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1.
目的 体外研究特异的小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌细胞A549 hnRNP B1 基因表达及生长的抑制作用. 方法设计和构建由H1启动子驱动产生的特异的hnRNP B1 siRNA 表达质粒,转染至A549细胞,荧光定量PCR法及Western blot检测hnRNP B1基因的表达,MTT法检测该表达质粒转染后对A549细胞生长的影响.结果 针对hnRNP B1 基因构建的重组质粒具有明显的干扰效果,受特异hnRNP B1 siRNA 干扰的A549细胞hnRNP B1 mRNA及蛋白表达下调,细胞生长受到抑制.结论 应用RNA干扰技术可阻止hnRNP B1基因的表达,有望成为肿瘤基因治疗新的研究方向. 相似文献
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hnRNP B1 siRNA对肺癌组织hnRNP B1表达干扰效果的体内研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 在体内实验中观察所构建的核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)特异性的siRNA真核细胞表达载体对肺癌组织hnRNP B1表达的干扰作用.方法 选取转染本课题组已构建并经体外实验证实有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体(重组质粒A和B)的人肺腺癌细胞株A549,将其接种于BALB/C nu/nu裸鼠右前腋下,构建肺癌动物模型.分别应用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测接种40、60 d时肿瘤组织中的hnRNP B1 mRNA和蛋白质表达水平.结果 hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体在体内表达40 d时均能较稳定而明显地抑制肿瘤组织中hnRNP B1 mRNA的表达,免疫组织化学从蛋白表达方面也予以证实,而且重组质粒A和B两组间的表达的差异无统计学意义.但是随着时间的延长(接种60 d时),siRNA的干扰效果会逐渐减弱,与未转染A549细胞比较无明显差异.结论 hnRNP B1特异性的siRNA在体内可以稳定的表达,并且能特异、高效地抑制肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因的表达,有望成为肺癌基因治疗的合理策略之一. 相似文献
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hnRNP B1 siRNA对肺腺癌细胞A549 p53表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)B1调节肺腺癌细胞A549抑癌基因p53表达的作用.方法 采用前期研究已构建并通过体外实验证实具有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的小干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体(重组质粒A和D)转染的人肺腺癌细胞株A549作为实验组,对照组为转染空质粒的A549细胞和未转染任何质粒的A549细胞.各组细胞均用10 μmol/L顺铂作用24 h收集细胞.实时荧光定量RT-PCR检测p53 mRNA的表达,Western blot检测P53及磷酸化P53蛋白表达的变化.结果 各组细胞p53 mRNA和蛋白表达量无明显差异,说明hnRNP B1特异性siRNA对A549细胞p53基因mRNA和蛋白表达无影响.转染hnRNP B1 siRNA细胞磷酸化P53蛋白表达率分别为0.87±0.06、0.75±0.06,与空质粒转染组(0.30±0.08) 和未转染组(0.21±0.04)相比明显增高(P<0.01).结论 hnRNP B1 siRNA可上调肺腺癌细胞A549 P53活性,参与肺癌的发生发展. 相似文献
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非小细胞肺癌组织中hnRNP B1和CD44的联合表达及其与预后的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)和CD44在非小细胞肺癌组织中的联合表达及其与预后的关系.方法 应用免疫组织化学的方法检测88例非小细胞肺癌组织中hnRNP B1和CD44表达,分析hnRNP B1和CD44的联合表达与肺癌预后的关系.结果 非小细胞肺癌组织中hnRNP B1和CD44的高表达率分别为68.18%和52.27%.hnRNP B1高表达且CD44低表达组,平均生存时间最高[(59.607±4.092)月];hnRNP B1低表达且CD44高表达组,平均生存时间最低[(21.357±3.545)月],差异具有统计学意义(P<0.05).结论 hnRNP B1与CD44联合检测对判断非小细胞肺癌的预后有一定临床意义. 相似文献
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目的 探讨特异性小分子干扰(small interference,siRNA)抑制肺癌A549细胞核内不均一核糖蛋白B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPB1)基因的表达后,对A549细胞增殖的影响. 方法构建hnRNPB1特异性的siRNA真核细胞表达载体并转染人肺癌细胞株A549,观察重组载体分别在第1、4及6周对A549细胞hnRNPB1基因的干扰效果以及对肺癌细胞周期及凋亡的影响.结果 特异性siRNA真核表达可显著抑制肺癌细胞hnRNPB1基因的表达,使hnRNPB1 mRNA的表达减少46%~73%,蛋白表达减少77.69%~83.04%,作用时间至少可维持克隆形成后4周,同时,hnRNPB1基因表达下调抑制了A549细胞在体外的增殖,促进了肺癌细胞的凋亡.结论 特异性siRNA能特异、高效地抑制肺癌细胞株A549细胞hnRNPB1基因的表达,RNAi可能为肺癌的基因治疗提供新策略. 相似文献
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CIK细胞对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响,并探讨机制。方法常规方法体外诱导生成CIK细胞,CIK细胞为效应细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,比较观察人肺癌细胞A549的凋亡情况。结果电镜法观察CIK细胞能诱导人肺癌细胞A549出现凋亡的超微结构变化,annexinV/PI流式细胞分析法检测早期凋亡率发现CIK实验组明显高于对照组。结论体外培养的CIK细胞可明显诱导人肺癌细胞A549凋亡。 相似文献
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抗hnRNP B1单克隆抗体的制备与鉴定 总被引:5,自引:2,他引:3
目的 建立分泌抗不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hn RNP) B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行免疫学鉴定。方法 用人工合成的19肽hn RNP B1作为免疫原,采用皮下多点注射及腹腔注射方法免疫BAL B/ c小鼠,取其脾细胞与SP2 / 0小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接EL ISA法筛选。结果 获得稳定分泌抗hn RNP B1单克隆抗体的杂交瘤细胞2株。EL ISA法检测腹水效价为1∶1.8×10 5,免疫组织化学染色法显示该单克隆抗体特异性强。结论 成功构建hn RNP B1单克隆抗体抗体杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体对肺癌的诊断具有较好的特异性。 相似文献
