黄芪多糖对动脉粥样硬化内皮细胞的保护作用

背景内皮细胞发生结构损伤和功能障碍的主要特征为内皮细胞活性降低或释放的一氧化氮减少,内皮缩血管肽产生增加.目的探讨黄芪多糖抗动脉粥样硬化内皮细胞损伤的作用,并以卡托普利做标准对照.设计随机对照观察.单位湖北中医学院生理教研室,武汉大学医学院病理生理教研室,广东省荷塘医院外科,武汉大学人民医院内分泌科.材料实验于2001-07/2002-11在湖北中医学院机能实验室和武汉大学医学院病理生理教研室完成.选择由武汉大学医学院实验动物中心提供的健康国产雄性家兔40只,体质量2.4～3.0 kg,随机分为空白组、模型对照组、黄芪多糖组、卡托普利组(标准对照),10只/组.黄芪多糖从山西产黄芪根中提取,制成注射用粉剂,用前以生理盐水新鲜配制.方法空白组给予正常颗料饲料,其余3组从实验第1天起给予高脂饲料(80%基础饲料中加入15%蛋黄粉、0.5%胆固醇和5%猪油),牛血清1 mL/kg从耳缘静脉注射1次,用高脂饲料加免疫损伤建立兔动脉粥样硬化内皮细胞损伤模型.黄芪多糖组每天腹腔注射黄芪多糖500 mg/kg;卡托普利组给予5m/kg卡托普利,相当于临床剂量的5倍;空白组、模型对照组给予等体积的生理盐水4 mL/kg,共给药50 d.末次给药后24 h,从上腔静脉取血后处死动物,腹主动脉形态学变化光镜下观察,并测定家兔血清中总胆固醇、三酰甘油、一氧化氮、内皮缩血管肽、超氧化物歧化酶、丙二醛、总抗氧化活力的变化.主要观察指标①腹主动脉形态学变化.②血清中各项相关指标变化检测.结果40只家兔全部纳入实验.①与模型对照组比较,黄芪多糖组和卡托普利组血清中总胆固醇、三酰甘油含量明显降低[(9.33±1.13),(6.60±0.61),(7.09±0.74)mmol/L,P＜0.05;(3.05±0.44),(1.26±0.16),(2.17±0.46)mmol/L,P＜0.01,P＜0.05];且丙二醛和内皮缩血管肽含量也明显降低[(9.98±1.11),(7.10±0.68),(9.46±1.27)μmol/L,P＜0.01;(741.90±34.98),(632.62±26.95),(600.74±32.59)ng/L,P＜0.01].②与模型对照组比较,黄芪多糖组和卡托普利组血清中一氧化氮、超氧化物歧化酶含量显著提高[(11.04±1.68),(19.96±6.05),(18.35±3.52)μmol/L,P＜0.01,P＜0.05;(159.32±5.26),(207.54±16.98),(197.59±28.41)NU/mL,P＜0.01,P＜0.05];同时总抗氧化活力升高[(23.8±3.5),(34.7±5.6),(30.7±6.8)%,P＜0.01,P＜0.05].③黄芪多糖组无论是血清中总胆固醇、三酰甘油及丙二醛含量的降低或一氧化氮、超氧化物歧化酶及总抗氧化活力的升高均优于卡托普利组(P＜0.01).④腹主动脉形态学变化观察结果,可见空白组腹主动脉内膜表面光滑,内皮细胞连续,细胞间隙较小,内皮细胞无水肿,形态正常;模型对照组腹主动脉内膜增厚、隆起,血管内皮细胞可见部分脱落,细胞间隙增宽,内皮细胞有水肿.中膜层明显增厚,平滑肌细胞增生明显,且迁入内皮下,可见泡沫细胞;黄芪多糖组腹主动脉内膜表面基本光滑,细胞连接较紧密,平滑肌细胞增生不活跃,泡沫细胞少见;卡托普利组腹主动脉内膜表面基本光滑,内皮细胞无明显脱落,无平滑肌细胞迁入,平滑肌细胞形态基本正常,排列规则.结论黄芪多糖可明显降低血清中总胆固醇、三酰甘油、丙二醛和内皮缩血管肽的含量,从而减轻内皮缩血管肽对血管的损伤作用;同时升高一氧化氮、超氧化物歧化酶及总抗氧化活力,应用黄芪多糖家兔光镜下可见腹主动脉内膜表面基本光滑,内皮细胞形态基本完好,提示其具有较好的对抗氧化损伤和保护血管内皮细胞的功能.     

