缺血性内脏痛模型大鼠脊髓背角NMDA受体NR2B亚单位的表达

目的探讨大鼠内脏缺血刺激后行为学反应及脊髓背角NMDA受体NR2B亚单位的表达变化。方法 36只SD大鼠随机分为假手术组(S组,n=18)和造模组(C组,n=18)。各组在手术后30、60、120、180min、第2d、第3d共6个时间段分别进行内脏疼痛强度的行为学评分。分别于术后3、7、14d随机取6只大鼠用免疫组织化学方法测定脊髓L4～5背角处的NMDA受体NR2B亚单位表达。结果造模组大鼠在结扎结肠系膜血管后60min均达到疼痛评分的最大值,与假手术组比较,造模组所有时间点疼痛行为评分明显升高(P<0.05);在脊髓L4～5节段NMDA受体NR2B亚单位的免疫阳性产物主要出现在背角深层和中央管周围。造模组大鼠3d的脊髓NMDA受体NR2B亚基的表达与假手术组差别无统计学意义(P>0.05);造模组大鼠7、14d的脊髓NMDA受体NR2B亚基的表达明显高于假手术组(P<0.05)。同组比较,7d组蛋白表达高于3d组和14d组(P均<0.05)。结论 NMDA受体NR2B亚基在肠管缺血引起的内脏痛形成机制中起重要作用;缺血性内脏痛模型大鼠可用于相关内脏痛发生机制的研究。     

三七总皂苷对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体NR1表达的作用

目的:研究三七总皂苷对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体NR1的作用。方法:用免疫组化法观察胶原酶诱导的脑出血大鼠前脑内NR1在给药组和对照组的表达变化。结果:脑出血后大鼠前脑NR1在病灶内部少量表达,病灶周围、大脑皮质、海马等部位均有不同程度的高表达,给药组在皮层、病灶周围阳性细胞明显减少,反应强度减弱。结论:三七总皂苷明显降低NR1在病灶周围、皮层海马神经元的阳性表达,从而发挥对受损神经元的保护作用。     

中枢NMDA受体NR2B亚单位与神经病理性疼痛的研究现状

中枢神经系统N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体在病理性疼痛的发生和发展中起着重要作用。近年来研究发现中枢神经系统中NMDA受体NR2B亚基与神经病理性疼痛的关系尤为密切。NR2B在疼痛的产生、中枢性痛觉敏感化形成和疼痛治疗中有着深刻的意义。本文就NR2B与神经病理性疼痛的研究现状进行综述。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基在骨癌痛 小鼠脊髓背角和背根神经节中的表达

目的：通过观察骨癌痛小鼠疼痛行为学变化和脊髓背角与背根神经节N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（the 2B subunits of N-methyl-D-aspartate receptors,NR2B）的表达以及它们之间的相关性,探讨NR2B在癌性痛产生和维持中的作用。方法：选用45只成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为3组,模型组（n=15）：于小鼠股骨远端骨髓腔内接种Lewis肺癌细胞2×106个,接种体积为10 μL;假手术组（n=15）：接种等体积的D-Hank’s液;正常对照组（n=15）：不予任何处理。术后第3天始隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械性触诱发痛。术后第7,15,23天,各组任选5只取小鼠术侧后肢,HE染色,光镜下观察肿瘤生长及骨质破坏的程度;取腰段脊髓膨大（L2-4）和L4背根神经节行NR2B免疫组织化学检测。结果：通过小鼠行为学测定和组织学检测证实骨癌痛模型制备成功。NR2B在模型组术侧脊髓背角和背根神经节免疫反应阳性指数各时间点明显高于假手术组和正常对照组（P<0.05）。模型组中术侧第7与15,23天比较差异有统计学意义（P<0.05）。各组小鼠术后第23天,术侧脊髓背角和背根神经节NR2B免疫反应阳性指数与小鼠术侧后爪累计抬足时间明显正相关（分别为r=0.976,P<0.001;r=0.882,P<0.001）;与小鼠术侧机械性缩足阈值明显负相关（分别为r=-0.879,P<0.001;r=-0.760,P=0.001）。结论：骨癌痛小鼠脊髓背角和背根神经节中NR2B受体表达均增加,且与行为学表现有明显的相关性,推测脊髓背角和背根神经节的NR2B受体在小鼠骨癌痛产生和维持中起重要作用。     