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目的:观察NF-κB特异性抑制剂PDTC对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及星形细胞上调基因-1(AEG-1)表达的影响。方法:用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)的PDTC分别处理A549细胞,对照组不给PDTC。应用MTT法检测处理24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞术检测处理24h后细胞周期的变化,Ho-echst33342荧光染色检测处理24h后细胞的凋亡情况,RT-PCR和Westernblot检测处理24h后细胞AEG-1mRNA和蛋白的表达。结果:经PDTC处理的A549细胞增殖明显受抑,呈时间和浓度依赖性(F时间=531.981,F浓度=388.475,P<0.05);与对照组相比,PDTC处理24h后A549细胞G0/G1期细胞比例上升(P<0.05),细胞形态出现明显凋亡改变;随着PDTC浓度的增加,癌细胞内AEG-1mRNA和蛋白的表达水平降低(F=275.162、59.473,P<0.05)。结论:PDTC可抑制A549细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与PDTC抑制NF-κB、AEG-1的表达有关。 相似文献
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目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinases1,MAPK1)基因沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法 利用CRISPR/CAS9基因编辑技术构建MAPK1沉默细胞系,采用Real-time PCR和Western blot检测沉默MAPK1后mRNA和蛋白表达水平。将MAPK1沉默载体与空载体转染至肺癌A549细胞中,并分为MAPK1沉默组、空载体组和空白组。对各组的肺癌A549细胞进行培养,利用CCK-8实验检测细胞增殖能力;平板集落形成实验检测细胞集落形成能力;平板划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况以及Western blot实验检测MAPK1沉默后ERK/mTOR通路蛋白表达。结果 Real-time PCR和Western blot结果表明成功构建肺癌A549细胞MAPK1沉默细胞系。MAPK1沉默使肺癌A549细胞增殖能力减弱(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.05),细胞凋亡率增加且细胞周期被阻滞于S期(P<0.0... 相似文献
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目的:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部的常见癌症,严重危害人们的生命健康。核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)是一种RNA结合蛋白,可调控多种基因的表达,参与多种癌症的发生和发展。本研究旨在探究hnRNP A2/B1对TSCC进展的表达及作用。方法:基于基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)相关芯片GSE146483、GSE85195分析hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中的差异表达情况,基于TSCC相关芯片GSE4676分析hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期的相关性。收集2021年7月至12月于湖南省肿瘤医院就诊的30例TSCC患者的癌及癌旁组织样本,采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法验证TSCC患者样本中hnRNP A2/B1的mR... 相似文献
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【目的】研究曲古抑菌素A (-TSA)抑制γ干扰素(IFN-γ)诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的分子机制。【方法】 采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点(GAS)、干扰素刺激应答元件(ISRE)和核因子-κB (NF-κB)的激活的影响。【结果】 TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明:TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1 的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。 相似文献
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目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少. 相似文献
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目的 观察奥沙利铂对肺腺癌细胞系A5 4 9的药物敏感性和诱导细胞凋亡作用。方法 将不同浓度的奥沙利铂与A5 4 9作用 2 4、36、4 8h ,用MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 奥沙利铂对A5 4 9的细胞生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大。 12 .5、2 5、5 0、10 0 μg/ml奥沙利铂对A5 4 9作用 2 4h ,细胞凋亡率分别为 35 %、13.6 %、2 .6 %、1.4 %。结论 奥沙利铂对A5 4 9细胞有生长抑制作用 ,呈剂量依赖性和时间依赖性 ;能引起细胞凋亡 ,细胞凋亡率呈剂量依赖性 ,与细胞生长抑制率呈正相关关系 (P <0 .0 1)。 相似文献
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目的 探讨低氧诱导入肺腺癌细胞株A519发生G0/G1期细胞周期阻滞的分子机制。方法 将培养的细胞分为对照组、低氧21h组低氧48h组。流式细胞仪检测细胞周期分布及p27蛋白表达,免疫细胞化学与原位杂交技术检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α
)蛋白表达及p27mRNA转录水平。结果①低氧21h组与18h组G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P<0.05);②HIF-1α蛋白在对照组有少量表达,随着低氧时间的延长,其表达增加(P<0.01);p27mRNA转录水平及p27蛋白表达均随低氧时间的延长而增高(均P<0.01);③低氧组HIF-1α表达与p27蛋白表达存在显著相关(r=0.958,P<0.01);低氧组p27蛋白表达与G0/G1期阻滞呈现著正相关(r=0.867,P<0.01);低氧组HIF-1α表达与p27mRNA转录呈显著相关(r=0.695,P<0.01)。结论 低氧能使人肺腺癌细胞株A549发生G0/G1期阻滞,HIF-1α对p27转录和表达的调控在其中可能起重要作用。 相似文献
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目的:探讨褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:分别将不同浓度褪黑素(100、300、500、7001、000μmol/L)及顺铂(2.55、、10μg/mL)联合与肺腺癌A549细胞共培养48 h,MTT法检测细胞抑制率。结果:不同浓度顺铂(2.5、5、10μg/mL)与500μmol/L的褪黑素联合使用对肺腺癌细胞生长抑制率([71.25±5.01)%(、86.37±7.10)%(、97.63±8.65)%)]明显高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:褪黑素和顺铂均可抑制肺腺癌A549细胞增殖,二者联合可协同抑制肿瘤细胞增殖。 相似文献