当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察当归水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞( A375)与角质形成细胞(HaCaT)共培养模型黑素合成的影响.方法:分别培养A375细胞与HaCaT细胞,A375细胞与HaCaT细胞以1∶2的比例接种于培养板后加入MEM培养基培养24 h.用MEM将当归提取物制备成0.1 ～2g·L-15个质量浓度,细胞给药作用48 h,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给各组A375细胞与HaCaT细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与阴性对照组相比,2,1,0.5 g·L-1当归提取物对共培养细胞的增殖有显著促进作用(P＜0.01);2,1,0.5,0.25 g·L-1当归提取物对黑素合成有显著的抑制作用(P ＜0.05或P＜0.01),呈现浓度依赖性的抑制作用趋势;当归提取物各浓度组对酪氨酸酶活性均有显著抑制作用,2,1 g·L-1组的抑制作用弱于熊果苷组(P＜0.01),0.5,0.25,0.125 g·L-1组与熊果苷组作用相当.结论:当归水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和HaCaT细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用当归治疗黄褐斑提供了实验依据.     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

宣肺汤对小鼠B16黑素瘤细胞代谢的影响

目的：观察宣肺汤对：B16黑素瘤细胞的作用,探讨其关白作用的机理及安全性。方法：测定宣肺汤对体外培养的B16黑素瘤细胞细胞活力、酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响,并与熊果苷作对照比较。结果：25、50、100μg／ml宣肺汤对黑素瘤细胞的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的抑制作用,并呈剂量依赖性,且优于同浓度熊果苷,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论：宣肺汤有较强的抑制黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素生成的作用,同时对黑素瘤细胞的细胞毒性较低,是较为安全有效的美白药物。     

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响。方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现。     

加味七白膏对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成影响的实验研究

目的 研究加味七白膏的美白作用机理及对酪氨酸酶活性、黑素合成的影响.方法 体外培养黑素瘤细胞,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,490nm比色法测定黑素含量.结果 中药水煎液对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,或P<0.01).结论 加味七白膏美白作用机理之一可能为通过抑制酪氨酸酶活性达到减少黑素合成的目的 而起到美白作用.     

马钱苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：探讨马钱苷对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养模型黑素合成的影响。方法：将A375细胞和Hacat细胞构建共培养模型,以不同浓度马钱苷进行干预,通过MTY法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定共培养模型的细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果：与阴性对照组相比,马钱苷10-mol／L、1016moL／L和10-7mol／L组对共培养细胞增殖率无显著性差异（P〉0．05）。马钱苷10-mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成及酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）。与阳性对照组相比,马钱苷10。moL／L组对共培养模型酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）,马钱苷10山mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成无显著差异（P〉0．05）。结论：马钱苷可能通过抑制酪氨酸酶活性减少共培养模型黑素合成。     

刺蒺藜在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的:探讨刺蒺藜在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法:采用MTT法测定刺蒺藜对人表皮共培养细胞活力的影响,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,490 nm比色法测定黑素含量。结果:0.1 mg/ml、0.2 mg/ml和0.5 mg/ml刺蒺藜对于人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用,0.2 mg/ml及0.5 mg/ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异(P0.01)。结论:刺蒺藜对于人表皮共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

不同纯度高良姜素对A375-HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素作用于共培养模型。采用MTT比色法检测细胞增殖,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,ELISA法检测HaCaT细胞因子干细胞生长因子(SCF)、内皮素(ET)-1的表达。结果 A375-HaCaT共培养模型中的A375细胞生长良好,0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素对共培养体系中的A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均具有上调作用。各纯度高良姜素浓度≥0.5μg/mL时,能够提高HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平,且纯度70%的高良姜素作用强度优于90%的高良姜素。结论高良姜素能显著促进A375-HaCaT共培养模型中A375的细胞增殖及黑素合成,其作用机制可能与高良姜素上调HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平有关。     

旱金莲提取物祛斑作用的实验研究

为研究旱金莲提取物对黑素瘤B16细胞的作用，建立鼠B16黑素瘤细胞培养体系，在添加旱金莲提取物后，测定黑素瘤细胞活力、酪氨酸酶活性以及黑素含量的变化，并与氢醌的实验结果进行比较。结果显示旱金莲提取物抑制人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成，具有药物浓度依赖性关系，对黑素细胞的活力影响较小。提示旱金莲提取物具有抑制黑素合成的功效，可作为美白剂进一步开发研究。     

养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株黑素合成和酪氨酸酶的影响

 目的：研究养颜青娥丸对小鼠B-16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成的影响及对细胞内酪氨酸酶的影响。 方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定养颜青娥丸对细胞增殖的影响；酶学方法研究养颜青娥丸对酪氨酸酶活性的作用；470 nm比色法测定合成黑素含量A值。结果：研究发现养颜青娥丸对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用，对合成黑素含量有降低作用；组方单味药中杜仲、沙苑子、制首乌对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有抑制作用，对合成黑素含量有降低作用；补骨脂、核桃肉对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性有促进作用，对合成黑素含量有增加作用。结论：养颜青娥丸对黄褐斑可能有一定的治疗作用，但治疗机制不能单纯用生化学、酶学改变来解释。     

验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的 研究验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗黄褐斑的作用机制.方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定验方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,475nm比色法测定验方对黑素含量的影响.结果验方祛斑汤对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖,降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用.结论该方能抑制黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一.     

