人血清HDL载脂蛋白A—I的分离纯化

用序列超速离心法从血清中分离高密度脂蛋白(HDL),经0.5％琼脂糖凝胶电泳显示为一条区带。HDL载脂蛋白(apoHDL)先经Sephadex G—200凝胶过滤柱层析,取峰Ⅱ中部洗脱液,再通过DE—52离子交换柱层析分离出载脂蛋白A—Ⅰ(apoA—Ⅰ),用0.1％SDS—PAGE证实为单一区带,分子量为28000道尔顿。     

一步密度梯度超速离心分离人血清VLDL、LDL、HDL_2、HDL_3和无脂血清及某些性质的研究

研究脂蛋白及载脂蛋白的结构、功能与代谢对高脂血症和动脉粥样硬化的发病机理的阐明有重要意义。研究此课题需要较大量的极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)及其亚类。从事这力面的科研工作者多年来都沿用Havel等建立的序列多次超速离心法,该法需90小时左右,样品量小,操作繁锁,并尚未将HDL_2和HDL_3分离。因此近十年来不少学者不断在寻找新的分离途径,以期缩短离心时间和提高分离效果。近十年来虽然国际上有不少作者,例如:Wilcox、Patsch、Redgrove、Foreman、Chuug和Chayman先     

血清淀粉样蛋白P与血浆脂蛋白作用机制的研究

目的探讨人血清中淀粉样蛋白P(sAP)与血浆脂蛋白中HDL、VLDL和LDL相互作用机制。方法①Sepharose4B(Pharmacia)亲和层析法提取人血清SAP，DEAE-Sepharose层析纯化。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与标准SAP(Sigma)检测。采用免疫探针生物素化试剂盒(Sigma)以1：10比例接合于生物素氨基己酸-N-羟基一硫琥珀酰亚胺酯。得到生物素一SAP。②VLDL、LDL、HDL用超速离心法分离。③以TMBZ底物试剂盒用固相平板测定法检测SAP与脂蛋白相互结合。结果①生理条件的Ca^2 浓度下，生物素一SAP以剂量依赖方式选择性地与I--IDL、VLDL结合。当SAP浓度分别达到1．5nM和2nM时，SAP与HDL、VLDL的结合达到半饱和，当SAP浓度达到4nM和16nM时，SAP与HDL、VLDL结合达到饱和。②SAP与HDL和VLDL的结合具有Ca^2 依赖性。③EUTA可影响SAP和HDL、VLDL结合。④无论有无Ca^2 和EDTA存在，未发现SAP和LDL间的结合。结论SAP与HDL和VLDL结合而不与LDL结合。     

血清脂蛋白胆固醇电泳法与传统法的比较

目的 :比较电泳法与传统法在测定血清脂蛋白胆固醇中的优缺点。方法 :电泳法用Helena电泳系统测定 4种脂蛋白胆固醇 ,用磷钨酸 镁沉淀法或直接法测定高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C) ,用F 公式计算低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)。结果 :电泳法可清楚地分离 4种脂蛋白区带 ,6 8份正常人标本中 ,仅 6例可见LP(a)区带 ,占 8.82 %。血清HDL C ,LP(a) C ,VLDL C及LDL C参考值分别为 :1.16～ 2 .19,0～ 0 .2 2 ,0 .0 7～ 0 .4 7及 1.86～ 3.4 6mmol·L-1。电泳法与沉淀法测定HDL C ,二者比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但用F 公式计算LDL C ,则二者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。电泳法与直接法比较 ,无论是HDL C或LDL C的测定均差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :F 公式计算LDL C不适宜临床应用。电泳法一步直接定量测定 4种脂蛋白胆固醇浓度 ,方法简便 ,适宜常规使用     

大鼠血清ApoA-I、LDL的分离和纯化

用沉淀法分离大鼠血清高密度脂蛋白(HDL),SephadexG—200层析纯化;将脱脂的HDL(ApoHDL)通过SephadexG—200柱层析得到单一的载脂蛋白A-I(ApoA-1)。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测定该ApoA-Ⅰ的表观分子量为27000道尔顿,其免疫学特征及化学组成分析结果与文献报道一致。同时用超速离心法分离制备出纯化的大鼠血清低密度脂蛋白(LDL)。     

人血清载脂蛋白A-I的分离纯化及其抗血清的制备

用超速离心法分得高密度脂蛋白,经琼脂糖平板电泳检定为一条区带。用甲醇/氯仿(1:2V/V)脱脂。然后经SephadexG-150层析及DEAE-纤维素(DE-52)离子交换柱所得蛋白在280nm有一吸收峰。做PAGE仅出现一条区带,电泳双扩散未见交叉沉淀线,说明所得载脂蛋白A-I(apoA-I)是纯的。PAGE测得分子量为28,000,其氯基酸组成与文献报道基本一致。用纯化的apoA-I免疫新西兰兔,获得效价为1:32的特异性抗人血清apoA-I抗血清。     