黄芪对高葡萄糖、游离脂肪酸培养的人血管内皮细胞—氧化氮含量的影响

目的：探讨高葡萄糖和非酯化脂肪酸(free fatty acids，FFA)对人血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)产生的一氧化氮水平的影响和黄芪的干预作用，以及黄芪对糖尿病肾病治疗作用的可能机制。方法：以体外培养的人VEC为对象。观察以5．5mmol／L葡萄糖(对照组)，10，20和30mmol／L葡萄糖，0．125，0．250和0．500mmol／L。非酯化脂肪酸、高浓度葡萄糖+高浓度油酸和／或棕榈酸，2，20和200g／L,黄芪，低、中、高质量浓度黄芪+高浓度葡萄糖，高浓度油酸和／或棕榈酸+低、中、高质量浓度黄芪，高浓度葡萄糖+高浓度油酸和／或棕榈酸+低、中、高质量浓度黄芪培养液培养后，VEC上清液中一氧化氮的含量。结果：VEC经含30mmol／L,葡萄糖及30mmol／L,葡萄糖+O．500mmol／L棕榈酸培养后一氧化氮水平明显升高，与对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。经不同浓度黄芪处理后，一氧化氮升高组人VEC一氧化氮水平均有下降，以高质量浓度黄芪(200g／L)试验组最明显。相反，VEC在0．500mmol／L油酸、0．500mmol／L棕榈酸+0．500mmol／L油酸和30mmol／L葡萄糖+0．500mmol／L油酸+0．500mmol／L棕榈酸条件下培养后，一氧化氮水平明显下降，与对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。经不同浓度黄芪处理后，一氧化氮下降组人VEC一氧化氮水平有不同程度升高，但与对照组相比，差异仍有显著性意义。结论：黄芪可在一定程度上调节高葡萄糖和非酯化脂肪酸引起的一氧化氮水平的异常变化，对VEC的损伤有一定程度的改善作用。这可能是黄芪对糖尿病肾病早晚期病理改变发挥作用的一个机制。     

黄芪多糖对星形胶质细胞培养液中自由基系统损伤保护作用的时间依赖性

目的：观察具有抗炎、凋节免疫、延缓神经元变性等药理作用的黄芪多糖对胶质细胞培养液中谷胱甘肽和丙二醛含量及谷胱甘肽过氧化物酶的活性、超氧化物歧化酶活力的影响，探讨黄芪多糖对左旋多巴致胶质细胞培养液中自由基系统动态平衡损害的保护作用，分析该种作用与时间的关系。 方法：实验于2003—12／2004-9在泰山医学院基础研究所完成。①选用出生2d的SD大鼠10只，雌雄不拘。②按照McCarthy和de Velli的方法进行星形胶质细胞的原代培养，胶质细胞培养液建立左旋多巴损伤模型，实验分为3组（每6孔细胞液一组）：正常对照组（正常细胞培养，加入等数量的培养基，不加任何药物），左旋多巴组（加入100μmol／L左旋多巴），黄芪多糖＋左旋多巴[加入黄芪多糖（由合肥恒星药物研究所提供）20mg／L和左旋多巴100μmol／L]。分别在培养424,48和72h后取处理后的含胶质细胞培养液。③采用比色定量法测谷胱甘肽含量，比色法测谷胱甘肽过氧化物酶活性，黄瞟呤氧化酶法测超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量。④计量资料差异比较采用方差分析。 结果：①谷胱甘肽含量及谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力：培养4h后各组差异不明显。培养24，48和72h后，左旋多巴组明显低于空白对照组（P〈0.05-0．01）；黄芪多糖＋左旋多巴组低于空白对照组，但差异不明显（P〉0．05），明显高于左旋多巴组（P〈0．05）。②丙二醛含量：培养4h后各组差异不明显。培养24，48和72h后，左旋多巴组明显高于空白对照组（P〈0．05-0．01）；黄芪多糖＋左旋多巴组高于空白对照组，但差异不明显（P〉0．05），明显低于左旋多巴组（P〈0．05）。 结论：左旋多巴自身氧化产生大量的自由基，促进帕金森病发展，黄芪多糖可降低左旋多巴对神经元的毒性作用，作用有时问依赖性。     