血管性痴呆大鼠NMDA受体与学习记忆的研究

N-甲基天疼氨酸（NMDA）受体是中枢神经系统中一类重要的兴奋性氨基酸受体,具有配体、电压双重门控特性,并对Ca^2＋有高通透性,但静息状态下Mg^2＋结合在通道内,阻止Ca^2＋内流。其至少存在7个亚单位,即NR1亚单位、4种NR2亚单位（分为NR2A、NR2B、NR2C和NR2D）以及两种NR3亚单位（NR3A和NR3B）。NRl为功能性亚基,是组成NMDA受体通道的必需配件;NR2是修饰蛋白,与NRl构成异寡聚体,形成有高度功能活性的NMDA受体通道;NR3主要发挥抑制作用。由不同亚单位组成的受体往往表现出不同的生理学和药理学特性,从而参与机体各种状态下的病理生理过程。NMDA受体广泛分布于哺乳动物的大脑皮层到脊髓等中枢部位,尤以在与学习记忆有关的大脑皮层和海马结构等的密度最高,奠定了NMDA受体参与学习记忆的物质基础。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基拮抗剂对帕金森病运动并发症大鼠行为及相关信号蛋白的影响

目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂CP-101.606对帕金森病运动并发症大鼠的行为效应及相关信号蛋白的影响.方法 将6-羟多巴胺立体定向注射于大鼠前脑内侧束建立帕金森病(PD)动物模型.对模型成功的PD大鼠接受每日2次左旋多巴(每公斤体质量50mg左旋多巴加每公斤体质量12.5mg苄丝肼)腹腔注射,持续22d.在第23天左旋多巴注射前,PD大鼠给予CP-101.606处理.评估旋转反应时间,采用蛋白印迹法检测纹状体区磷酸化NR2B、磷酸化钙调激酶Ⅱ( CaMKⅡ)及磷酸化谷氨酸受体1( GluR1 S831)表达情况.结果 NR2B拮抗剂CP-101.606逆转了左旋多巴所诱导的PD大鼠旋转时间的缩短;左旋多巴长期作用后引起磷酸化NR2B及下游相关信号蛋白磷酸化CaMKⅡ与磷酸化GluR1 S831升高至(145.3±6.5)％、(132.5±5.7)％及(105.6±6.3)％,而CP-101.606能下调三者磷酸化水平,其表达量分别为(102±4.9)％、(98.4±3.9)％与(49.5±4.2)％.结论 NR2B磷酸化可能通过介导N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体功能上调并激活其下游相关信号蛋白参与了帕金森病运动并发症的发生,抑制NR2B的药物可能是治疗PD运动并发症的一种新的治疗方式.     

疼痛与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体

已有证据表明NMDA受体对诱发和维持疼痛状态中的中枢敏感性具有重要性。其亚单位NR1、NR2(A、B、C、D)及NR3(A、B)可决定NMDA受体的功能特性，其中NR2B对感受伤害尤为重要，因而NR2B选择性拮抗剂有可能用以治疗慢性疼痛。     

C末端缺失NR2B亚单位表达载体的构建及其在NMDA受体装配研究中的应用

目的：研究NMDA受体NR2B亚单位细胞内C末端，在NR1—1a／NR2B亚型NMDA受体装配和表面表达中的作用。方法：构建C末端不同缺失和GFP标记的NR2B亚单位表达载体，单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞，用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果：成功构建了8个C末端不同缺失的GFP—NR2B表达质粒(GFP—NR2B△1～△8)。将GFP—NR1—1a，GFP—NR2B及GFP—NR2B△1～△8分别单独转染HEK293细胞，不能获得迭细胞膜表面的表达。而将这些质粒分别与NR1—1a共转染293细胞，发现GFP—NR2B及C末端部分缺失的GFP—NR2B△1～△6，均能与NR1—1a一起表达于细胞膜表面，而仅留有PDZ结合基序的GFP—NR2B△7和C末端全长缺失的GFP—NR2B△8，则不能与NR1—1a一起表达于细胞膜表面。结论：NR1—1a与NR2B的共表达和装配，是形成NR1—1a／NR2B亚型NMDA受体并表达于细胞表面的必要条件。NR2B与NR1—1a装配时，NR2B对NR1—1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用，并不依赖于NR2BC末端某一特定的区域，相反可能仅要求有一定长度的NR2BC末端。     

N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体功能的研究进展

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体是一种配体门控型离子通道,由7种亚型（NR1, NR2A,NR2B,NR2C,NR2D, NR3A和NR3B）组成, 通过其不同亚型与细胞内多种蛋白相互作用。NR2B受体参与突触信号转导和蛋白之间的调节,与学习、记忆、疼痛感受、进食行为及多种神经疾病有关。本文综述了近年来有关NR2B受体的结构、分布及功能调节等方面的研究进展。     