脂蛋白及载脂蛋白对脂蛋白受体作用的研究——Ⅰ.一步超速离心分离血清VLD.LDL及部分HDL和LDS

本文报道一步超速离心分离VLDI、LDL、HDL和LDS的方法,该方法既不同于国外Havel的分步顺序超速离心法,又不同于国内DS沉淀合并密度梯度区带超速离心。只是利用区带头设计的优点,不用密度梯度液,仅将样品密度调高,这样可以避免长时间离心及使用KBr给脂蛋白带来的变化,分离样品量大、效果好、时间短、新鲜并具备生理功能,已成功地刚于脂蛋白受体研究达三年之久。     

我国人血清apoE的多态性及其表型的分布情况(简报)

载脂蛋白E(apoE)存在於血清乳糜微粒(cm)及其残体、极低密度脂蛋白(VLDL)和含有apoE的高密度脂蛋白(HDL-C)中,可与肝外组织apoB.E受体和肝组织的apoE受体结合。因此对上述脂蛋白及其中的胆固醇的代谢起到重要的调节作用。本文报道,我国人群apoE的多态形的种类和其表型的分布结果。 用作者已建立的快速密度梯度超速离心法分离纯化了人血清VLDL。脱脂、获apo VLDL,再以     

人血浆载脂蛋白CⅠ、CⅡ及CⅢ的分离与鉴定

作者利用超速离心法从人血浆分离、纯化极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDL脱脂后经葡聚糖凝胶层析及离子交换层析获得apoCⅠ、apoCⅡ及apoCⅢ的纯品。经等电聚焦电泳、免疫电泳、免疫双扩散、酶联免疫及放射免疫鉴定,其纯度符合要求。作者等已用此纯品免疫动物获得特异的单价抗血清,在国内首次建立了人血清载脂蛋白CⅠ、CⅡ及CⅢ的免疫测定法。     

快速大量分离血浆低密度脂蛋白亚组分的方法

目的 :研究快速大量分离低密度脂蛋白亚组分的方法。方法 :通过2步超速离心法分离LDL亚组分 ,并用电泳法及电镜观察鉴定2种亚组分。结果 :仅用10h就将LDL亚组分分开 ,并证实经分离的2种亚组分为纯品。结论 :本方法是1种分离LDL亚组分较好方法     

家兔HDL的纯化和鉴定及其功能的初步研究

流行病学调查及动物实验结果均表明,高密度脂蛋白(HDL)具有抗动脉粥样硬化作用。作者为进一步了解HDL在细胞水平上的作用,建立了用密度梯度区带超速离心直接从新鲜家兔血清中分离纯化HDL的方法;将HDL加入正常及高脂血兔血清,观察低密度脂蛋白(LDL)通过平滑肌细胞(SMC)LDL受体的cpm,并分别与各自未加HDL组比较,以了解HDL在正常及高脂情况下对LDL受体的作用.     

超速离心密度梯度中间区带加样插入法进一步快速分离人血清脂蛋白

本文报告使用HITACHI80P—7系列制备型超速离心机,RP80T—3角度转子,溴化钠(NaBr)不连续密度梯度,密度范围1.00～1.30g/cm~3,采用中间区带加样插入法超离心技术,68000r/min(410.000g)离心3h,转子腔温态8℃,分离正常人血清脂蛋白,短时间一次分离即可获得血清脂蛋白VLDL、LDF、HOL、和LDS(缺乏     

血浆低密度脂蛋白亚组分分离及鉴定

目的 :探讨一种分离并鉴定低密度脂蛋白亚组分的方法。方法 :通过沉淀法分离LDL ,然后经过超速离心法分离其亚组分。并用电泳法、免疫扩散法及电镜观察鉴定两种亚组分。结果 :LDL亚组份在较短时间内分离并证实经分离的两种亚组分为纯品。结论 :本方法是一种分离和鉴定LDL亚组分较好方法     

甲状腺激素对血清脂类、脂蛋白胆固醇及~(125)I-LDL清除率的影响

观察了不同甲状腺功能状态下血清脂类、脂蛋白水平及对LDL清除率的影响。甲状腺素组的T-C,(VLDL+LDL)-C,TG及(VLDL+LDL)-C/HDL-C降低,HDL-C升高,~(125)I-LDL清除率增加。他巴唑组的T-C,(VLDL+LDL)-C,HDL-C,TG,及(VLDL+LDL)-C/HDL-C均升高,~(125)I-LDL清除率有下降趋势。提示体内甲状腺激素水平的变化对血清脂类及脂蛋白胆固醇的代谢有明显影响     

高效液相层析(HPLC)法分离纯化鸭血清主要载脂蛋白及其理化性质研究

北京鸭是不易形成实验性动脉粥样硬化(As)的动物模型,研究其载脂蛋白对于阐明北京鸭不易形成As的机制有重要意义。本实验先用密度梯度超速离心法从北京鸭血清中分离出纯的高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL);再低温脱脂得各脂蛋白的apos组分,即apoHDL,apoLDL和apoVLDL;然后用HPLC法直接分离apoHDL和apoVLDL.从apoHDL中获五种主要apo组分,经SDS-PAGE、糖基分析、氨基酸组成测定,确定这五种apo为apoA-Ⅰ、apoCⅢ_0.apoCⅢ_1和/或apoCⅢ_2、apoCs及可能的apoA-Ⅲ。apoA-Ⅰ和apoCⅢ_0的分子量分别为31000     