黄芪多糖对拟缺血损伤内皮祖细胞保护作用的实验研究

目的通过动物实验,评价黄芪多糖对拟缺血内皮祖细胞的保护作用。方法采用凝血酶损伤内皮祖细胞复制大鼠部分缺血损伤模型,不同浓度黄芪多糖预干预内皮祖细胞24h、凝血酶损伤8h后,用四甲基偶氮唑盐染色法检测细胞活性,蛋白印迹法和聚合酶链反应检测内皮祖细胞在蛋白及基因水平表达的变化。结果凝血酶损伤后,与正常对照组相比,凝血酶损伤组细胞活性明显下降,Ang-1及其受体表达下降（P〈0.05）;与凝血酶损伤组比较,黄芪多糖各组细胞活性上升, Ang-1及其受体表达上调（P〈0.01）;黄芪多糖各剂量组间呈剂量依赖。结论凝血酶可诱导内皮祖细胞损伤,黄芪多糖可抑制凝血酶所致体外培养的EPCs的损伤,对内皮祖细胞有保护作用,其机制与增加Ang-1及其受体表达有关,为缺血性疾病提供了新的治疗思路。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠肾小管的保护作用

目的:研究黄芪多糖(APS)对实验性糖尿病(DM)大鼠肾脏的保护作用及机制.方法:选取30只链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠,随机分为DM组、APS低剂量组和APS高剂量组各10只,另选择10只大鼠作为正常组.每组分别给药,每天用药1次,连续用药42d.采用简易代谢笼法测各组大鼠24h尿量变化,透射电镜观察肾远端小管和集合管主细胞超微结构的变化.结果:DM组、APS低剂量组、APS高剂量组大鼠尿量均明显高于正常组(P<0.05),APS低剂量组、APS高剂量组大鼠尿量明显高于DM组(P<0.05).电镜显示,DM组大鼠肾远端小管和集合管主细胞的超微结构与正常对照组比较呈现明显退行性改变,而长期应用APS则可显著改善其超微结构的病变.结论:长期应用APS对DM大鼠肾小管的损伤具有良好保护作用,可明显增加DM大鼠的尿量.     

黄芪多糖与Ⅰ型胶原协同促血管新生的细胞学研究

目的观察黄芪多糖载入Ⅰ型胶原促血管新生作用,探讨黄芪多糖与Ⅰ型胶原的协同作用。方法通过人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖实验测定不同浓度黄芪多糖和胶原对细胞的增殖作用,并测量细胞迁移率;Western Blot方法验证血管生成素-1（Ang-1）、整合素蛋白αvβ3、血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果黄芪多糖浓度20μg/mL时促进HU-VEC生长作用最明显,此后随着浓度的升高,促生长的作用逐渐降低,但均显著高于对照组（P〈0.01）;而黄芪和胶原合用,对细胞的促生长有协同作用,显著高于20μg/mL胶原组（P〈0.05）。20μg/mL黄芪多糖＋20μg/mL胶原时HUVEC迁移能力最强;Western Blot结果提示Ang-1、VEGF和integrinαvβ3的表达随着黄芪和胶原浓度的增加而升高;20μg/mL黄芪多糖＋胶原组达到最高。结论黄芪多糖能促进HUVEC的增殖和迁移,并上调Ang-1、VEGF和Integrinαvβ3的表达,具有促进血管新生的作用,且黄芪多糖和胶原具有协同作用。     