实时荧光定量PCR检测大鼠耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体亚单位的基因表达

目的了解大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)中NMDA受体亚单位的基因表达水平,为进一步探讨SGN中NMDA受体的功能提供依据。方法利用倍比稀释的出生3 d的大鼠正常脑组织CDNA构建NMDA受体亚单位NR1、NR2(A～D),NR3(A～B)与甘油醛-3磷-酸脱氢酶(GAP-DH)基因的相对标准曲线,通过实验验证NR1、NR2(A～D),NR3(A～B)分别和内参基因GAPDH是否有一致的扩增效率,应用△Ct法对NMDA受体各亚单位的表达进行相对定量。结果 NMDA受体亚单位中由高到低依次为NR2B、NR3A、NR1、NR2D、NR3B、R2A、NR2C;除NR2D与NR3B外,其余各亚单位之间比较均有统计学意义(P<0.01)。结论实时荧光定量PCR可以对SGN中NMDA受体亚单位的表达进行全面定量分析,进一步证实了NMDA受体各亚单位在耳蜗SGN中的表达水平。     

鞘内注射MK-801对骨癌痛小鼠的镇痛作用及脊髓NR2B蛋白表达的影响

目的探讨MK-801连续鞘内注射对骨癌痛小鼠的镇痛作用及脊髓背角N-甲基2-天冬氨酸亚基（NR2B）蛋白表达的影响。方法C3H／HeJ小鼠32只,随机分为4组（n=8）：正常对照组、假手术组、骨癌组＋生理盐水组、骨癌组＋MK-801组。分别测定术后9、12、15、18、21d小鼠机械缩腿阈值（MWT）和热缩腿潜伏期（TwL）;骨癌组＋生理盐水组、骨癌组＋MK-801组分别在肿瘤细胞种植后第10日鞘内给予MK-80110nmol／5μl和生理盐水5μl,每日1次,连续7日,采用免疫组织化学法检测各组脊髓背角NR2B蛋白表达的变化。结果骨癌组＋生理盐水组MWT与TwL显著下降,脊髓背角有大量NR2B阳性表达（P〈0．01）;骨癌组＋MK-801组仅出现轻度痛敏症状,NR2BmRNA表达受到明显抑制（P 〈0．01）。结论NR2B表达上调可能是骨癌痛的发病机制之一,MR-801组可抑制其表达从而发挥一定程度的镇痛作用。     

脊髓横断损伤大鼠模型脊髓5-HT2AR表达的变化

目的:观察脊髓横断损伤大鼠模型脊髓5-HT2A受体(5-HT2AR)表达的变化。方法:30只Wistar大鼠随机分为三组:手术组、假手术组和正常对照组,每组10只。手术组建立大鼠脊髓L5节段完全横断损伤模型;假手术组大鼠只去除椎板,保留硬脊膜的完整性;正常对照组大鼠不做任何处理。大鼠术后饲养30d,采用免疫荧光染色法观察L5节段以下脊髓前角和外侧索5-HT2AR免疫反应的密度。结果:手术组大鼠脊髓前角和外侧索5-HT2AR免疫反应的密度均明显高于假手术组和正常对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:脊髓前角和外侧索5-HT2AR表达的上调可能是脊髓完全横断损伤后肢体痉挛状态和反射亢进的潜在机制。     

SCI大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化

目的：：观察脊髓全横断损伤对脊髓前角细胞Beclin-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组,建立大鼠第2腰髓全横断损伤模型,分别于损伤后6h、1d、3d、7d、14d、21d取3-4腰髓,采用免疫荧光染色法观察大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果：与假手术组相比,模型组损伤后各时间点大鼠脊髓前角Beclin-1免疫阳性细胞数明显升高(P＜0.01,P＜0.05）。脊髓损伤后3d脊髓前角细胞Beclin-1免疫阳性细胞数达到高峰,21d最低。结论：Beclin-1可能参与了神经元自噬状态的改变。     

NOS1免疫阳性细胞在猕猴中枢神经系统内的分布

目的 研究神经元型一氧化氮合酶（NOS1）在灵长类动物中枢神经系统中的表达。方法 采用免疫组织化学技术,观察了一氧化氮合酶在正常猴喉脑和脊髓中的表达。结果 NOS1阳性神经元分布于中枢神经系统的广泛区域,包括大脑皮质、海马、齿状回、尾壳核、纹状体、小脑皮质、脊髓前角、后角和中央灰质。结论 NOS1在神经系统内有广泛的分布,其产物一氧化氮可能参与了对多种神经功能如学习记忆等的调节。     

