40±0.75)%、(87.00±0.78)%vs(84.09±1.16)%;P＜0.05],但血清直接饥饿组和梯度饥饿组之间差异无显著性(P＞0.05).用血清直接饥饿法处理水牛胎儿成纤维细胞3d时的G_0/G_1期细胞比例显著高于0、1、2及6d的细胞比例(P＜0.05),但3、4及5d的G_0/G_1期细胞比例之间差异不显著(P＞0.05).结论 血清直接饥饿和梯度饥饿法均能有效地使水牛胎儿成纤维细胞同步于G_0/G_1期;血清直接饥饿处理细胞3d可取得较好的细胞周期同步化效果.     

人癌症高表达蛋白1在有丝分裂期和分裂间期的定位研究

目的：分析人癌症高表达蛋白1（HEC1）在有丝分裂期和分裂间期的定位和表达调控相关蛋白基序。方法：用逆转录聚合酶链反应法从HeLa细胞中克隆HEC1基因cDNA,并构建其真核表达载体;对HEC1 cDNA测序序列进行生物信息学分析;HEC1真核表达载体转染293T细胞后,用Western blot进行表达分析;并用有丝分裂抑制剂（nocodazole）对细胞进行同步化和释放,观察有丝分裂期和分裂间期时HEC1定位。结果：电泳和酶切鉴定,得到含有HEC1的真核表达载体,Westernblot证实表达载体可在转染细胞中表达重组HEC1蛋白;HEC1测序序列分析发现多个与定位和调控相关基序,提示HEC1可能受APC/C蛋白酶体调控;HEC1在有丝分裂期定位于染色体,在分裂间期定位于细胞质靠近细胞核部位。结论：获得HEC1基因cDNA及表达载体,HEC1定位随不同细胞周期而变化。     

恩替诺特对K562人慢性粒细胞白血病细胞株G_0/G_1细胞周期的影响

[目的]探讨恩替诺特对K562人慢性粒细胞白血病细胞株G_0/G_1细胞周期的影响.[方法]采用CCK-8试剂盒观察恩替诺特对体外培养的K562人慢性粒细胞白血病细胞生长抑制的影响,并利用流式细胞仪检测细胞周期.[结果]CCK-8试剂盒观察结果显示,与对照组比较,随着恩替诺特药物浓度的增加及作用时间的延长,K562细胞抑制率显著升高(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示,恩替诺特可使K562细胞阻滞于G_0/G_1期,且阻滞细胞的数量与药物浓度呈正相关(P<0.05);恩替诺特作用48h时对细胞周期的阻滞作用最强.[结论]恩替诺特通过阻滞细胞周期于G_0/G_1期而抑制K562细胞增殖.     

低水平~(60)Co-γ射线全身照射诱导家兔外周血淋巴细胞的遗传学适应性反应研究

用~(60)Co-γ射线对家兔进行慢性全身均匀照射,当累积剂量分别达到0.3、0.75、0.9、1.2、1.5、1.8Gy时,取外周血G_o期和G_2期淋巴细胞,再均以1.5Gy X射线照射。制备染色体标木观察有无适应性反应及其剂量范围。结果证明D_1+D_2(G_o期)组,D_1在0.3～1.5Gy之间;D_1+D_2(G_2期)组D_1在0.3～1.2Gy剂量范围内均可诱导出明显地适应性反应。     

照射和加温对Hela S3细胞周期及DNA含量的影响

用流式细胞分析和图象分析技术,测定照射和加温后HeLa S_3细胞周期及DNA含量的变化。结果表明照射后HeLa S_3细胞DNA含量增加,照射及加温后HeLa S_3细胞出现G_2+M期延搁现象,提示DNA含量增加是G_2+M期延搁的结果。G_2+M期显著延搁时,细胞克隆源性存活率亦明显降低,X线照射细胞存活低于1％,加温处理细胞存活低于2.65％,提示G_2+M延搁现象不仅是细胞周期受阻的结果,也是细胞严重杀伤的后果。本实验证实,流式细胞分析和图象分析技术是快速测定受照和加温细胞反应的有效手段。