黄芪多糖与Ⅰ型胶原协同促血管新生的细胞学研究

目的观察黄芪多糖载入Ⅰ型胶原促血管新生作用,探讨黄芪多糖与Ⅰ型胶原的协同作用。方法通过人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖实验测定不同浓度黄芪多糖和胶原对细胞的增殖作用,并测量细胞迁移率;Western Blot方法验证血管生成素-1(Ang-1)、整合素蛋白αvβ3、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果黄芪多糖浓度20μg/mL时促进HU-VEC生长作用最明显,此后随着浓度的升高,促生长的作用逐渐降低,但均显著高于对照组(P0.01);而黄芪和胶原合用,对细胞的促生长有协同作用,显著高于20μg/mL胶原组(P0.05)。20μg/mL黄芪多糖+20μg/mL胶原时HUVEC迁移能力最强;Western Blot结果提示Ang-1、VEGF和integrinαvβ3的表达随着黄芪和胶原浓度的增加而升高;20μg/mL黄芪多糖+胶原组达到最高。结论黄芪多糖能促进HUVEC的增殖和迁移,并上调Ang-1、VEGF和Integrinαvβ3的表达,具有促进血管新生的作用,且黄芪多糖和胶原具有协同作用。     

红景天苷对内皮细胞动脉粥样硬化损伤的保护作用研究

目的:研究红景天苷(Salidroside,Sal)对内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:应用氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的内皮细胞损伤模型,用自动生化仪测定细胞培养基乳酸脱氢酶(LDH)水平,用MTT法和化学方法分别观察Sal对血管内皮细胞增殖活性及细胞内一氧化氮(NO)水平和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)活性的影响。结果:Sal可有效降培养基乳酸脱氢酶(LDH)水平(P0.05),还能明显提高血管内皮细胞的增殖活性(P0.01),提高血管内皮细胞内NO水平(P0.01),提高e NOS的活性(P0.05)。结论:Sal具有抗OX-LDL诱导的AS内皮损伤作用。     