琼脂糖凝胶电泳法测定血清中各种脂蛋白胆固醇

目的：对琼脂糖凝胶电脉法同时测定血清极密度脂蛋白（VLDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）和脂蛋白（a)Lp(a）的胆固 即VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C含量的方法进行评价。方法：采用Helena REP全自动快速电泳系统分离血清VLDL,LDL,HDL和Lp(a),然后结合胆固醇染色法同时测定VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C的含量,分别了该法的精密度,准确度和干扰因素,并将该法与传统方法如测定HDL－C的磷钨酸－镁沉淀法（PTA－Mg2 )法,测定LDL－C的聚乙烯硫酸沉淀法（PVS法）及测定Lp(a)的免疫秀射比浊法（ITA法）进行比较,结果：电泳法测定VLDL－C,LDL－C和HLD－C批内CV分别为5．16％－7．46％,1.26％－3．28%,3．78－5．86％;批间CV分别为8．35％－11．25％,2．78％－4．08％,4．23％－6．36％。检测线性范围总胆固醇为94．3％和89．6。电泳法与传统法测定LDL－C,HDL－C的相关系数（r)分别为0．9609,0．9557,电泳法测定Lp(a)-C与ITA法测定Lq(a)的r为9235,以该法检测北京地区98例健康人,HDL－C,VLDL－C,LDL－C,Lp(a)－C参考范围分别为0．95－2．10mmol/L,0.07-0.46mmol/L,1.77-2.87mmol/L,0-0.22mmol/L。结论：电泳法测定值与传统法一致,电泳法操作简便,快速经济,可同时测定4种脂蛋白胆固醇,适合于临床常规及研究使用。     

聚焦导析法分离人血清载脂蛋白CⅢ亚型

用密度梯度超速离心法,从混合人血清中分离极低密脂蛋白,经脱脂后再进行聚焦层析分离其中的载脂蛋白。     

脂质代谢紊乱患者血清脂蛋白氧化易感性的研究

目的：比较分析脂质代谢紊乱患者血清脂蛋白氧化易感性以及高密度脂蛋白（HDL）对低密度脂蛋白（LDL）氧化抑制能力。方法：采用密度梯度超速离心分离45例肾衰（CRF）、33例心肌梗死（MIS）、33例脑梗死（CI）和53例2型糖尿病（DM）患者的血清脂蛋白组分（VLDL,LDL,HDL）,用硫代巴比妥酸值（TBARS）分析脂（CI）和53例2型糖尿病（DM）患者的血清脂蛋白组分(VLDL,LDL,HDL),用硫代巴比妥酸值（TBARS）分析脂蛋白脂质过氧化程度,A234nm光吸收检测脂蛋白共轭双烯含量分析脂蛋白的氧化易感性,并与正常人（44例）进行了比较。结果：所有患者组VLDL的TBARS值均明显高于对照组,其中MIS组增高程度最为显著（与对照组相比,P＜0.001）;MIS组和DM组LDL、CI组和DM组HDL的TBARX值增高;患者组VLDL、DLD的氧化延滞时间也显著缩短,DM组缩短最为明显;但各组HDL与对照组相比无差异;此外患者组HDL对LDL氧化抑制能力均明显减弱,CRF组和MIS组减弱最为显著。结论：各种脂质代谢紊乱患者体内血浆脂蛋白均发生一定程度的氧化修饰,促进了动脉粥样硬化的发生发展。     

人血清载脂蛋白CⅠ酶联免疫测定法的研究

载脂蛋白CⅡ(apo CⅡ)主要存在于乳糜微粒及VLDL之中,是脂蛋白脂酶不可缺少的激活剂,在富含甘油三酯的脂蛋白(乳糜微粒及VLDL)的代谢中具有特别重要的作用。作者采用超速离心和SephadexG-75以及DEAE-Sephacel层析由人血浆制备纯化的apo CⅡ,建立了一种特异、灵敏、简便的人血清apo CⅡ竞争性酶免疫测定法(Competitive En-zyme Immunoassay,CEIA)。单价特异抗体由免     

高密度脂蛋白的临床意义

脂蛋白是由脂质[包括胆固醇(Ch)、甘油三酯(TG)和磷脂(PL)等]和某些特异的蛋白质——载脂蛋白(APO)所组成的生物高分子复合物,由于脂质和载脂蛋白的成分不是均一相同的,因此可用适当方法将脂蛋白分离分类。脂蛋白以超速离心法按其密度大小可分为四种,即乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。由于这四种脂蛋白所带的电荷不同,因而它们在电泳中的表现也不一样,CM位于原点,而VLDL、LDL和HDL分别位于前β、β和α脂蛋白位置。自1976年Miller等提出,血清HDL降低可能是冠心病(CHD)的危险因子以来,引起人们对HDL的关注和研究兴趣。近年来对HDL的组成、结