腹腔注射利多卡因对切口痛大鼠脊髓背角NMDA受体-1表达的影响

目的:探讨腹腔注射利多卡因对切口痛模型大鼠痛觉行为和脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体-1(NR1)表达的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为5组:正常对照组(A组)、手术切口组(B组)、利多卡因5 mg/kg组(C组)、利多卡因10 mg/kg组(D组)及利多卡因20 mg/kg(E组)。除A组外,其他4组按Brennan法制作趾部切口痛模型。C、D、E三组于切口痛模型制备成功后腹腔注射相应剂量的利多卡因。注射后5 min开始观察5组大鼠痛觉行为的改变,以累计疼痛评分评定痛觉行为。观察1 h后取同侧脊髓,用免疫组化方法观察NR1表达的变化。结果:与A组相比,其余各组大鼠术后累积疼痛评分增加,脊髓背角NR1表达增强,差异均有统计学意义(P<0.01)。与B组相比,D组和E组大鼠的累积疼痛评分减少,脊髓背角NR1表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:腹腔注射利多卡因对切口痛大鼠具有较好的镇痛效果,并抑制其脊髓背角NR1的表达,提示其镇痛机制可能是通过抑制NR1的表达而实现的。     

恒河猴脊髓半横断损伤后腹角及对侧脑皮质前运动区EGF阳性神经元数的变化

目的 探讨脊髓损伤(SCI)对表皮生长因子(EGF)表达的影响及EGF在脊髓损伤再生修复中的作用.方法 18只成年恒河猴被随机分为假手术对照组,脊髓半横断损伤(hSCI)7 d、14 d、1月、2月和3月组,各损伤组于第11胸髓节段切断左侧半脊髓,在相应时间点取材,脊髓取损伤处近、远段5 mm两段,脑取损伤对侧皮质前运动区.制作冰冻切片,采用抗EGF多克隆抗体免疫组织化学SP法染色,观察并计数脊髓腹角及对侧大脑皮质前运动区EGF免疫阳性神经元数的变化.结论 恒河猴hSCI后3月内,损伤处脊髓近、远段损伤侧与未损伤侧腹角及对侧皮质前运动区EGF阳性神经元数均较假手术对照组减少(P＜0.05),表现为先降低后增加,晚期呈逐渐减少的变化趋势,不同部位EGF阳性神经元数波动不一致.结论 恒河猴hSCI后3月内脊髓损伤侧腹角EGF阳性神经元数明显减少;hSCI也会影响未损伤侧EGF的表达;损伤早期,邻近损伤处脊髓腹角及对侧脑皮质前运动区EGF阳性神经元数急剧减少后均有自发回升.     

吗啡耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2A亚基的表达

目的 研究N-甲基-M-天冬氨酸受体(NMDA)NR2A亚基在吗啡耐受大鼠脊髓的分布和表达变化.方法 12只雄性SD大鼠随机分成对照组(C组,n=6),C组和吗啡耐受组(M组,n=6),C组:鞘内注射生理盐水10μl;M组:鞘内注射吗啡10μg.每日给药2次,连续7d.给药前和给药后30min通过测定甩尾潜伏期(TFL)观察大鼠热痛阈的变化.最后一次给药后次日处死动物,取L4～5脊髓组织,采用免疫荧光方法检测NR2A在各组大鼠脊髓的表达.结果 随着用药天数增加,M组TFL逐渐下降,到第7天M组与C组比较差异无显著性[(3.25±0.93)s,(2.66±0.27)s,P＞0.05],成功建立吗啡耐受模型.NR2A在脊髓的分布贯穿全层.M组脊髓背角浅层NR2A表达(OD值:9617±1233)较C组(OD值:2.66±0.93)升高(t=3.133,P＜0.05).结论 鞘内重复注射吗啡后大鼠脊髓背角NMDA受体NR2A亚基表达上调,可能是吗啡耐受形成机制之一.     

骨形态发生蛋白及其受体在正常成年大鼠脊髓中的表达分布

目的:观察骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)及其受体在正常成年大鼠脊髓中的表达分布.方法::取正常成年大鼠脊髓并切片,运用免疫组织化学方法分别检测BMP2,4,7及其受体BMPR Ⅰa,BMPR Ⅰb,BMP Ⅱ的表达.结果:在正常成年大鼠脊髓的前角运动神经元、背角感觉神...     

成年大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元死亡方式的研究

目的探索成年大鼠坐骨神经切断损伤后脊髓前角运动神经元的死亡方式.方法选择大鼠坐骨神经切断损伤模型,术后48 h、7 d、15 d、30 d动物经4%多聚甲醛常规灌注固定,取L4～L6脊髓节段,TUNEL染色和电镜观察.结果坐骨神经切断后TUNEL染色和电镜观察均检测到脊髓前角运动神经元典型的凋亡形态学改变.结论周围神经切断后脊髓前角运动神经元出现凋亡,表明神经元的凋亡可能为成年大鼠周围神经损伤引发神经元死亡的重要病理过程.