黄芪多糖对高脂血症大鼠血脂的调节

目的：观察黄芪多糖对高脂饲料诱导的高脂血症大鼠血脂水平，肝脏脂质沉积以及机体抗氧化能力的影响，与疗效确切的降脂药非诺贝特作用结果进行比较。 方法：实验于2004-9／2004-12空军总医院实验动物中心完成。①选用健康雄性Wistar大鼠60只。按体质量随机分为6组，每组10只：正常对照组（饲喂普通饲料），高脂模型组[饲喂高脂饲料（主要成分：普通饲料0．788、猪油0．1、蛋黄粉0．1、胆固醇0．01和胆酸盐0．002），黄芪多糖高、中、低剂量组[分别将黄芪多糖（颗粒剂型，国食健字G20040383，生产批号20040301，由解放军总医院科技开发中心提供）以16．68，8．34．3．52g／ks的剂量加入高脂饲料进行喂养]，非诺贝特组[将非诺贝特胶囊（由法国利博福尼制药公司制造，200mg／粒。批号78879）以0．067g/kg的剂量加入高脂饲料进行喂养]。6组动物均连续喂养12周，每周测体质量。②喂养12周后，取肝组织称质量，计算肝指数（肝指数：肝质量／体质量&;#215;100％）。用酶法测定血清和肝组织总胆固醇、三酰甘油水平和含量；用免疫比浊法测定血清高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平；用硫代巴比妥酸反应测定血清和肝组织丙二醛水平和含量；用微弱化学发光方法测定血清和肝组织超氧化物歧化酶活力；用速率法测定血清和肝组织谷耽甘肽过氧化物酶活力。③计量资料差异比较采用方差分析，两两比较采用LSD检验。 结果：大鼠60只均进入结果分析。①非诺贝特组，黄芪多糖高、中、低剂量组大鼠血清总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇和非诺贝特组三酰甘油均明显低于模型组（P〈0．05）。而高密度脂蛋白胆固醇均明显低于正常对照组（P〈0．05），但与模型组比较，差异不明显（P〉0．05）。非诺贝特组，黄芪多糖高、中、低剂量组体质量增长值低于高脂模型组，但差异不明显（P〉0．05）。②黄芪多糖高、中、低剂量组大鼠肝脏总胆固醇和黄芪多糖高剂量组的三酰甘油含量明显低于模型组（P〈0．01）；黄芪多糖中、低剂量组大鼠肝脏三酰甘油含量低于模型组，但差异不明显（P〉0．05）。黄芪多糖高、中剂量组肝指数明显高于正常对照组（P〈0．01，0．05），但明显低于模型组（P〈0．05）。非诺贝特组的肝脏总胆固醇明显低于模型组（P〈0．05），但三酰甘油含量和肝指数与模型组相近（P〉0．05）。③黄芪多糖高、中剂量组大鼠肝组织丙二醛含量明显低于模型组（P〈0．01，0．05），超氧化物歧化酶活力明显高于模型组（P〈0．05）。黄芪多糖低剂量组大鼠肝组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力与模型组相近。黄芪多糖各剂量组肝组织谷胱甘肽过氧化物酶活力与模型组差异不明显（P〉0．05）。非诺贝特组大鼠肝脏丙二醛含量，超氧化物歧化酶活力无显著变化（P〉0．05），但谷胱甘肽过氧化物酶活力明显低于模型组（P〈0．05）。④黄芪多糖高、中剂量组大鼠血清丙二醛水平明显低于模型组（P〈0．01），谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组（P〈0．01）；黄芪多糖低剂量组大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组（P〈0．05），丙二醛低于模型组，但差异不明显（P〉0．05）；而各组超氧化物歧化酶均与模型组相近（P〉0．05）。非诺贝特组大鼠血清丙二醛水平明显低于模型组，谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组（P〈0．01）。 结论：黄芪多糖可降低高脂血症大鼠的血脂，减少肝脏脂质沉积，提高肝脏和血液的抗氧化能力，减轻高脂饮食导致的氧化损伤。非诺贝特虽可降低血脂，但因促进脂质的肝脏代谢，而加重肝脏的损伤。     

糖尿病血管病变的预防性干预策略：对内皮细胞功能不全的认识与改善

糖尿病血管病变的发生与多种因素有关，其中重要的病理变化之一就是内皮细胞功能不全，而后又与胰岛素抵抗、血管收缩与舒张平衡失调、高脂血症、肝细胞生长因子的缺乏等相关联，故而在这些方面给予相应的治疗相信可以延缓或改善糖尿病血管病变的发生。现将该问题作一综述。     

维生素对动脉粥样硬化危险因素损伤血管内皮的保护作用

目的：探讨4种维生素联合应用，对动脉粥样硬化危险因素损伤血管内皮是否具有保护作用。方法：24只雄性家兔被随机分成3组。对照组喂普通饲料，模型组在普通饲料中加人胆固醇、猪油和甲硫氨酸，维生素组饲料同模型组，每天再另外灌胃给予维生素E、C、B6和叶酸，连续8周。第8周末，取血检测相关指标。结果：与对照组相比，模型组血脂(除HDL-C以外)、同型半胱氨酸和内皮素水平均显著升高(t=2．412，P&;lt;0．05；t=3．802—5．830，P&;lt;0，01)，血清一氧化氮虽有降低，但在两组间没有显著差异；HDL-C／LDL-c比值明显减少(1=6．622 P&;lt;0．01)。与模型组比较，维生素组血清总胆固醇、LDL-C．同型半胱氨酸和血浆内皮素水平均显著降低(t=2．514—2．726，P&;lt;0．05)，而血清一氧化氮显著升高，HDL-C／LDL-C比值也明显增加(t=4．128～5．076，P&;lt;0．01)。结论：维生素E、C、B6和叶酸联合运用，能够降低血中多种危险因子的水平，调节血中内皮素和一氧化氮的平衡，减少或阻断危险因素对内皮功能的损伤，对血管内皮有保护作用。     