六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的：研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法：采用MTT法测定细胞增殖情况；NaOH裂解法测定黑素合成；Takahashi法测定酪氨酶含量。结果：六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用，能使细胞数明显减少（P＜0．05），并能使黑素合成显著下降（P＜0．01），使酪氨酸酶活性逐渐减弱（P＜0．01）。结论：六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性，这可能是临床应有六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制。     

消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素合成的影响

目的观察消白合剂对人A375黑素瘤细胞生长、酪氨酸酶活性及黑素含量的影响。方法设消白合剂水提液体0．01、0．1、1、10g／L浓度实验组和空白对照组,体外观察对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶的活性以及黑素含量的调节作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定消白合剂对细胞增殖的影响,酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法（490nm）测定对黑素含量的影响。结果消白合剂在0．01～0．1g／L浓度范围内对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成有促进作用,而随着浓度的继续增高反而起抑制作用。结论消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素的合成具有双向调节作用,临床运用时应该考虑到药物的量的优化。     

马钱苷调节UVB诱导的表皮黑素单位黑素生成的实验研究

目的:探讨不同浓度马钱苷对中波紫外线(UVB)诱导该模型中黑素生成及其作用的影响。方法:常规体外共培养人黑色素瘤A375、人皮肤角质形成细胞(HaCaT),以UVB20 m J/cm~2照射后加含马钱苷的培养液作用24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;采用多巴氧化法研究酪氨酸酶活性的变化;比色法测定黑素含量,免疫印迹法测定P38通路蛋白表达。结果:马钱苷0.01μm/L可抑制UVB诱导的表皮黑素单位中酪氨酸酶活性增高,减少黑素生成,其机制可能是通过抑制P38蛋白表达减弱信号通路作用,抑制酪氨酸酶活性而实现的。结论:高浓度马钱苷可明显抑制P38MAPK通路,进而抑制酪氨酸酶活性和黑素生成。     

酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及c-KIT、TRP-2蛋白表达的促进作用

目的:研究酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞干细胞因子受体(c-KIT)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响,探讨其影响B16黑素瘤细胞生物学活性的分子机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫组化法检测c-KIT和TRP-2蛋白的表达.结果:浓度为25μg/ml的酪醇作用后,B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成能力均增强(P<0.05),c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加9.50%(P<0.05)和9.16%(P<0.01);浓度为12.5μg/ml的胡椒碱对B16黑素瘤细胞增殖(P<0.05)、酪氨酸酶活性(P<0.01)、黑素合成(P<0.05)均有促进作用,c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加8.81%和10.58%(P<0.05).结论:酪醇和胡椒碱均能促进小鼠B16黑素瘤细胞的黑素合成,胡椒碱具有促进细胞增殖作用,其部分机制可能是通过上调酪氨酸酶活性和c-KIT、TRP-2蛋白表达而发挥作用.     

复色2号方对鼠黑素瘤B16细胞酪氨酸酶的影响

目的:探讨复色2号方治疗白癜风的分子学作用机制。方法:采用MTT法测定复色2号方对B16细胞增值的影响,在酶标仪下测定并记录B16细胞增殖情况;采用酪氨酸酶多巴速率氧化法测定复色2号方对酪氨酸酶活性的影响;采用NaOH裂解法测定B16细胞黑素含量。结果:复色2号方药物浓度在1～1000g/L对黑素瘤B16细胞增殖无统计学意义(P0.05),但对酪氨酸酶活性和黑素合成有统计学意义(P0.05),呈浓度依赖性。结论:复色2号方对黑素瘤B16细胞增殖无影响,但对酪氨酸酶活性和黑素合成有较强的剂量相关性促进作用,可以达到治疗白癜风的目的。     

六味地黄丸对体外培养黑素细胞的抑制作用

目的 :研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法 :采用 MTT法测定细胞增殖情况 ;Na OH裂解法测定黑素合成 ;Takahashi法测定酪氨酸酶含量。结果 :六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用 ,能使细胞数明显减少 (P<0 .0 5 ) ,并能使黑素合成显著下降 (P<0 .0 1) ,使酪氨酸酶活性逐渐减弱 (P<0 .0 1)。结论 :六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性 ,这可能是临床应用六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制     

山茱萸提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型中TYR及其相关蛋白mRNA表达的影响

目的:研究山茱萸提取物对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞HaCaT共培养模型酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)mRNA表达的影响。方法:以1∶2的比例构建的A375细胞与HaCat细胞共培养模型,将质量浓度为1.0,0.5 g·L-1的山茱萸提取物作用48 h,RT-PCR法检测药物对共培养模型中A375细胞TYR,TRP-1和TRP-2 mRNA表达。结果:与阴性对照组相比,山茱萸提取物1.0,0.5 g·L-1组TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达量显著下调(P<0.01),mRNA下调率分别为36.07%,62.34%,44.69%和24.10%,53.00%,16.11%。结论:山茱萸提取物可能通过下调TYR,TRP-1和TRP-2 mRNA的表达而降低人黑素瘤细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。     

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响.方法 采用MTT 法测定不同浓度的复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析.结果 复色1 号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P＞0.05),0.05～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P＜0.05),呈现一定的抑制作用;复色1 号方在0.001～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A 值均有显著性差异(P＜0.05),呈剂量依赖性激活作用.在0.001～ 0.01g/l 浓度范围内,复色1 号方的最佳激活浓度为0.01g/l.结论 复色1 号方没有促进小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16 黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用.     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。