银杏黄酮甙对人巨细胞病毒感染促进动脉粥样硬化发生和发展的保护作用

目的:探讨银杏黄酮甙对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在促进动脉粥样硬化发生和发展中的保护作用。 方法:本实验分为4组,分别为正常对照组,银杏黄酮甙组,HCMV感染组,HCMV感染+银杏黄酮甙组。用MTT比色法观察细胞增殖情况,采用硝酸还原酶法检测银杏黄酮甙对一氧化氮含量的影响。观察银杏黄酮甙对HCMV引起的离体培养的人脐静脉内皮细胞(hunlan umbilical vein endothelial cell,HUVEC304)增殖和分泌一氧化氮的影响。 结果:银杏黄酮甙促进HUVEC304增殖较正常对照组升高,银杏黄酮甙可以剂量依赖性地增强HUVEC304 MTT光吸收值,当加入1×10~(-5)～1×10~(-2)mol/L银杏黄酮甙时MTT光吸收值较对照组分别增加14％,16％,19％和51％(t=9.67～18.72,P<0.01),一氧化氮分泌量明显增加;HCMV感染的细胞增殖显著升高,MTT光吸收值较对照组增加91％(t=7.96,P<0.05),而一氧化氮分泌量显著降低44％(t=19.46,P<0.01);银杏黄酮甙可以剂量依赖性地抑制HCMV促进的HUVEC304增殖,当加入1×10~(-5)～1×10~(-2)mol/L银杏黄酮甙时MTT光吸收值较HCMV组分别降低5％(t=0.14,P>0.05),19％(t=26.75,P<0.05),29％(t=9.68,P<0.01)和33％(t=9.30,P<0.01),促进一氧化氮的分泌量升高57％(t=6.84,P<0.01)。 结论:银杏黄酮甙可抑     

构建脑血管内皮细胞紧密连接模型对脑血管疾病发生发展机制研究的意义

目的：电镜下观察人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞间紧密连接的形成，并建立脑血管内皮细胞紧密连接的模型，以期发现该模型的建立对发现脑血管病变早期发生及发展的意义。方法：培养ECV304细胞，在细胞生长接触到融合状态后，在透射电镜下观察细胞间紧密连接的形成情况。结果：透射电镜下可见到ECN304细胞间能够形成典型的紧密连接结构，以及内皮细胞所特有的W-P小体，吞饮小泡等结构。结论：ECV304细胞之间能够形成典型的紧密连接；可以利用ECV304细胞系建立研究脑血管内皮细胞间紧密连接的模型。     

黄芪多糖对力竭小鼠保护作用及运动能力的影响

许多研究表明,力竭运动可导致人或动物体内许多脏器中的自由基堆积[1,2],并将最终使组织细胞受到损伤[3,4]。中国传统中药材中存在许多有效成分可以清除机体产生的氧自由基[5],从而对机体起到保护作用,多糖类提取物就是其中之一[6]。黄芪多糖(Astraglaus polysaccharide,APS)是     

黄芪多糖对肢体缺血再灌注骨骼肌的保护作用

背景:前期研究表明,黄芪对缺血再灌注心肌细胞的凋亡和损伤皆有影响,其对于骨骼肌缺血再灌注是否有同样作用,国内外尚未见报道。目的:验证黄芪多糖对肢体缺血再灌注骨骼肌的保护作用。方法:取成年家兔按随机数字表法分为2组,建立兔肢体缺血再灌注损伤模型。在即将恢复血流灌注时,对照组及实验组分别自耳缘静脉注射生理盐水、黄芪多糖注射液。分别在缺血前、缺血后2h、再灌注后1,3h采集术侧股静脉血样。测定血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性。取上述各时相点兔胫前肌组织,测定骨骼肌组织湿/干质量比值并观察微细和超微结构变化。结果与结论:实验组再灌注后血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性明显低于同期对照组(P<0.01),骨骼肌组织湿/干质量比值低于同期对照组(P<0.05)。光镜及电镜观察结果示,实验组骨骼肌损伤程度轻于对照组。提示黄芪多糖能够缓解组织水肿,保护缺血再灌注骨骼肌。     

睾酮对动脉粥样硬化内皮功能的影响

目的：探讨睾酮在雄兔动脉粥样硬化模型中是否具有保护内皮细胞功能的作用。方法：实验于2003-10／2004-06在哈尔滨医科大学第一临床医学院动物实验中心完成。选择雄性哈尔滨大耳白兔45只，随机分为5组。分别为安慰剂组、丙酸睾酮0．25，2．5，12．5mg／（kg&;#183;d）组及假手术组，每组9只。安慰剂组去势并给安慰剂；丙酸睾酮0．25，2．5，12．5mg／（kg&;#183;d）组家兔去势并分别予丙酸睾酮0．25mg／（kg&;#183;d），2．5mg／（kg&;#183;d），12．5mg／（kg&;#183;d）肌肉注射。3个月后。采集动物血样。检测血中睾酮水平、血脂浓度、纤溶酶原激活物抑制物活性，一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ含量。麻醉后气栓法处死动物，分离主动脉，纵向剖开固定，计算斑块占总内膜面积的百分比。另外利用western blot方法比较各组家兔雄激素受体表达量的变化。结果：进入结果分析安慰剂组、丙酸睾酮0．25，2．5，12．5ms／（kg&;#183;d）组及假手术组家兔数量分别为8，8，7，7及7只。①安慰剂组血清睾酮水平、一氧化氮含量显著低于其他组（P〈0．05-0．01）。②安慰剂组纤溶酶原激活物抑制物活性、内皮素、血管紧张素Ⅱ含量及主动脉斑块面积百分比均显著高于其他组（P〈0．05-0．01）。接近生理浓度【0．25mg／（kg&;#183;d）】的外源性睾酮可抑制兔纤溶酶原激活物抑制物活性，剂量增至10倍【2．5mg／（kg&;#183;d）】作用反而减弱，剂量再次增大至50倍【1．25mg／（kg&;#183;d）】又抑制纤溶酶原激活物抑制物活性【（0．3344&;#177;0．0513，0．5051&;#177;0．0504，0．3742&;#177;0．1069）U／mL]。③各组家兔的主动脉雄激素受体表达量差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：在高脂饮食诱发的兔动脉硬化模型中，睾酮可以保护内皮细胞功能，从而减轻动脉粥样硬化的程度。但外源性睾酮的作用并未随着剂量的增加而成倍增加，而且并未发现各组雄激素受体表达量有不同，考虑这种作用差别的原因位于受体后。     

等长收缩运动对动脉粥样硬化兔血管内皮生长因子与一氧化氮的影响

目的探讨等长收缩运动（IE）对动脉粥样硬化兔血管内皮生长因子（VEGF）和一氧化氮（NO）的影响。 方法选取成年雄性新西兰白兔24只,制作IE训练模型后,按照随机数字表法分为对照组、高脂组和训练组进行2个阶段（6周+4周）的实验,每组8只。对照组采用普通饮食,其余两组采用高脂饲料喂养。训练组兔在第2阶段增加每次2min、每日3次、每周5d的IE训练。分别于实验前、实验第6周及第10周时对兔进行外周血VEGF、VEGF mRNA与NO检测,并于实验第10周时对兔主动脉血管壁进行动脉粥样硬化斑块检测。 结果实验前,各组VEGF、VEGF mRNA、NO含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。10周后,高脂组兔外周血VEGF含量高于训练组和对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。训练组和对照组各时间点兔外周血VEGF含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。高脂组兔实验10周后外周血VEGF含量高于实验前（P<0.05）。实验10周后,训练组和高脂组兔外周血VEGF mRNA含量均高于对照组（P<0.05）。3组兔实验10周后外周血VEGF mRNA含量均高于实验前和实验6周后（P<0.05）。实验6周后,训练组NO含量高于对照组（P<0.05）。实验10周后,高脂组NO含量高于对照组（P<0.05）。对照组、高脂组、训练组兔外周血NO含量在第6周和第10周时均高于实验前（P<0.05）。实验结束时,训练组兔有少量动脉粥样硬化斑块形成,高脂组兔动脉粥样硬化斑块最多,对照组兔无动脉粥样硬化斑块形成。 结论高脂饮食可以促进动脉粥样硬化形成,使VEGF、VEGF mRNA和NO含量显著增加,IE训练可有效减缓动脉粥样硬化进程,其具体机制尚待进一步研究。     

黄芪对高葡萄糖、游离脂肪酸培养的人血管内皮细胞一氧化氮含量的影响

目的:探讨高葡萄糖和非酯化脂肪酸(freefattyacids,FFA)对人血管内皮细胞(vascularendothelialcell,VEC)产生的一氧化氮水平的影响和黄芪的干预作用,以及黄芪对糖尿病肾病治疗作用的可能机制。方法:以体外培养的人VEC为对象,观察以5.5mmol/L葡萄糖(对照组),10,20和30mmol/L葡萄糖,0.125,0.250和0.500mmol/L非酯化脂肪酸、高浓度葡萄糖+高浓度油酸和/或棕榈酸,2,20和200g/L黄芪,低、中、高质量浓度黄芪+高浓度葡萄糖,高浓度油酸和/或棕榈酸+低、中、高质量浓度黄芪,高浓度葡萄糖+高浓度油酸和/或棕榈酸+低、中、高质量浓度黄芪培养液培养后,VEC上清液中一氧化氮的含量。结果:VEC经含30mmol/L葡萄糖及30mmol/L葡萄糖+0.500mmol/L棕榈酸培养后一氧化氮水平明显升高,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。经不同浓度黄芪处理后,一氧化氮升高组人VEC一氧化氮水平均有下降,以高质量浓度黄芪(200g/L)试验组最明显。相反,VEC在0.500mmol/L油酸、0.500mmol/L棕榈酸+0.500mmol/L油酸和30mmol/L葡萄糖+0.500mmol/L油酸+0.500mmol/L棕榈酸条件下培养后,一氧化氮水平明显下降,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。经不同浓度黄芪处理后,一氧化氮下降组人VEC一氧化氮水平有不同程度升高,但与对照组相比,差异仍     

缺氧对体外培养动脉内皮细胞中诱生型一氧化氮合酶表达和细胞形态的影响

目的：观察体外培养的动脉内皮细胞在缺氧条件下诱生型一氧化氮合酶的表达和细胞形态的变化情况。方法：实验于2004—09／11在哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室实验室完成。原代培养牛动脉内皮细胞，将培养的内皮细胞随机分为5组，即常氧组、缺氧0．5，1，2，3h组、每组切片选取12个400倍视野进行观察。诱生型一氧化氮合酶的表达采用免疫组织化学法测定。用计算机图文分析系统对各组切片内皮细胞诱生型一氧化氮合酶阳性表达的平均积分吸光度和缺氧后的细胞形态进行分析：结果：①缺氧1h，2h，3h组的平均积分吸光度显著高于常氧组[0．1008&;#177;0．019，0．1179&;#177;0．037，0．1964&;#177;0．023，0．0735&;#177;0．032（t=-10．364～2．133，P〈0．05-0．01）1。②缺氧后细胞的最大直径和最小直径均变小，核浆比例增大，细胞数量减少。结论：缺氧后动脉内皮细胞的生长数量和形态发生明显变化，使其屏障作用降低；同时诱生型一氧化氮合酶表达的增加提示诱生型一氧化氮合酶在缺氧后内皮细胞的损伤中发挥重要作用。